正交试验优化小儿止咳颗粒提取工艺研究*

广东省深圳市中医院 魏俊婷 何泰东 李曙光 张尚斌 (深圳518033)

小儿止咳颗粒是深圳市中医院在研医院制剂，处方由紫菀30 g，防风、百部、款冬花、陈皮、茯苓、前胡、桔梗、枳壳各10 g，麦冬、百合各25 g组成，用于治疗小儿呼吸道感染之发热、咳嗽、流涕、头痛等症状。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters Alliance e2695－2998 高效液相色谱仪(美国Waters 公司);Sartorius BP 211D型电子天平(十万分之一，德国Sartorius 公司)，BINDER ED53 烘箱(德国BINDER 公司)。

1.2 试药 紫菀等药材(购自深圳市华辉药业有限公司)，经深圳市中医院药检室检验，均符合药典标准;水为超纯水，甲醇为色谱纯 (德国Merck 公司);其他试剂为分析纯。紫菀酮对照品(批号110735－200501，中国药品生物制品检定所)。

2 方法与结果

2.1 紫菀酮的含量测定

2.1.1 色谱条件及系统适用性实验:ECOSIL C18 色谱柱(5 μm，250 mm×4.6 mm);流动相乙腈︰水=95︰5，流速1 mL/min;柱温:40℃，进样体积10 μL，检测波长为200 nm。系统适应性符合要求，理论塔板以紫菀酮峰计算不低于4 000。

2.1.2 对照品溶液的制备:取紫菀酮对照品0.01 006 g，精密称定，置100 mL 容量瓶，加乙腈溶解并稀释至刻度，即得对照品储备液，精密取对照品储备液5、2、1、1、1 mL 到10、10、10、25、50 mL，配制成 50.300、20.120、10.060、4.024、2.012 μg/mL 的系列对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备:取紫菀30 g，防风、陈皮、前胡、桔梗、枳壳各10 g，精密称定重量，按正交表回流提取，精密取相当于紫菀药材1 g 的提取液，水浴蒸干，残渣入甲醇溶解，转移至50 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，溶液经0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤液即为供试品溶液。

2.1.4 线性范围考察:取紫菀酮对照品溶液，按上述色谱条件进样，测定紫菀酮峰面积，以对照品浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，得回归方程Y=22 505X+932.1，r=0.999 5，表明紫菀酮在2.012 μg/mL～50.300 μg/mL 呈良好线性关系。

2.1.5 含量测定:按“2.1.3”方制备供试品，按“2.1.1”色谱条件进样，测定提取液中紫菀酮的含量。

2.2 干膏得率 取茯苓、百部、款冬花各10 g，麦冬、百合各25 g，精密称定重量，按正交表提取，精密取相当于药材10 g 的提取液，置干燥至恒重的蒸发皿，水浴浓缩至干，于105℃干燥至恒重，得干膏，精密称重干膏重量。求干膏得率。干膏得率(%)=干膏重量(g)/药材重量(g)×100%

2.3 醇提部分正交实验

2.3.1 正交试验及结果:以乙醇浓度、溶剂用量、提取次数、提取时间为因素进行正交实验，每个因素设3 个水平，见表1。以紫菀酮含量为指标，选用L9(34)正交表，不考虑交互作用，进行试验，试验安排及结果见表2，方差分析见表3。

表1 正交试验因素水平表

表2 正交实验及结果表

表3 醇提试验方差分析表

2.3.2 数据分析:由表2可知，各因素对紫菀酮含量值影响:A (乙醇浓度)＞C (提取次数)＞B (溶剂用量)＞D (提取时间)，各水平之间的趋势:A3＞A2＞A1，B1＞B2＞B3，C3＞C2＞C1，D1＞D2＞D3。D 因素影响值最小，以D 因素为误差项，进行方差分析，表3结果表明A 因素、C 因素不同水平对紫菀酮含量均有显著性，A2(60%乙醇)、C2(提取3 次)为最佳水平，B 因素、D 因素为无显著影响的因素，从节省时间和试剂方面考虑，选择B3(6 倍溶剂)、D1(提取1 h)，确定A2C2B3D1为最佳组合，即加6 倍量60%乙醇，提取3 次，每次1 h。

2.4 水提部分正交实验

2.4.1 正交试验及结果:以溶剂量、提取次数、提取时间为因素进行正交实验，每个因素设3 个水平，见表4。以干膏得率为指标，选用L9(34)正交表，不考虑交互作用，进行试验，试验安排及结果见表5，方差分析见表6。

2.4.2 数据分析:由表5可知，各因素对干膏得率值影响:B (提取次数)＞A (溶剂用量)＞C (提取时间)，各水平之间的趋势:B3＞B2＞B1，A1＞A2＞A3，C3＞C1＞C2。方差分析结果表明B 因素、A 因素不同水平对干膏得率值均有显著性，B3(提取3 次)、A1(16 倍溶剂)为最佳水平，C 因素为无显著影响的因素，从节省时间方面考虑，选择C1(提取1 h)，确定B3A1C3为最佳组合，即加16 倍量水，提取3 次，每次1 h。

表4 正交试验因素水平表

表5 正交实验及结果表

表6 水提试验方差分析表

2.5 验证实验 为验证选择的工艺的优劣，取处方量药材3 份，紫菀等按A2C2B3D1提取，即加6 倍量60% 乙醇，提取3 次，每次1 h。按“2.1.3”方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件，测定紫菀酮含量，茯苓等B3A1C3提取，即加16 倍量水，提取3 次，每次1 h，按“2.2”方法测得干膏得率，结果见表7。紫菀酮含量和出膏率均接近最大值，说明工艺合理稳定。

表7 验证结果表

3 讨论与结论

紫菀是小儿止咳颗粒的君药，具有润肺下气，消痰止咳功效，归肺经，用于痰多喘咳、新久咳嗽、劳嗽咳血。［1］紫菀酮是紫菀主要成分之一，［2］紫菀中紫菀酮的常规提取方法为乙醇提取法，也有文献报道［3－4］采用超临界CO2萃取提取法及微波辅助加压溶剂提取法，具有较好的提取效果，但因设备昂贵，难以实现工业化生产，故我们采用常规提取方法，即以乙醇为溶剂进行提取，并进行正交试验优化醇提工艺。其他药材采用水为溶剂进行提取，以干膏得率为指标进行正交试验。

本研究确定紫菀等药的最佳提取工艺为:A2C2B3D1，即加6 倍量60%乙醇，提取3 次，每次1 h。茯苓等药最佳提取工艺为:B3A1C3，即加16 倍量水，提取3 次，每次1 h。提取工艺经验证表明:结果准确可靠，工艺合理可行。本研究为小儿止咳颗粒的研制和生产提供了资料。

［1］中国药典委员会.中国药典(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.322

［2］卢艳花，戴岳，王峥涛，等.紫菀祛痰镇咳作用及其有效部位和有效成分［J］.中草药，1999，30 (5):360－362

［3］莫尚志，黄星，王峥涛，等.超临界CO2 萃取紫菀中紫菀酮的工艺研究［J］.中药材，2004，27 (9):676－679

［4］程存归，成则丰，刘幸海.紫菀中紫菀酮的微波辅助加压溶剂提取研究［J］.中国药学杂志，2006，41 (7):502－505