内生真菌次生代谢产物量与培养时间的关系

陈珣+杨镇+肖军等

摘要：从辽宁省西北地区根系土壤中分离得到No015号和No016号两株内生真菌，对其进行液体培养，从第5天开始，连续13 d进行次生代谢产物干物质重的测量。结果表明，液体培养10 d为两株内生真菌次生代谢产物产生的高峰期。

关键词：内生真菌；次生代谢产物；培养时间；高峰期

中图分类号：Q948.12 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）18-4286-02

植物内生菌（Endophyte）是一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌或细菌，其与宿主植物在长期的共进化过程中形成了一种稳定的互利共生关系[1]。植物内生菌能产生丰富多样的次级代谢产物，而且具有多种生理活性，如抗菌、抗病毒、杀虫、抗氧化等活性。因此，植物内生菌作为一种新的微生物资源引起了广泛的关注，从植物内生菌次级代谢产物中寻找和发现新的活性化合物已成为植物内生菌研究的一个热点[2]。但内生真菌次生代谢产物存在含量较低的问题，本试验通过两株内生真菌No015和No016的次级代谢产物量与培养时间的关系研究，旨在找到No015和No016两株内生真菌次级代谢产物产生的高峰期，以期获得更多的次级代谢产物，为两株内生真菌的进一步研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

内生真菌No015和No016由辽宁省农业科学院微生物工程中心从辽宁西北地区采集的根系土壤中分离并保存。

PA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，水定容至1 000 mL，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 内生真菌的分离纯化 参照文献[3]方法进行内生真菌的分离纯化。

1.2.2 内生真菌代谢产物的制备与干物质测量 将活化的内生真菌菌种No015和No016接种于装有100 mL PA培养基的三角瓶中，置于28 ℃、200 r/min的摇床培养，5 d后，连续13 d取样，抽提菌丝体代谢物，将菌丝体代谢物中加入等体积的20%乙醇，浸提24 h，过滤，滤液保存。将各滤液吸取1 mL，风干后测量干物质量。

2 结果与分析

2.1 No015内生真菌代谢产物的干物质测量

由图1可知，内生真菌No015液体培养10 d时产生的次生代谢产物量最高，5～10 d产生的次级代谢产物呈逐渐上升趋势，10～17 d产生的次生代谢产物呈逐渐下降趋势。这说明内生真菌No015液体培养10 d时是产生次级代谢产物的高峰时期。

2.2 No016内生真菌代谢产物的干物质测量

由图2可知，内生真菌No016也是液体培养10 d时产生的次生代谢产物量最高，同时，5～10 d产生的次级代谢产物也呈逐渐上升趋势，10～17 d产生的次生代谢产物也呈逐渐下降趋势。这说明内生真菌No016液体培养10 d时也是次级代谢产物产生的高峰时期。

3 小结与讨论

内生真菌生活在健康植物组织中，其群落生境特殊；而大量的植物又生活在特殊的环境（如高盐、干旱）中；因此，现在内生真菌已被视为一种开发天然产物的有效资源，而且已发现了多种对人类生活和健康有益的化合物。

内生真菌次生代谢产物十分丰富，在人类的生产生活中具有广阔的应用范围[3]。Schulz等[4]的研究表明，内生真菌和那些受其代谢产物和环境影响的生物两者互相影响，会产生更多的次级代谢产物。但由于内生真菌次生代谢产物含量较低，并且有些内生真菌次生代谢产物存在生物活性，这就对次生代谢产物的提取提出了新的要求[5]。

本试验通过研究两株内生真菌No015和No016的次级代谢产物量与培养时间的关系，从而找到No015和No016两株内生真菌次级代谢产物产生的高峰期，获得更多的次级代谢产物，为后期次级代谢产物的研究提供更多的数量保证。两株内生真菌次级代谢产物提取过程中，虽然5～10 d和10～17 d次级代谢产物增加和减少的程度不同，但都呈现先逐级增长后逐级减少的趋势。两株内生真菌均表现为在液体培养10 d时产生的次级代谢产物最多，这说明两株内生真菌次级代谢产物产生的高峰期均为10 d。两株内生真菌的次级代谢产物量和培养时间的关系摸索后，今后可以在液体培养10 d后进行两株内生真菌的次级代谢产物的提取工作。

参考文献：

[1] 邹文欣，谭仁祥.植物内生菌研究新进展[J].植物学报，2001，49（3）：881-892.

[2] 阮丽军，尚新艳，戈 梅，等.植物内生真菌HCCB00189代谢产物研究[J].植物新药杂志，2007，16（1）：52-55.

[3] HAWKSORTH D L， KIRK P M， SUTTON B C， et al.Ainsworth & Bisbys Dictionary of the fungi[M]. CAB International UK：Cambridge University Press，1995.

[4] SCHULZ B，BOYLE C，DRAEGER S，et al.Endophytic fungi：a source of novel biological active secondary metabolites[J].Myclogical Research，2002，106（9）：996-892.

[5] 金 鑫，吕长利，孙守慧，等.林木次生代谢产物提取方法的研究进展[J].中国森林病虫，2008，27（1）：31-34.

摘要：从辽宁省西北地区根系土壤中分离得到No015号和No016号两株内生真菌，对其进行液体培养，从第5天开始，连续13 d进行次生代谢产物干物质重的测量。结果表明，液体培养10 d为两株内生真菌次生代谢产物产生的高峰期。

关键词：内生真菌；次生代谢产物；培养时间；高峰期

中图分类号：Q948.12 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）18-4286-02

植物内生菌（Endophyte）是一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌或细菌，其与宿主植物在长期的共进化过程中形成了一种稳定的互利共生关系[1]。植物内生菌能产生丰富多样的次级代谢产物，而且具有多种生理活性，如抗菌、抗病毒、杀虫、抗氧化等活性。因此，植物内生菌作为一种新的微生物资源引起了广泛的关注，从植物内生菌次级代谢产物中寻找和发现新的活性化合物已成为植物内生菌研究的一个热点[2]。但内生真菌次生代谢产物存在含量较低的问题，本试验通过两株内生真菌No015和No016的次级代谢产物量与培养时间的关系研究，旨在找到No015和No016两株内生真菌次级代谢产物产生的高峰期，以期获得更多的次级代谢产物，为两株内生真菌的进一步研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

内生真菌No015和No016由辽宁省农业科学院微生物工程中心从辽宁西北地区采集的根系土壤中分离并保存。

PA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，水定容至1 000 mL，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 内生真菌的分离纯化 参照文献[3]方法进行内生真菌的分离纯化。

1.2.2 内生真菌代谢产物的制备与干物质测量 将活化的内生真菌菌种No015和No016接种于装有100 mL PA培养基的三角瓶中，置于28 ℃、200 r/min的摇床培养，5 d后，连续13 d取样，抽提菌丝体代谢物，将菌丝体代谢物中加入等体积的20%乙醇，浸提24 h，过滤，滤液保存。将各滤液吸取1 mL，风干后测量干物质量。

2 结果与分析

2.1 No015内生真菌代谢产物的干物质测量

由图1可知，内生真菌No015液体培养10 d时产生的次生代谢产物量最高，5～10 d产生的次级代谢产物呈逐渐上升趋势，10～17 d产生的次生代谢产物呈逐渐下降趋势。这说明内生真菌No015液体培养10 d时是产生次级代谢产物的高峰时期。

2.2 No016内生真菌代谢产物的干物质测量

由图2可知，内生真菌No016也是液体培养10 d时产生的次生代谢产物量最高，同时，5～10 d产生的次级代谢产物也呈逐渐上升趋势，10～17 d产生的次生代谢产物也呈逐渐下降趋势。这说明内生真菌No016液体培养10 d时也是次级代谢产物产生的高峰时期。

3 小结与讨论

内生真菌生活在健康植物组织中，其群落生境特殊；而大量的植物又生活在特殊的环境（如高盐、干旱）中；因此，现在内生真菌已被视为一种开发天然产物的有效资源，而且已发现了多种对人类生活和健康有益的化合物。

内生真菌次生代谢产物十分丰富，在人类的生产生活中具有广阔的应用范围[3]。Schulz等[4]的研究表明，内生真菌和那些受其代谢产物和环境影响的生物两者互相影响，会产生更多的次级代谢产物。但由于内生真菌次生代谢产物含量较低，并且有些内生真菌次生代谢产物存在生物活性，这就对次生代谢产物的提取提出了新的要求[5]。

本试验通过研究两株内生真菌No015和No016的次级代谢产物量与培养时间的关系，从而找到No015和No016两株内生真菌次级代谢产物产生的高峰期，获得更多的次级代谢产物，为后期次级代谢产物的研究提供更多的数量保证。两株内生真菌次级代谢产物提取过程中，虽然5～10 d和10～17 d次级代谢产物增加和减少的程度不同，但都呈现先逐级增长后逐级减少的趋势。两株内生真菌均表现为在液体培养10 d时产生的次级代谢产物最多，这说明两株内生真菌次级代谢产物产生的高峰期均为10 d。两株内生真菌的次级代谢产物量和培养时间的关系摸索后，今后可以在液体培养10 d后进行两株内生真菌的次级代谢产物的提取工作。

参考文献：

[1] 邹文欣，谭仁祥.植物内生菌研究新进展[J].植物学报，2001，49（3）：881-892.

[2] 阮丽军，尚新艳，戈 梅，等.植物内生真菌HCCB00189代谢产物研究[J].植物新药杂志，2007，16（1）：52-55.

[3] HAWKSORTH D L， KIRK P M， SUTTON B C， et al.Ainsworth & Bisbys Dictionary of the fungi[M]. CAB International UK：Cambridge University Press，1995.

[4] SCHULZ B，BOYLE C，DRAEGER S，et al.Endophytic fungi：a source of novel biological active secondary metabolites[J].Myclogical Research，2002，106（9）：996-892.

[5] 金 鑫，吕长利，孙守慧，等.林木次生代谢产物提取方法的研究进展[J].中国森林病虫，2008，27（1）：31-34.

摘要：从辽宁省西北地区根系土壤中分离得到No015号和No016号两株内生真菌，对其进行液体培养，从第5天开始，连续13 d进行次生代谢产物干物质重的测量。结果表明，液体培养10 d为两株内生真菌次生代谢产物产生的高峰期。

关键词：内生真菌；次生代谢产物；培养时间；高峰期

中图分类号：Q948.12 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）18-4286-02

植物内生菌（Endophyte）是一定阶段或全部阶段生活于健康植物的组织和器官内部的真菌或细菌，其与宿主植物在长期的共进化过程中形成了一种稳定的互利共生关系[1]。植物内生菌能产生丰富多样的次级代谢产物，而且具有多种生理活性，如抗菌、抗病毒、杀虫、抗氧化等活性。因此，植物内生菌作为一种新的微生物资源引起了广泛的关注，从植物内生菌次级代谢产物中寻找和发现新的活性化合物已成为植物内生菌研究的一个热点[2]。但内生真菌次生代谢产物存在含量较低的问题，本试验通过两株内生真菌No015和No016的次级代谢产物量与培养时间的关系研究，旨在找到No015和No016两株内生真菌次级代谢产物产生的高峰期，以期获得更多的次级代谢产物，为两株内生真菌的进一步研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

内生真菌No015和No016由辽宁省农业科学院微生物工程中心从辽宁西北地区采集的根系土壤中分离并保存。

PA培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，水定容至1 000 mL，pH自然。

1.2 方法

1.2.1 内生真菌的分离纯化 参照文献[3]方法进行内生真菌的分离纯化。

1.2.2 内生真菌代谢产物的制备与干物质测量 将活化的内生真菌菌种No015和No016接种于装有100 mL PA培养基的三角瓶中，置于28 ℃、200 r/min的摇床培养，5 d后，连续13 d取样，抽提菌丝体代谢物，将菌丝体代谢物中加入等体积的20%乙醇，浸提24 h，过滤，滤液保存。将各滤液吸取1 mL，风干后测量干物质量。

2 结果与分析

2.1 No015内生真菌代谢产物的干物质测量

由图1可知，内生真菌No015液体培养10 d时产生的次生代谢产物量最高，5～10 d产生的次级代谢产物呈逐渐上升趋势，10～17 d产生的次生代谢产物呈逐渐下降趋势。这说明内生真菌No015液体培养10 d时是产生次级代谢产物的高峰时期。

2.2 No016内生真菌代谢产物的干物质测量

由图2可知，内生真菌No016也是液体培养10 d时产生的次生代谢产物量最高，同时，5～10 d产生的次级代谢产物也呈逐渐上升趋势，10～17 d产生的次生代谢产物也呈逐渐下降趋势。这说明内生真菌No016液体培养10 d时也是次级代谢产物产生的高峰时期。

3 小结与讨论

内生真菌生活在健康植物组织中，其群落生境特殊；而大量的植物又生活在特殊的环境（如高盐、干旱）中；因此，现在内生真菌已被视为一种开发天然产物的有效资源，而且已发现了多种对人类生活和健康有益的化合物。

内生真菌次生代谢产物十分丰富，在人类的生产生活中具有广阔的应用范围[3]。Schulz等[4]的研究表明，内生真菌和那些受其代谢产物和环境影响的生物两者互相影响，会产生更多的次级代谢产物。但由于内生真菌次生代谢产物含量较低，并且有些内生真菌次生代谢产物存在生物活性，这就对次生代谢产物的提取提出了新的要求[5]。

本试验通过研究两株内生真菌No015和No016的次级代谢产物量与培养时间的关系，从而找到No015和No016两株内生真菌次级代谢产物产生的高峰期，获得更多的次级代谢产物，为后期次级代谢产物的研究提供更多的数量保证。两株内生真菌次级代谢产物提取过程中，虽然5～10 d和10～17 d次级代谢产物增加和减少的程度不同，但都呈现先逐级增长后逐级减少的趋势。两株内生真菌均表现为在液体培养10 d时产生的次级代谢产物最多，这说明两株内生真菌次级代谢产物产生的高峰期均为10 d。两株内生真菌的次级代谢产物量和培养时间的关系摸索后，今后可以在液体培养10 d后进行两株内生真菌的次级代谢产物的提取工作。

参考文献：

[1] 邹文欣，谭仁祥.植物内生菌研究新进展[J].植物学报，2001，49（3）：881-892.

[2] 阮丽军，尚新艳，戈 梅，等.植物内生真菌HCCB00189代谢产物研究[J].植物新药杂志，2007，16（1）：52-55.

[3] HAWKSORTH D L， KIRK P M， SUTTON B C， et al.Ainsworth & Bisbys Dictionary of the fungi[M]. CAB International UK：Cambridge University Press，1995.

[4] SCHULZ B，BOYLE C，DRAEGER S，et al.Endophytic fungi：a source of novel biological active secondary metabolites[J].Myclogical Research，2002，106（9）：996-892.

[5] 金 鑫，吕长利，孙守慧，等.林木次生代谢产物提取方法的研究进展[J].中国森林病虫，2008，27（1）：31-34.