泽泻提取物制备泽泻醇A的研究

阮征，徐光，白景，姜永涛

(1.山东绿叶制药有限公司，山东 烟台 264003；2.烟台大学，山东 烟台 264005)

泽泻提取物制备泽泻醇A的研究

阮征1，徐光1，白景1，姜永涛2*

(1.山东绿叶制药有限公司，山东 烟台 264003；2.烟台大学，山东 烟台 264005)

目的：提高泽泻中泽泻醇A的提取收率。方法：采用硅胶柱和HPLC制备色谱分离技术，从泽泻乙醇提取物中分离得到24-乙酰泽泻醇A及其异构体，通过碱降解的方法得到泽泻醇A，根据色谱和光谱学数据鉴定化合物结构。结果：从泽泻乙醇提取物中制备泽泻醇A的转化收率为0.14%。结论：与传统工艺相比，收率提高近70倍，在一定程度上解决泽泻醇A制备困难的问题。

泽泻；24-乙酰泽泻醇A；泽泻醇A

泽泻为泽泻科植物泽泻Alismaorientale(Sam.)Juzep.的干燥块茎，具有利水渗湿，泄热，化浊降脂功能。用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛，高脂血症[1]。泽泻含萜类、挥发油等多种化学成分，药理活性研究表明，泽泻醇类具有抑制动脉粥样硬化、活血化瘀的功效，以及利尿、降血压、抗脂肪肝等作用[2-3]。

泽泻醇A是泽泻醇类中重要的三萜类活性成分，文献表明泽泻醇A具有显著的降胆固醇作用[4]。但由于在药材中含量甚少，导致在临床上不能广泛应用。笔者通过研究，从泽泻提取物中分离得到24-乙酰泽泻醇A，并通过碱降解的方法得到泽泻醇A[5]。与从药材中直接提取的工艺相比，收率提高几十倍，在一定程度上解决泽泻醇A制备困难的问题。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪；Bruker AVANCE 400型超导核磁共振波谱仪；Mariner TOF-M型质谱仪。

1.2 试药

泽泻购自安徽亳州，经烟台大学药学院生药室赵燕燕副教授鉴定为泽泻Alismaorientale(Sam.)Juzep.的干燥块茎。

200～300目硅胶及GF254薄层色谱板(烟台市化学工业研究所)。

2 化合物的提取分离和碱解

2.1 化合物的提取分离

取泽泻块茎500 g，先用250 mL 75%乙醇水溶液回流提取。回收乙醇，得到紫红色油状物，用乙酸乙酯萃取，分为乙酸乙酯层和水层，将乙酸乙酯层蒸干，进行硅胶柱色谱，以正己烷-乙酸乙酯(1∶1)洗脱，每100 mL为一个流分，以正己烷-乙酸乙酯(1∶4)为展开剂，TLC检测，合并相同流分，得到两种无色结晶(化合物10.538 g、化合物20.542 g)和一种黄色油状物。

2.2 化合物的碱解

将化合物1、2混晶溶于40 mL新配制的5%乙醇钠-乙醇溶液中，室温放置4 h，真空抽干，丙酮溶解，挥干溶剂，干燥，得到一种无色粉末(0.695 g)，化合物3[6]。

3 结构鉴定

化合物1：无色针晶，通过ESI-MS测定其m/z为515[M-H2O+H]+，结合DEPT谱，提示其分子式为C32H53O6。在1H-NMR谱中，出现3个连氧碳上的质子信号δ 4.55(s)，3.86(m)，3.82(m)。在δ 2.16处给出一个乙酰基上特征的甲基质子信号，在高场区出现8个甲基质子信号。在13C-NMR谱中，在低场区给出2个羰基碳信号，其中δ 170.8应为乙酰基上的羰基碳信号。在烯碳区，由DEPT提示，含有一对双键碳信号δ 138.2，135.0，且均为季碳。在连氧区，给出4个连氧碳信号δ 69.7，69.0，78.0，73.8，由DEPT谱提示，δ 73.8为一连氧季碳。以上信息提示其具有泽泻醇类结构特征，其碳谱数据与24-乙酰泽泻醇A基本一致[3]，其相关结果见表1。并进一步通过1H-1HCOSY、HMBC谱对其归属，其相关结果见图1～4。

化合物2：根据化合物2的柱色谱行为及制备纯化时HPLC图谱特征(图2)，发现化合物2会向化合物1转化。进一步通过HPLC-MS及HPLC-ELSD对照检测，该化合物的分子量与化合物1相同，其ESI-MS m/z：515[M-H2O+H]+，并与化合物1碳谱对比，初步推测该化合物可能为23-乙酰泽泻醇A。

化合物3：无色粉末；ESI-MS m/z：473[M-H2O+H]+，推测该化合物为去乙酰化产物；1H-NMR(CDCl3)，δH1.00(3H，s)，1.04(3H，s)，1.07，1.14，1.24，1.27(3H，s)，1.66(1H，m，H-22)，1.77(1H，d，J=10.6 Hz，H-9)，2.78(1H，m，H-12)，3.00(1H，brs，H-24)，3.77(1H，dd，J=3.5，9.3 Hz，H-23)，3.88(1H，ddd，J=5.9，10.7，10.7 Hz，H-11)；13C-NMR(CDCl3)：C-1→C-30，δC：31.2，33.7，220.0，46.8，48.7，20.1，34.5，40.7，49.8，37.0，70.0，34.9，137.4，57.0，30.6，29.5，135.5，23.1，25.7，28.5，20.1，40.1，69.4，77.6，74.0，27.5，26.2，29.5，20.3，24.2。以上数据与文献报道基本一致[3]，即为泽泻醇A。

表1 化合物1的核磁共振数据

图1 化合物1的1H-1HCOSY谱

图2 化合物1的1H-1HCOSY相关信息

图3 化合物1的HMBC谱

图4 化合物1的HMBC相关信息

图5 化合物2的HPLC图

4 讨论

资料[6]，泽泻提取物中泽泻醇A含量约为0.002%，而通过本研究工艺，泽泻醇A的收率约为0.14%，是文献收率的近70倍。本研究与传统工艺相比，在一定程度上解决泽泻醇A制备困难的问题。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：212-213.

[2] 徐晖.泽泻药理作用研究进展[J].湖南中医杂志，2004，20(3)：77.

[3] 胡雪艳，陈海霞，高文远，等.泽泻化学成分的研究[J].中草药，2008，39(12)：1788-1790.

[4] 徐飞，吴启南.泽泻醇类化合物调脂作用的研究进展[G].广州：全国第九届天然药物资源学术研讨会论文集，2010：707-709.

[5] 邱东凤.泽泻化学成分研究[D].兰州：兰州大学，2009.

[6] 彭国平，朱国元，楼凤昌.泽泻中二个三萜新成分的研究Ⅱ[J].天然药物研究与开发，2002，14(4)：5.

PreparationofAlisolAfromAlismaorientalisExtract

RUAN Zheng1，XUGuang1，BAIJing1，JIANGYongtao2*

(1.ShandongLuyePharmaceuticalCo.，Ltd.，Yantai264003，China；2.YanTaiUniversity，Yantai264005，China)

Objective：To improve the yield of alisol A fromAlismaorientalis.Methods：Silica and HPLC column chromatography were used to purify the chemical constituents and their structures were elucidated on the basis of spectral data of mass and NMR.Alisol A-24-acetate was isolated from fraction of ethanol extract ofA.orientalisand was used to prepare alisol A by alkali degradation.Results：The conversion yield of preparing alisol A was 0.14%.Conclusion：Compared with the traditional process，the yield of new process can increase 70 times，to a certain extent，which can solve the difficulty of preparing alisol A.

Alismaorientalis；Alisol A-24-acetate；Alisol A

2014-01-28)

*

姜永涛，副教授，研究方向：天然药物新药；Tel：(0535)6706025，E-mail：yongtao@luye.cn

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.09.005