珠蛋白生成障碍性贫血基因型与红细胞参数的关系研究

邹林，黄杰，简咏芬，陈尚花，周少雄（广东省佛山市第二人民医院检验科 528000）

珠蛋白生成障碍性贫血（地贫）是一种危害极大的单基因遗传性疾病，其临床最常见的类型有α地贫与β地贫2种。广东和广西人群中α与β地贫基因携带率分别高达11.07%和23.98%［1－2］。严重类型（包括重型和中间型）α与β地贫均为致死性或致残性血液病，目前尚无理想的治愈方法，给家庭和社会带来沉重负担。夫妇双方若同为轻型地贫（即地贫基因携带者），子代遗传概率中1／4为正常胎儿，1／2为轻型地贫（同父母一样），1／4为重型地贫患者。地贫的遗传与性别无关，发病概率均等。因此，开展地贫筛查，指导高风险夫妇在怀孕后特定时期进行产前诊断，是防止重型地贫儿出生，达到优生优育的重要措施。本文通过回顾性分析各种地贫基因型和红细胞参数资料，阐明两者间的关系，为临床通过基因型预测该病的临床表现和进程及预后提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2012年2月至2013年6月佛山市第二人民医院经基因诊断确诊的地贫基因携带者为研究对象，其中α地贫315例，根据其缺失α基因个数分3组，缺失1个基因者为A组，缺失2个基因者为B组，缺失3个基因者为C组。A组68例（－α3.747例，－α4.221例），B组201例，C组46例（－－SEA／－α3.7：27例，－－SEA／－α4.2：19例）。β地贫165例，其中CD41－42杂合子63例，IVS2nt654杂合子42例，－28杂合子26例，CD17杂合子21例，其他少见类型13例。αβ复合型贫26例。随机选取100名健康体检者作为对照组。所有研究对象年龄均在18～55岁。

1.2 检测方法

1.2.1 采血使用基因诊断的真空采血管，用枸橼酸钠或乙二胺四乙酸抗凝全血提取DNA，不可用肝素抗凝全血，及时送检或置2～8℃冰箱中并于5d内检测，或在－20℃存放1个月以内检测。

1.2.2 方法采用XT－5000全自动血细胞分析仪进行血常规分析。α－地贫采用跨越断裂点的聚合酶链反应（PCR）技术（也称裂口PCR，gap－PCR），检测东南亚型缺失（－－SEA），右侧缺失（－α3.7），左侧缺失（－α4.2）。β－地贫采用PCR－膜反向点杂交技术（RDB）检测17种基因位点突变，分别是CD41－42、IVS2nt654、－28、CD71－72、CD17、βE、CD31、CD27／28、IVS1－1、CD43、－32、－29、－30、CD14－15、CAP、Int、IVS1－5。

1.3 统计学处理使用SPSS17.0统计软件进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用SNK 检验，基因型和红细胞参数相关性采用Pearson 相关性分析，以α＝0.05为检验水准，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 α地贫基因型组间红细胞参数的比较缺失不同个数的α地贫基因携带者均表现为不同程度的小细胞低色素性贫血。随着缺失基因个数的增多，红细胞（RBC）数量呈上升趋势A＜B＜C，血红蛋白（Hb）与红细胞3个平均指数［平均红细胞血红蛋白（MCH）、平均红细胞容积（MCV）、平均血红蛋白浓度（MCHC）］呈下降趋势显示A＞B＞C，而描述红细胞体积异质性的红细胞分布宽度（RDW－CV）呈上升趋势A＜B＜C。表3显示缺失1个α基因的A组两个亚型：右侧缺失（－α3.7），左侧缺失（－α4.2）各项指标差异均无统计学意义。表2显示缺失3个α基因的C组两个亚型（－－SEA／－α3.7）与（－－SEA／－α4.2）各项指标差异也均无统计学意义（P＞0.05）。采用Pearson相关性分析α基因缺失个数与红细胞参数的相关性显示：α基因缺失个数与RBC 及RDW－CV呈正相关（r分别为0.872，0.561，P＜0.05），与Hb、MCV、MCH、MCHC呈负相关（r分别为－0.708，－0.901，－0.826，－0.735，P＜0.05）。

2.2 β地贫基因型组间红细胞参数的比较通过对中国人群最常见的4种β地贫基因型及αβ复合型的统计学分析比较，结果见表4。显示RBC，MCHC，RDW－CV 各组间差异无统计学意义（P＞0.05），而Hb、MCV、MCH 在各组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。其中－28位点突变的β地贫在Hb，MCV，MCH，MCHC 4个参数值高于其他β地贫组。RBC－CV显示αβ复合型体积异质性最大。

表1 不同α地贫基因型组别间红细胞参数的比较（）

表1 不同α地贫基因型组别间红细胞参数的比较（）

表2 不同α地贫基因型A组亚型间红细胞参数的比较（）

表2 不同α地贫基因型A组亚型间红细胞参数的比较（）

表3 不同α地贫基因型C组亚型间红细胞参数的比较（）

表3 不同α地贫基因型C组亚型间红细胞参数的比较（）

表4 不同β地贫基因型组别间红细胞参数的比较（）

表4 不同β地贫基因型组别间红细胞参数的比较（）

续表4 不同β地贫基因型组别间红细胞参数的比较（）

续表4 不同β地贫基因型组别间红细胞参数的比较（）

3 讨论

本研究分别对α地贫各种基因型与红细胞参数的关系，以及中国人群最常见的4种β地贫基因型与红细胞参数的关系进行了回顾性的分析。

α地贫的分子基础是α2和α1基因缺失或发生点突变，使α－珠蛋白产量下降，胎儿体内过多的γ－珠蛋白形成Hb Bart′s或成人体内过多的β－珠蛋白形成Hb H，导致无效造血和红细胞被破坏。α地贫血以α－珠蛋白基因缺失为主，临床上分为静止型（α地贫2，缺失1α）；标准型（α地贫1，缺失2α）；中间型（Hb H 病，缺失3α）；重型（Hb Bart′s胎儿水肿综合征，缺失4α）。在中国主要是东南亚缺失型（－－SEA）；－－／αα（α地贫1）。α地贫则多为右侧缺失型（α－3.7）；－α／αα及左侧缺失型（－α－4.2）；－α／αα。α－地贫的点突变较少见，本文在收集资料的过程中暂未发现α－地贫的点突变的患者。在对α地贫各种基因型与红细胞参数的关系研究中发现，α珠蛋白基因缺陷的个数与RBC数目呈正相关，与反映RBC 体积异质性的RDW－CV 呈正相关；与Hb、MCV、MCH、MCHC则呈现负相关。这与同类研究中张永良等［3］，陈和平等［4］研究一致。也就是说α地贫的表型取决于α基因缺陷的基因型，其表型的严重程度与基因缺失个数密切相关。

人类β－珠蛋白基因位于11号染色体短臂1区2带（11p1.2），β地贫的病因主要是由于该基因的点突变，少数为基因缺失。目前世界范围内已报道200多种β基因突变类型，中国人中已发现34种，其中以CD17、CD41－42、IVS2nt654、－28等4种为热点突变，约占突变类型的90%［5－6］。本文对这最常见的4种突变进行了研究，结果显示，对于中国人群最常见的4种β地贫基因突变来说，所引起的血液学表型相差不大。其中－28位点突变引起的血液学表型变化相对稍轻一些。另外发现αβ复合型地贫与单纯的β地贫所引起的血液学表型变化并无大的差异。

另外从本研究可以发现，无论是α地贫、β地贫还是αβ复合型地贫，患者Hb降低，而RBC 数量升高，这有别于缺铁性贫血等其他类型贫血的血液学特征。其他学者也观察到了这一现象［3，7－9］，认为这种红细胞数量增多的现象是因为促红细胞生成素介导的反调节作用所致。在地贫患者的骨髓中，原始红细胞提高了Ca2＋和cAMP的水平从而使细胞外信号调节激酶1／2增多［10］

综上所述，本文通过对地贫患者不同基因型的血细胞参数变化特点进行分析，可以指导临床对该类患者进行快速准确的诊断，并及时的评价该类患者病情。

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