张荣胜++戴秀华++陈志谊
摘要:在不同时期喷施解淀粉芽孢杆菌Lx-11,研究生防菌Lx-11对水稻细菌性条斑病的防治效果。试验结果表明,生防菌Lx-11具有一定的内吸作用,保护作用下对水稻细菌性条斑病的防效为62.7%,显著高于治疗作用下的防效;生防菌Lx-11防治水稻条斑病的最佳防治时期为初发病期。
关键词:解淀粉芽孢杆菌;水稻;细菌性条斑病;防治效果
中图分类号: S435.111.4+9文献标志码: A文章编号:1002-1302(2014)10-0115-02
收稿日期:2013-12-20
基金项目:公益性行业(农业)科研专项(编号:201303015、201103002-3);江苏省自然科学基金(编号:BK20130713);江苏省农业科技自主创新资金[编号:CX(12)3058]。
作者简介:张荣胜( 1982—),男,江苏泗洪人,助理研究员,主要从事水稻细菌病害生物防治研究。E-mail:r_szhang@163.com。
通信作者:陈志谊,研究员,主要从事水稻病害生物防治研究。E-mail:chzy@jaas.ac.cn。水稻细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS)由稻黄单胞菌稻生致病变种(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola,Xooc)引起,在我国南方和东南亚稻区都有发生,气候适宜时可导致水稻减产15%~25%,严重时可达40%~60%,对水稻的安全生产造成严重威胁[1-2]。目前,生产上还未选育出对水稻细菌性条斑病具有抗性的品种,病害防治主要以噻唑类杀菌剂为主,对条斑病的防效仅为50%~60%[3]。
利用有益微生物防治植物病害具有广阔的应用前景,目前生防菌剂应用以活菌制剂为主,在使用过程中受环境因子和土居微生物等多因素制约,影响防治效果。生防菌在植株上定殖是直接影响生防菌防效的关键因子,人们通过调控寄主根围或叶围微生物的组成及数量变化,恶化病原菌的生存微环境,从而抑制或减轻病害,达到促进作物生长的目的[4-6]。B. subtilis SQR9和内生菌B3-7能分别在黄瓜和小麦根系定殖成为优势种,有效防治黄瓜枯萎病和小麦全蚀病[7-8];通过采摘前和采摘后使用Bacillus spp.分别处理苹果叶片和果实,可以有效减少斑点病和炭疽病的发生[9]。解淀粉芽孢杆菌Lx-11对水稻细菌性条斑病具有良好的防效[10]。试验通过不同时期喷施解淀粉芽孢杆菌Lx-11,研究该生防菌对水稻细菌性条斑病的防治效果,并进一步探索生防菌Lx-11的使用适期,以为其田间高效应用提供科学依据。
1材料与方法
1.1试验材料
供试水稻品种为金刚30,为感病品种。供试菌株为生防菌Lx-11、Xooc b5-16,由江苏省农业科学院植物保护研究所生物防治研究室提供,Lx-11菌株用YPG培养基(胰蛋白胨5.0 g,葡萄糖5.0 g,酵母膏5.0 g,水1 000 mL,pH值7.0)或固体培养基YPGA(在YPG培养基基础上再加入20 g琼脂)培养,Xooc b5-16菌株用协本氏培养基[11]培养。供试药剂为20%噻枯唑可湿性粉剂,惠州市中迅化工有限公司生产。
1.2接种时间和接种方法
水稻移栽后60 d左右,采用针刺法接种病原菌。挑取1环新鲜活化的Xoocb5-16,转接到50 mL培养液中,28 ℃、150 r/min 振荡培养24 h,稀释100倍,孢子浓度约为 107 CFU/mL;蘸取稀释病原菌液的接种针穿刺水稻叶片中间部位,每处理接种6穴水稻24张叶片。
1.3生防菌Lx-11菌液制备
从保存菌株Lx-11的试管中挑取1环在YPGA斜面上活化,于28 ℃培养箱中培养24 h,即得到新鲜活化的Lx-11菌株;挑取1环转接到含有330 mL YPG培养基的1 L三角瓶中,28 ℃、150 r/min条件下培养48 h,此时菌含量为 109 CFU/mL。
1.4脂肽类粗提物的提取
将发酵液于10 000×g 冷冻离心15 min;取20 mL上清液置于离心管中,25 ℃真空浓缩干燥;在干燥样品中加入 2 mL 70%甲醇水溶液提取20 min,10 000×g冷冻离心 5 min 获得甲醇提取液;提取液经0.22 μm 尼龙树脂过滤,滤液即为脂肽类抗菌物质的粗提液,在4 ℃冰箱保存待用。
1.5生防菌Lx-11和脂肽类粗提物不同喷施时期防效测定
分别于喷施生防菌Lx-11前2 d(水渍状病斑出现,治疗作用)、喷施生防菌0 d(喷施水稻中下部位,接种水稻上部叶片,内吸作用)和喷施生防菌后1 d(保护作用)接种病原菌Xooc b5-16。喷施Lx-11菌液的浓度为108 CFU/mL,每处理喷雾量40 mL菌液,以喷施空白培养液为对照。喷施生防菌 14 d 后测量条斑病病斑大小,计算防效,公式为:防效=(对照区病斑长度-处理区病斑长度)/对照区病斑长度×100%。
1.6生防菌Lx-11防治细菌性条斑病田间试验
田间小区试验于2013年分别在江苏省泗阳县高渡镇和三庄乡丰产试验田中进行,水稻品种分别为II优0293和Y两优808,均为感病品种。试验小区面积为20 m2,每处理重复3次,小区随机排列。Lx-11发酵液由江苏省苏科农化有限公司发酵制成,发酵液菌含量为6×109 CFU/mL;田间用量为7.5 L/hm2,使用浓度为6×107 CFU/mL。在水稻细菌性条斑病自然发病初期、田间零星发病时施药,间隔10 d左右进行第2次施药防治,施药前和初次施药后21 d,参考张荣胜等分级标准[12],调查各处理叶片的病情指数,统计防效。每小区随机选取4点,每点5穴,调查水稻植株分蘖最上部3张叶片。病情指数和防效计算公式分别为:病情指数= (各级发病数×各级代表值)/(调查总叶片数×最高级代表值)×100%;防效=[1-(处理区药后病情指数×对照区药前病情指数)/(处理区药前病情指数×对照区药后病情指数)]×100%。
1.7数据分析
利用DPS 7.05软件Duncans新复极差法进行统计分析。
2结果与分析
2.1生防菌Lx-11对水稻细菌性条斑病的防效
由表1可见,生防菌Lx-11、脂肽类粗提物在保护作用下,对水稻细菌性条斑病的防效分别为62.7%、47.8%,显著高于治疗作用下的防效,生防菌Lx-11和脂肽类粗提物对水稻细菌性条斑病的防治以保护作用为主,兼顾治疗作用;生防菌Lx-11和脂肽类粗提物具有一定的内吸作用,对水稻细菌性条斑病的防效分别为37.8%、36.4%,均低于保护作用和治疗作用下的防效。
表1生防菌Lx 11 和脂肽类粗提物对水稻细菌性条斑病的防效
处理防效(%)Lx-11脂肽类粗提物喷施生防菌Lx-11后1 d(保护作用)62.7a47.8a喷施生防菌Lx-11前2 d(治疗作用)45.1b44.7b喷施生防菌Lx-11前0 d(内吸作用)37.8b36.4b注:同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<005)。表2同。
2.2生防菌Lx-11防治水稻细菌性条斑病的田间试验
由表2可见,2013年在泗阳县2个乡镇使用生防菌 Lx-11 防治水稻细菌性条斑病的田间防效分别为600%、619%,显著高于20%噻枯唑可湿性粉剂对水稻细菌性条斑病的防效。可见生防菌Lx-11在生产中可以替代或部分替代化学农药来防治水稻细菌性条斑病。
表2生防菌Lx-11防治水稻细菌性条斑病的田间防效
处理泗阳县不同地区的田间防效 (%)高渡镇三庄乡生防菌Lx-1161.9a60.0a20%噻枯唑可湿性粉剂55.7b47.2b
3结论
试验结果表明,接种病原菌前1 d喷施生防菌Lx-11对水稻细菌性条斑病的防治效果最好,防效为62.7%;当病斑初现时即接种病原菌后2 d再喷施生防菌,防效为45.1%。推测这与水稻细菌性条斑病病菌侵染特性有关,该病菌侵染水稻叶片主要通过气孔和伤口侵入,在水稻薄壁组织细胞间隙繁殖扩展[1],引起病害迅速蔓延,接种病原菌后2 d再喷施生防菌,由于病原菌进入植株体内并扩展,很难起到较好的防治效果。因此,田间应用生防菌Lx-11防治水稻细菌性条斑病,最适喷施期应在田间零星发病时,及时大量喷施生防菌Lx-11,利用生防菌占领侵染位点、分泌抗菌物质、抑制病原菌生长繁殖、诱导寄主植株产生抗病性[12-13]等来减轻病原菌为害。Jourdan等研究表明,根围促生菌和产生的脂肽类物质能诱导寄主植株产生ISR抵御病原菌入侵[14-15]。本试验研究表明,生防菌Lx-11能够诱导水稻植株产生系统抗病性,生防菌和脂肽类粗提物都具有一定的内吸作用,脂肽类物质能通过诱导水稻防卫反应基因表达,表现出对水稻细菌性条斑病有一定的防治效果,防效低于40%。田间试验显示,在病害初现期使用生防菌Lx-11,能够有效地防治水稻细菌性条斑病,防效显著高于常用化学药剂噻枯唑。
参考文献:
[1]Nio-Liu D,Ronald P C,Bogdanove A J.Xanthomonas oryzae pathovars:model pathogens of a model crop[J]. Molecular Plant Pathology,2006,7(5):303-324.
[2]郑景生,李义珍,方宣钧. 水稻第2染色体上细菌性条斑病抗性QTL的检测[J]. 中国农业科学,2005,38(9):1923-1925.
[3]邢家华,何荣林,张纯标,等. 20%噻森铜悬浮剂对水稻白叶枯病和细菌性条斑病的田间防效[J]. 浙江农业科学,2007(5):567-568.
[4]李湘民,许志刚,Mew T W. 稻株上拮抗细菌的定殖及其对土著细菌的影响[J]. 生态学报,2008,28(8):3868-3874.
[5]尹丹韩,高观朋,夏飞,等. 生防菌哈茨木霉T4对黄瓜根围土壤细菌群落的影响[J]. 中国农业科学,2012,45(2):246-254.
[6]殷幼平,袁训娥,李强,等. 生防菌枯草芽孢杆菌CQBS03的绿色荧光蛋白基因标记及其在柑橘叶片上的定殖[J]. 中国农业科学,2010,43(17):3555-3563.
[7]Cao Y,Zhang Z H,Ling N,et al. Bacillus subtilis SQR 9 can control Fusarium wilt in cucumber by colonizing plant roots[J]. Biology and Fertility of Soils,2011,47(5):495-506.
[8]王刚,刘凤英,王淼,等. 内生细菌B3-7的运动性参与其在小麦根系的内生定殖和对小麦全蚀病的生物防治[J]. 植物病理学报,2011,41(5):526-533.
[9]Poleatewich A M,Ngugi H K,Backman P A. Assessment of application timing of Bacillus spp.to suppress pre-and post-harvest diseases of apple[J]. Plant Disease,2012,96(2):211-220.
[10]张荣胜,刘永锋,陈志谊. 水稻细菌性条斑病菌拮抗细菌的筛选、评价与应用研究[J]. 中国生物防治学报,2011,27(4):510-514.
[11]沈素文,刘永锋,周苏津,等. 4株拮抗细菌与链霉素、叶枯唑协同控制水稻细菌性条斑病研究[J]. 江苏农业科学,2010(4):98-100.
[12]Zhang R S,Liu Y F,Luo C P,et al. Baillus amyloliquefaciens Lx-11—a potential biocontrol agent against rice bacterial leaf streak[J]. Journal of Plant Pathology,2012,94(3):609-619.
[13]张荣胜,王晓宇,罗楚平,等. 解淀粉芽孢杆菌Lx-11产脂肽类物质鉴定及表面活性素对水稻细菌性条斑病的防治作用[J]. 中国农业科学,2013,46(10):2014-2021.
[14]Jourdan E,Henry G,Duby F,et al. Insights into the defense-related events occurring in plant cells following perception of surfactin-type lipopeptide from Bacillus subtilis[J]. Molecular Plant-Microbe Interactions,2009,22(4):456-468.
[15]Henry G,Deleu M,Jourdan E,et al. The bacterial lipopeptide surfactin targets the lipid fraction of the plant plasma membrane to trigger immune-related defence responses[J]. Cellular Microbiology,2011,13(11):1824-1837.
1.7数据分析
利用DPS 7.05软件Duncans新复极差法进行统计分析。
2结果与分析
2.1生防菌Lx-11对水稻细菌性条斑病的防效
由表1可见,生防菌Lx-11、脂肽类粗提物在保护作用下,对水稻细菌性条斑病的防效分别为62.7%、47.8%,显著高于治疗作用下的防效,生防菌Lx-11和脂肽类粗提物对水稻细菌性条斑病的防治以保护作用为主,兼顾治疗作用;生防菌Lx-11和脂肽类粗提物具有一定的内吸作用,对水稻细菌性条斑病的防效分别为37.8%、36.4%,均低于保护作用和治疗作用下的防效。
表1生防菌Lx 11 和脂肽类粗提物对水稻细菌性条斑病的防效
处理防效(%)Lx-11脂肽类粗提物喷施生防菌Lx-11后1 d(保护作用)62.7a47.8a喷施生防菌Lx-11前2 d(治疗作用)45.1b44.7b喷施生防菌Lx-11前0 d(内吸作用)37.8b36.4b注:同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<005)。表2同。
2.2生防菌Lx-11防治水稻细菌性条斑病的田间试验
由表2可见,2013年在泗阳县2个乡镇使用生防菌 Lx-11 防治水稻细菌性条斑病的田间防效分别为600%、619%,显著高于20%噻枯唑可湿性粉剂对水稻细菌性条斑病的防效。可见生防菌Lx-11在生产中可以替代或部分替代化学农药来防治水稻细菌性条斑病。
表2生防菌Lx-11防治水稻细菌性条斑病的田间防效
处理泗阳县不同地区的田间防效 (%)高渡镇三庄乡生防菌Lx-1161.9a60.0a20%噻枯唑可湿性粉剂55.7b47.2b
3结论
试验结果表明,接种病原菌前1 d喷施生防菌Lx-11对水稻细菌性条斑病的防治效果最好,防效为62.7%;当病斑初现时即接种病原菌后2 d再喷施生防菌,防效为45.1%。推测这与水稻细菌性条斑病病菌侵染特性有关,该病菌侵染水稻叶片主要通过气孔和伤口侵入,在水稻薄壁组织细胞间隙繁殖扩展[1],引起病害迅速蔓延,接种病原菌后2 d再喷施生防菌,由于病原菌进入植株体内并扩展,很难起到较好的防治效果。因此,田间应用生防菌Lx-11防治水稻细菌性条斑病,最适喷施期应在田间零星发病时,及时大量喷施生防菌Lx-11,利用生防菌占领侵染位点、分泌抗菌物质、抑制病原菌生长繁殖、诱导寄主植株产生抗病性[12-13]等来减轻病原菌为害。Jourdan等研究表明,根围促生菌和产生的脂肽类物质能诱导寄主植株产生ISR抵御病原菌入侵[14-15]。本试验研究表明,生防菌Lx-11能够诱导水稻植株产生系统抗病性,生防菌和脂肽类粗提物都具有一定的内吸作用,脂肽类物质能通过诱导水稻防卫反应基因表达,表现出对水稻细菌性条斑病有一定的防治效果,防效低于40%。田间试验显示,在病害初现期使用生防菌Lx-11,能够有效地防治水稻细菌性条斑病,防效显著高于常用化学药剂噻枯唑。
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[15]Henry G,Deleu M,Jourdan E,et al. The bacterial lipopeptide surfactin targets the lipid fraction of the plant plasma membrane to trigger immune-related defence responses[J]. Cellular Microbiology,2011,13(11):1824-1837.
1.7数据分析
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2结果与分析
2.1生防菌Lx-11对水稻细菌性条斑病的防效
由表1可见,生防菌Lx-11、脂肽类粗提物在保护作用下,对水稻细菌性条斑病的防效分别为62.7%、47.8%,显著高于治疗作用下的防效,生防菌Lx-11和脂肽类粗提物对水稻细菌性条斑病的防治以保护作用为主,兼顾治疗作用;生防菌Lx-11和脂肽类粗提物具有一定的内吸作用,对水稻细菌性条斑病的防效分别为37.8%、36.4%,均低于保护作用和治疗作用下的防效。
表1生防菌Lx 11 和脂肽类粗提物对水稻细菌性条斑病的防效
处理防效(%)Lx-11脂肽类粗提物喷施生防菌Lx-11后1 d(保护作用)62.7a47.8a喷施生防菌Lx-11前2 d(治疗作用)45.1b44.7b喷施生防菌Lx-11前0 d(内吸作用)37.8b36.4b注:同列数据后不同小写字母表示差异显著(P<005)。表2同。
2.2生防菌Lx-11防治水稻细菌性条斑病的田间试验
由表2可见,2013年在泗阳县2个乡镇使用生防菌 Lx-11 防治水稻细菌性条斑病的田间防效分别为600%、619%,显著高于20%噻枯唑可湿性粉剂对水稻细菌性条斑病的防效。可见生防菌Lx-11在生产中可以替代或部分替代化学农药来防治水稻细菌性条斑病。
表2生防菌Lx-11防治水稻细菌性条斑病的田间防效
处理泗阳县不同地区的田间防效 (%)高渡镇三庄乡生防菌Lx-1161.9a60.0a20%噻枯唑可湿性粉剂55.7b47.2b
3结论
试验结果表明,接种病原菌前1 d喷施生防菌Lx-11对水稻细菌性条斑病的防治效果最好,防效为62.7%;当病斑初现时即接种病原菌后2 d再喷施生防菌,防效为45.1%。推测这与水稻细菌性条斑病病菌侵染特性有关,该病菌侵染水稻叶片主要通过气孔和伤口侵入,在水稻薄壁组织细胞间隙繁殖扩展[1],引起病害迅速蔓延,接种病原菌后2 d再喷施生防菌,由于病原菌进入植株体内并扩展,很难起到较好的防治效果。因此,田间应用生防菌Lx-11防治水稻细菌性条斑病,最适喷施期应在田间零星发病时,及时大量喷施生防菌Lx-11,利用生防菌占领侵染位点、分泌抗菌物质、抑制病原菌生长繁殖、诱导寄主植株产生抗病性[12-13]等来减轻病原菌为害。Jourdan等研究表明,根围促生菌和产生的脂肽类物质能诱导寄主植株产生ISR抵御病原菌入侵[14-15]。本试验研究表明,生防菌Lx-11能够诱导水稻植株产生系统抗病性,生防菌和脂肽类粗提物都具有一定的内吸作用,脂肽类物质能通过诱导水稻防卫反应基因表达,表现出对水稻细菌性条斑病有一定的防治效果,防效低于40%。田间试验显示,在病害初现期使用生防菌Lx-11,能够有效地防治水稻细菌性条斑病,防效显著高于常用化学药剂噻枯唑。
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