自身抗体导致献血者Rh血型鉴定困难1例

麻静敏，车 进，李天君，张燕华，李美霖（北京市通州区中心血站 101100）

D抗原抗体与输血的关系仅次于ABO血型［1］，对献血者必须检测D抗原。本站在对1例献血者进行Rh血型鉴定时，发现应用3个厂家试剂与待检红细胞反应凝集强度均相同，且直抗阳性，怀疑结果为假阳性。对Rh血型和ABO血型进行进一步鉴定后，结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 献血者，女，33岁，汉族，身体健康，无输血史，近期无免疫史，于2013年来本站献血400mL，ABO血型初筛为O型，RhD（－）。

1.2 试剂与仪器 抗－A、抗－B、ABO反定红细胞、抗筛细胞、抗－H、抗－A1、2－Me应用液均由上海血液生物医药有限责任公司提供，批号分别为：20120506 －2、20132302 、20125628 、20120830 、20120523 、20120925 。IgG 抗－D（A 厂家：上海血液生物医药有限责任公司，批号20120731）；IgM＋IgG抗－D（B厂家：英国 Millipore公司，批号BMG1102A）；IgM＋IgG抗－D（C厂家：美国D.B.L公司，批号 NDMG06304）。Coombs Anti－IgG卡、Liss／coombs卡、ID－Diluent2均由瑞士 DiaMed公司提供，批号分别为50540.70.13、50531.71.26、05761.23.10。KA－2200细胞洗涤离心机（日本KUBOTA），光学显微镜（日本Olympus公司），微柱凝胶卡式离心机、卡式孵育机（瑞士DiaMed公司），恒温水浴箱（北京市医疗设备厂）。

1.3 Rh血型鉴定 采用盐水试管法和微柱凝胶法对Rh血型进行鉴定。盐水试管法：在3支试管中分别加入3种厂家的抗－D血清各100μL，再分别加入50μL献血者5%盐水红细胞悬液，1 000 g×离心15s，取出肉眼判定结果。微柱凝胶法：取Coombs Anti－IgG卡1张，按 A、B、C厂家标记前3孔，将前3孔中分别加入献血者1%Liss红细胞悬液50μL，再分别加入A、B、C厂家抗－D血清各25μL，将卡置于37℃孵育15min后离心10min，取出肉眼判定结果。

1.4 ABO血型鉴定 采用盐水试管法对ABO血型进行鉴定。正定型：在2支试管中分别加入抗－A、抗－B标准血清各100μL，再分别加入50μL献血者5%盐水红细胞悬液；反定型：在3支试管中先分别加入献血者血清各100μL，再分别加入AC、BC、OC试剂红细胞各50μL，1 000 ×g离心15s，取出肉眼判定结果。

1.5 自身对照试验 采用盐水试管法，在1支试管中先加入献血者血清100μL，再加入献血者5%盐水红细胞悬液50μL，1 000 ×g离心15s，取出肉眼判定结果。

1.6 直接抗球蛋白试验 采用微柱凝胶法，取Coombs Anti－IgG卡标记1孔，加入献血者1%Liss红细胞悬液50μL，离心10min。

1.7 抗体筛查试验 采用微柱凝胶法，取Liss／coombs卡1张，于1～3孔中分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ号抗筛细胞50μL，再分别加入献血者血清25μL，将卡置于37℃孵育15min后离心10 min。

1.8 2－Me处理献血者红细胞 用盐水将献血者红细胞稀释为50%，在此红细胞中加等量0.1mol／L 2－Me应用液，置37℃恒温水浴箱中孵育30min后用生理盐水洗涤红细胞3次，再用生理盐水将红细胞稀释至5%，再一次进行ABO血型、Rh血型鉴定、直接抗球蛋白试验和抗体筛查试验［2］。

2 结 果

2.1 Rh血型鉴定结果 在对此例RhD阴性献血者进行RhD阴性确认试验时发现，盐水试管法3个厂家试剂结果均为1＋w，微柱凝胶卡试剂结果均为0，且凝集强度相似。见表1。

表1 献血者Rh血型鉴定结果

2.2 ABO血型鉴定 ABO血型鉴定，除反定型Ac、Bc外其他反应的凝集强度均相同。见表2。

表2 献血者ABO血型鉴定结果

2.3 直接抗球蛋白试验结果 Coombs Anti－IgG卡反应结果为（＋）；经2－Me处理红细胞后结果为阴性。抗体筛查试验结果也为阴性。

3 讨 论

临床上Rh血型系统的重要性仅次于ABO血型系统，可引起溶血性输血反应和新生儿溶血病［3］，为进一步提高输血的安全性、有效性，本站对初筛RhD抗原阴性者进行RhD阴性确认实验。采用3种不同生产厂家抗－D血清分别应用盐水试管法和微柱凝胶法进行确认试验，未出现凝集者为RhD阴性，出现凝集者判定为弱D型［4］。本站在对此例RhD阴性献血者进行RhD阴性确认试验时发现，盐水试管法和微柱凝胶卡的3个厂家试剂结果均为阳性且凝集强度相似，直接抗球蛋白试验结果也相似，故进行ABO血型鉴定，除反定型Ac、Bc外其他反应的凝集强度均相同。由于血清中游离的自身抗体，会干血型鉴定、抗体筛选及交叉配血［5］，正定型会出现假阳性结果，反定型也会凝集［6］。此例献血者抗体筛查为阴性，自身对照试验为阳性，而正常离体的血液自身对照试验为阴性，直接抗球蛋白试验结果与RhD阴性确认结果阳性程度相似。可能发生假阳性反应的因素包括工作疏忽用错了试剂、人血清试剂中存在其他特异性抗体、试剂可能被细菌或其他外界物质污染、患者血清中自身凝集素和不正常蛋白质与未经洗涤红细胞等［7］。排除其他因素，初步认定为自身抗体所引起的Rh血型假阳性。

使用2－Me应用液处理献血者红细胞后，对Rh血型及ABO血型进行重新鉴定。对直接抗球蛋白试验也进行了重新鉴定，结果为阴性。因为巯基试剂可以消除红细胞的自发凝集，为血型检测提供不凝集的标本［2］，故确定本例是由于自身抗体所导致的假阳性。本室曾检出自身抗体阳性而导致临床配血不合的献血者数例，此例为本室首次发现RhD阴性献血者因自身抗体导致的假阳性，故此类现象必须引起检验工作者的重视，以免误判而致血型鉴定错误。因此在Rh阴性确认试验中有必要使用多种不同厂家抗－D试剂和不同方法同时进行检测，以排除试验过程中可能出现的假阳性结果，明确献血者Rh血型，保证临床用血的安全。

［1］李勇，马学严.实用血液免疫学血型理论和实验技术［M］.北京：科学出版社，2006：176－206.

［2］童军，刘庆海，杨文冲.实用血液免疫学血型理论和实验技术［M］.北京：科学出版社，2006：586－701.

［3］蔡雪仰.2例自身抗－e合并非特异性自身抗体引起的溶血性贫血［J］.检验医学与临床，2013，10（2）：213－214.

［4］孙业富，夏爱萍，范恩勇.扬州市RhD阴性无偿献血者抗原分布及不规则抗体调查［J］.临床输血与检验，2011，13（1）：57－58.

［5］庞桂芝，张趁利，娄白敏.ABO及Rh血型鉴定困难与直接抗球蛋白试验阳性的关系探讨［J］.中国输血杂志，2010，23（5）：388－389.

［6］陶翠华，张真路.325例ABO正反定型不一致原因分析及处理措施［J］.中国输血杂志，2012，25（5）：484－485.

［7］胡永红，李勇，朱建春.实用血液免疫学血型理论和实验技术［M］.北京：科学出版社，2006：341－409.