上皮细胞黏附分子在食管癌组织中的表达及其临床意义

张志辉，纪 波，穆玉恕

(泰山医学院附属医院胸外科，山东泰安，271000)

食管癌是中国最为常见的恶性肿瘤之一，具有较高的发病率和死亡率，如何早期发现食管癌并及时控制食管癌的进展，是医疗工作者高度关注的课题之一。上皮细胞黏附分子(Ep-CAM)是一类具有细胞黏附、信号转导等多功能的上皮细胞跨膜糖蛋白，与多种肿瘤的发生、发展及转移关系密切，因此被视为癌前病变或恶性肿瘤的早期标志物［1］。本研究观察了60例食管癌患者的癌组织中Ep-CAM的表达水平，探讨其与食管癌病理特征之间的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2008年6月—2011年1月在本院行手术治疗的60例食管癌患者为研究对象，其中男27例，女33例，年龄38 ～70岁，平均(55.27 ±4.16)岁;根据国际 TNM分期标准，Ⅰ期13例，Ⅱ期25例，Ⅲ期14例，Ⅳ期8例。取所有患者癌组织标本60例，设为A组，同一肿瘤标本上残端的正常食管黏膜组织35例，设为B组;同时取同期手术治疗的食管黏膜不典型增生的组织标本35例，设为C组。3组人群一般资料比较差异无统计学意义(P ＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂:RM2135型切片机购自德国LEICA公司，BX41显微镜购自日本OLYMPUS公司，鼠抗人Ep-CAM单克隆抗体及SP试剂盒购自深圳科润达生物技术有限公司。

1.2.2 测定方法:组织标本固定于4%多聚甲醛溶液中，用石蜡包埋，常规4μm切片，置入60℃烤箱4h后，脱蜡10 min，以不同浓度酒精浸泡后自来水冲洗后蒸馏水浸泡3 min。经3%过氧化氢室温孵育25 min，蒸馏水冲洗，磷酸缓冲液浸泡5 min，再以0.01 M枸橼酸盐修复缓冲液进行抗原修复后，PBS冲洗2次，5 min/次。血清封闭后，室温孵育45 min，加一抗过夜;PBS冲洗3次，5 min/次，加二抗，室温孵育30 min;PBS冲洗3次，5 min/次，加辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温孵育25 min，PBS冲洗3次，每次为5 min;二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木精染色，常规脱水、透明、封片。2名病理科医生采用双盲法判定染色结果。

1.3 观察指标

观察3组组织标本中Ep-CAM的表达水平，同时收集患者相关临床资料，包括患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、肿瘤分化程度、淋巴转移状况等。此外，患者术后随访至2014年1月，记录患者生存情况。

1.4 判定标准

根据染色的细胞数及染色程度分为－、+、2+、3+共4个等级。其中，－:不显色或＜10%的细胞呈现任何水平的染色;+:10%～25%的细胞膜呈现弱染色，或＞10%的细胞膜强染色;2+:25% ～50%的细胞膜强染色;3+:＞50%的肿瘤细胞膜全部呈现强染色。

2 结果

2.1 Ep-CAM在3组组织中的表达水平比较

Ep-CAM在正常食管黏膜组织中无阳性表达;在增生黏膜组织中判定为+者6例，2+者4例，总阳性率为28.57%(10/35);癌组织中，判定为+者13例，2+者25例，3+者16例，总阳性率为90.00%(54/60)。Ep-CAM养性表达组间比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 Ep-CAM的表达与食管癌病理特征的关系

根据统计检验结果，Ep-CAM的表达在患者性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度间比较无显著差异(P＞0.05);不同肿瘤分化程度、是否存在淋巴转移之间的Ep-CAM的表达，比较差异具有统计学意义(P＜0.01或 P＜0.05)，见表1。随访期内，根据患者食管癌组织的EP-CAM表达程度，其3年生存率随分别为:－，100%(0/6);+，77%(3/13);2+，24%(6/25);3+，12.5%(2/16)，随着Ep-CAM表达水平升高，患者3年期生存率降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)。

表1 Ep-CAM的表达与食管癌病理特征的关系(n)

3 讨论

食管癌发病率占世界范围内恶性肿瘤发病率第九位，目前食管癌主要通过外科手术结合放、化疗等方案进行治疗，但临床疗效并不理想，5年生存率偏低［2］，因此如何及早发现食管癌、控制癌前病变的发展对改善患者生存质量、提高生存率至关重要。

Ep-CAM是一种由肿瘤相关钙信号转导蛋白基因(TACSTD1)编码的Ⅰ型跨膜糖蛋白，属于Ca2+非依赖性黏附分子［3－5］。Ep-CAM 作为部分恶性肿瘤的标志物，在正常食管上皮组织中表达为阴性，而在Barret食管上皮中通常为散在分布的低表达，且不同区域的食管肠化生柱状上皮细胞的 Ep-CAM 表达水平也有所差异［6－7］。Ep-CAM在恶性肿瘤中的确切作用机制目前尚无定论，有研究［8－9］表明，Ep-CAM信号系统可以通过上调原癌基因(c-myc)来影响肿瘤细胞的分化与增殖。相关学者研究了Ep-CAM在正常胃上皮黏膜组织、胃肠化生组织、胃上皮异常增生组织和胃腺癌组织中的表达，发现了相似的表达规律，即其表达水平在这些组织中呈逐步升高趋势［10］。体外实验发现，Ep-CAM与肿瘤细胞的生长周期呈显著相关，其表达可降低肿瘤细胞对生长因子的需要数量，增强细胞的代谢活力［11］。Deschoolmeester等［12］研究发现，Ep-CAM 可抑制机体的抗肿瘤免疫能力，使T淋巴细胞介导的免疫机制失去作用。国内学者研究［13－14］结果也表明，Ep-CAM在食管病变的不同阶段，其表达水平会发生相应的改变，在食管癌组织中，表达水平随着肿瘤的进展程度而增加。

本研究结果显示，Ep-CAM在正常食管黏膜组织中无阳性表达，而在食管癌组织中，阳性表达水平特异性增高，这可能与提示编码Ep-CAM的TACSTD1基因在正常食管上皮组织中处于静默状态，当在各种致癌因素的激发下，被特异性激活发生异常表达有关［15－16］。同时，研究结果还显示了Ep-CAM表达水平与肿瘤分化程度及淋巴结转移的状况存在潜在关联，这可能解释了Ep-CAM在患者肿瘤细胞增殖分化及转移过程中起了重要作用［17－18］。此外，不同 Ep-CAM 表达水平下患者的3年生存率之间存在显著差异，这预示着随着恶性肿瘤细胞的增加，其表达水平也逐渐增强，患者预后越不佳。

综上所述，Ep-CAM在食管癌的癌组织中呈现特异性高表达。针对食管病变患者检测其Ep-CAM表达水平将有助于食管癌前病变及恶性肿瘤的诊断，同时，Ep-CAM可作为靶向因子之一，为临床上治疗食管癌提供新途径。

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