治疗剂量环孢素A及他克莫司对大鼠血细胞的影响

何绿茵 陈业辉 李淼沅 仉 智 陈林强 林华欣 聂 品 江 文 徐邦牢

肾移植是终末期肾病的有效治疗手段之一，术后我们常用钙调磷酸酶类免疫抑制(CsA及FK506)来预防受体对供肾的免疫排斥反应。临床使用上述两药过程中，我们发现二者会不同程度影响血象，但缺乏相应的实验验证及系统的临床资料的分析。本研究就在模拟临床上肾移植术后的用药方案，来观察上述两药对大鼠细胞的影响，进而指导临床上用药选择。

1 材料与方法

1.1 实验动物来源及分组

雄性清洁级近交系SD大鼠(Sprague－Dawley)18只，体重200～250 g/只，由中山大学实验动物中心提供并在该中心开展实验，合格证号SCXK(粤)2009－0011。实验前，先在实验室饲养大鼠1周，以适应SPF环境，饮用消毒饮用水，昼夜节律。采用随机区组设计方式，将18只大鼠分为对照组、CsA组及FK506组3组，每组6只。

1.2 实验药物及剂量

CsA产自杭州中美华东制药有限公司，FK506产自日本大阪藤泽公司。参考大鼠与人的剂量换算公式 DW1=［(R1W21/3)/(R2Wl1/3)］DW2，其中DW是药物的剂量，R是体型指数(大鼠和人的R值分别为0.09和0.1～0.11)，W是标准体重(大鼠和人的W值分别是200 g和60 kg)［1］。将肾移植术后首剂治疗剂量换算为大鼠给药方案为:CsA为25 mg·kg－1·d－1;FK506 为 0.8 mg·kg－1·d－1;而对照组则给予消毒饮用水1 mg·kg－1·d－1。用大鼠专用圆头金属灌胃针进行灌胃方式给药，每天给药1次，称重2次/周，依据体重调整药量，规律给药4周，各组大鼠模型建立，遂处死大鼠并取血标本。

1.3 观察指标

应用日本东亚公司生产的sysmex系列的XN－2000血细胞分析仪及配套试剂对各组大鼠血液中WBC、RBC、HGB、PLT、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW 及 MPV 进行检测。

1.4 统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件包，实验数据用均数±标准差(±s)表示;各组间比较采用方差分析(Analysis of Variance，ANOVA)，两两比较采用LSD－t检验(Least Significant Difference，LSD)，α =0.05。

2 结果

2.1 各组大鼠体重比较

实验前各组大鼠之间体重差异无统计学意义(p＞0.05)。实验4周后，CsA组大鼠体重及体重增长值较对照组及FK506组低，且差异有统计学意义(p＜0.05)，见表1及图1。

2.2 各组大鼠血细胞的比较

对照组、CsA组及FK506组的RBC、HCT无明显差异，且组间比较无统计学意义(p﹥0.05)。

表1 各组大鼠实验前后的体重比较(±s)g

表1 各组大鼠实验前后的体重比较(±s)g

注:与对照组比较，1)p＜0.05;与CsA组比较，2)p＜0.05;与FK506组比较，3)p＜0.05

组别 数量 实验前体重(g)实验后体重(g)体重增长值(g)对照组 6 238±23 362±372) 124±242)CsA组 6 232±18 272±171)3) 40±41)3)FK506组 6 240±16 343±362) 103±232)

图1 各组大鼠实验前后的体重及体重增长值的比较

CsA组WBC、PLT较对照组及FK506组明显升高，且CsA组与后两者比较差异有统计学意义(p＜0.05)，而对照组与FK506组组间比较差异无统计学意义(p＞0.05)。

CsA及FK506组的MPV较对照组增多，且CsA增加的幅度最大，CsA及FK506分别与对照组比较差异有统计学意义(p＜0.05)，且CsA与FK506组比较差异有统计学意义(p＜0.05)。

CsA组HGB、MCV、RDW 较对照组及 FK506组明显降低，且CsA组与后两者比较差异有统计学意义(p＜0.05)，而对照组与FK506组组间比较差异无统计学意义(p＞0.05)。

CsA组MCH较对照组减少，FK506组较对照组增多，且CsA及FK606分别同对照组比较差异有统计学意义(p＜0.05)。

FK506组MCHC较CsA及对照组升高，且差异有统计学意义(p＜0.05)。见表2及表3。

表2 各组大鼠给药4周后血常规比较(±s)

表2 各组大鼠给药4周后血常规比较(±s)

注:与对照组比较，1)p＜0.05;与 CsA 组比较，2)p＜0.05;与 FK506组比较，3)p＜0.05

组别 数量 WBC(109/L)RBC(1012/L)HGB(g/L)PLT(1012/L)HCT(L/L)对照组 6 4.98 ±1.862) 7.16 ±0.28 143.17 ±6.682) 975.17 ±70.712)0.40 ±0.03 CsA 组 6 11.80 ±2.071)3) 7.41 ±0.29 125.00 ±8.671)3)1190.00 ±73.701)3) 0.39 ±0.01 FK506 组 6 4.04 ±0.962) 7.11 ±0.29 147.00 ±6.072) 1010.83 ±35.072)0.40 ±0.01

表3 各组大鼠给药4周后血常规比较(±s)

表3 各组大鼠给药4周后血常规比较(±s)

注:与对照组比较，1)p＜0.05;与CsA组比较，2)p＜0.05;与FK506组比较，3)p＜0.05

组别 数量 MCV(fl)MCH(pg)MCHC(g/L)RDW(%)MPV(fl)对照组 6 56.30 ±2.322) 18.90 ±0.402)3) 335.33 ±7.633) 17.32 ±0.392) 6.26 ±0.352)3)CsA 组 6 52.15 ±0.791)3) 17.42 ±0.641)3) 343.33 ±13.533) 8.97 ±0.221) 7.47 ±0.191)3)FK506 组 6 56.63 ±2.292) 20.68 ±0.301)2) 365.33 ±11.641)2) 16.43 ±1.272) 7.06 ±0.131)2)

3 讨论

CsA与FK506同属CNI类免疫抑制剂，是目前临床上肾移植术后常用的免疫抑制，其作用机制相似，均作用与钙调磷酸酶(CN)，阻止T细胞活化及IL－2的释放，来发挥抗免疫排除的作用，但运用的过程中会伴随其他的不良反应，如肝肾毒性［2－3］，性功能及生殖系统［4］的毒害，心脏毒性等，本文主要探讨CsA及FK506对血细胞的影响。

血细胞存在于外周血液循环系统内，主要包括:①红细胞:主要的功能是运送氧和CO2，并在血液酸碱平衡中起到一定的缓冲作用。②白细胞:各类白细胞(中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞等)均参与机体的防御功能。③血小板:止血过程中起着重要作用，同时还有助于维持血管壁的完整性。

临床上长期应用CsA、FK506后，血常规中某些指标会发生一定的变化，如CsA［5］会引起白细胞、血小板减少，贫血等，FK506［6］可能影响白细胞数量(升高或降低)、贫血及血小板减少。

我们本研究发现CsA引起WBC升高，这与临床上长期用药后WBC减少［5］不符合，虽有报道称有诸如硫唑嘌呤等免疫抑制剂骨髓移植导致白细胞减少后改用CsA后早期可升高WBC［7］，但具体机制不详。本组实验大鼠体重最轻，体重增长值最小，精神差，嗜睡，脱毛发，均可反映大鼠机能明显变差，间接提示免疫系统相对较差。本实验我们考虑WBC升高可能与CsA长期应用引起机体免疫功能紊乱，导致机体感染有关，或与CsA刺激骨髓造血功能有关。WBC增高是否确切由感染所致，暂缺乏直接证据，还需进一步论证。

本实验中CsA引起PLT及MPV增高，前者提示血小板数量增多，后者提示血小板体积增大，二者同时增加，考虑可能与CsA在早期一定程度刺激骨髓造血功能或存在感染刺激有关，但目前未有相关文献报道。临床上长期应用CsA会导致PLT减少，其机制是CsA长期使用引发药物免疫应答导致血小板的消耗所致［8］。

本实验中CsA引起HBG、MCV、RDW减少，但RBC无明显改变，我们考虑可能与长期应用CsA引起腹泻，影响胃肠道铁离子的吸收，进而使得血红蛋白合成不足，导致缺铁性贫血(小细胞低色素);还有可能是CsA的长期作用引起肾毒性，减少了EPO的合成，导致贫血［9］。

本研究中FK506对血细胞影响轻微。

肾移植术后的处理和护理对移植肾的存活和移植病人的康复非常重要［10］，我们的研究提示CsA对血细胞影响较大，因而我们在临床上使用CsA的过程中，需定期复查血象，方能及时发现并处理可能合并的感染、贫血或血小板异常的情况。

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［6］张世俊，邓龙华，赵文丽.他克莫司的临床应用评价［J］.中国医院用药评价与分析，2012，12(4):292－295.

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［10］苏丽芳，容超贤，张伟婷，等.亲属活体肾移植受者肾功能延迟恢复的护理［J］.现代医院，2011，11(2):94 －95.