SEC—MALLS技术中示差常数校正方法的研究

苟琼心 王秦龙

摘要：目的：探索激光检测器和示差检测器联用技术中示差常数的测定方法。方法：通过SEC-MALLS技术测定示差检测器的示差常数，再通过标准物质对示差常数进行确认。结果：用该方法校正得到的示差常数带入软件系统，得到了分子量结果与分子量分布准确、可靠。结论：用该方法校正得到的示差常数适用于SEC-MALLS法测定羟乙基淀粉130/0.4的重均分子量和分子量分布。

关键词：激光常数 示差常数 分子量 高效液相色谱仪

羟乙基淀粉130/0.4（Hydroxyethyl starch 130/0.4，HES）是一类胶体性血容量扩充剂，主要用以扩充血容量，改善微循环[1，2]。羟乙基淀粉在体内的扩容强度主要取决于重均分子量及分子量分布[3]，而示差常数是准确测定重均分子量和分子量分布的关键常数。SEC-MALLS法中当激光光散射仪与分子排阻色谱联用时，分子排阻色谱实现不同分子量高聚物分子的分离，分子按大小顺序依次进入十八角度激光光散射仪确定分子量[4]，绘制出分子量分布图，直接测定出绝对重均分子量及分子量分布，能快速、准确地测定物质的重均分子量及分子量分布[5]。不过要得到准确可靠的检测结果，首先要保证示差检测器示差常数的准确可靠。

本文主要对SEC-MALLS法示差常数的校正进行研究，并用校正好的常数测定羟乙基淀粉130/0.4标准样品的重均分子量及分子量分布，从而证明该方法测得的示差常数能够准确可靠的测定分子量，适用于羟乙基淀粉的重均分子量及分子量分布检测。

1 示差折光常数

1.1 仪器。Wyatt DAWN HELEOS-Ⅱ十八角度激光光散射仪（怀雅特）；Agilent 1200型高效液相色谱仪（安捷伦）；XS205电子天平（d=0.01mg，梅特勒-托利多）。

1.2 器具和试剂。注射器（塑料）、过滤头、氯化钠（分析纯）、纯化水、烘箱、称量瓶。

1.3 氯化钠标准溶液。取经105℃干燥5小时基准氯化钠适量，精密称定，加水溶解并稀释至刻度，依次配得0.1mg/ml、0.2mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml浓度的氯化钠标准溶液。

1.4 示差常数的采集。用纯化水冲洗示差检测器的参比池与检测池，至基线稳定，依次将纯化水、氯化钠标准溶液（浓度从小到大）、纯化水注入示差检测器。

1.5 结果的查看。通过软件操作，在concentration栏中输入相应的标准溶液浓度，最后在known dn/dc（mg/g）中输入氯化钠水溶液的dn/dc值（0.174）后在Report（summary）中查看结果。具体图谱如图1、图2。

1.6 重复以上测量试验三次，查看线性关系（R2应大于等于0.999），求平均值，确定示差常数。结果见表1。

2 标准品核对

2.1 色谱条件：色谱柱：TSKgel G4000pwxl（30cm*

7.8mm）；仪器：高效液相色谱仪和激光检测器；流动相：以醋酸盐缓冲液（18.7g醋酸钠和34.5ml冰醋酸，加水使溶解并稀释至5L）为流动相，流速：0.5ml/min-1；柱温：30℃；进样体积：20μl。

2.2 供试品溶液：用流动相配制3mg/ml羟乙基淀粉130/0.4的标准物质，滤过。进样20μl，记录色谱图。（图3）

2.3 重复进样3次，记录所得数据，结果见表2。

3 结论

通过测定羟乙基淀粉标准样品的重均分子量及分子量分布，发现测得的结果与理论参考结果一致。证明用该方法测得的示差常数适用于SEC-MALLS技术测定羟乙基淀粉、蛋白类等高分子物质的分子量及分子量分布。

参考文献：

[1]宋彦会，杜中海，于鹏，等.SEC-MALLS法测定羟乙基淀粉130/0.4重均分子量及分子量分布[J].齐鲁药事，2012，31（3）：155-157.

[2]孙桂斌，杭太俊.羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液相对分子质量及分布的测定[J].药物分析杂志，2009，29（10）：1643-1645.

[3]罗逸，刘菊蓉，郭兴蓬，等.合成产物羟乙基淀粉主要质控指标研究[J].药物分析杂志，2004，24（3）：296-298.

[4]邵明立，马晓伟，于文明，等.《中华人民共和国药典》二部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：附录37-38.

[5]左榘主编.激光散射原理及在高分子科学中的应用[M].郑州：河南科学出版社，1994：48-229.