泰山四叶参不同品种总黄酮含量测定与比较△

陈宝芳，刘政波，毕研文，杨永恒，宫俊华

(泰安市农业科学研究院 山东 泰安 271000)

泰山四叶参不同品种总黄酮含量测定与比较△

陈宝芳*，刘政波，毕研文，杨永恒，宫俊华

(泰安市农业科学研究院 山东 泰安 271000)

目的：比较泰山四叶参不同品种总黄酮含量，为品种质量评价及合理利用提供依据。方法：采用紫外分光光度法测定总黄酮含量，以芦丁为对照品，测定波长510 nm。结果：泰山四叶参三个参试品种总黄酮含量分别为1.32%、1.59%、1.38%，对照泰参1号总黄酮含量1.11%。结论：泰山四叶参品种之间总黄酮含量有差异，3个参试品种与对照总黄酮含量差异皆达到极显著水平，泰参3号杂交种总黄酮含量极显著高于泰参2号和泰参4号，表现杂交优势明显。

四叶参；泰山；不同品种；总黄酮

四叶参CodonopsislanceolataBenth.et hook.F.系桔梗科Campanulaceae党参属多年生藤蔓草本植物，泰安当地俗称泰山四叶参[1]。以根入药，有清热解毒、祛痰镇咳、强壮滋补的作用，用于治疗肺痈咳嗽、病后虚弱、产后缺乳等症；浸泡白酒，常饮能舒筋活血 健身补气，被誉为“泰山之宝”[2]。四叶参含有总黄酮、多糖、生物碱等多种成分，其中黄酮类化合物广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分；具有抗炎、抗过敏、抑制细菌、抗病毒、抗肿瘤、治疗心血管疾病等作用，在人类的营养健康和疾病防治上有着广阔的应用前景。王德才等[3]测定了泰山四叶参中总黄酮和多糖的含量，目前对四叶参不同品种的总黄酮含量比较未见报道。本实验参照四叶参、党参、虎杖、砂仁总黄酮的测定方法[3-6]，以二年生泰山四叶参不同品种为研究对象，对总黄酮进行提取与测定，明确泰山四叶参不同品种的总黄酮含量，为四叶参不同品种合理的开发利用及质量控制提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 药材来源

四叶参采自泰安市农业科学研究院育种基地自主育成品种泰参2号、泰参3号(杂交种)、泰参4号新品系，审定品种泰参1号为对照品种，参试品种均采用生长2年的四叶参鲜根，收获时间为2013年10月28日，采集样本首先洗净，台式调节式切片机(型号DXQ-130B)切片、电热恒温鼓风干燥箱(型号DHG-9143B5-111)，在80 ℃下烘干至水分含量10%，称重，粉碎后过4号筛，冷藏备用。

1.2 试剂与仪器

芦丁对照品购自中国食品药品检定研究院，其余试剂均为国产分析纯。岛津UV-2450型紫外可见分光光度计；RE-5205型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；JAl2003B型电子分析天平(上海精天仪器有限公司)。

1.3 总黄酮含量测定方法

1.3.1 标准曲线的制备 芦丁于120 ℃下干燥至质量恒定，准确称取芦丁标准品30 mg，溶于100 mL甲醇溶液中。得质量浓度为0.3 g·L-1的芦丁标准溶液。精密量取芦丁对照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL，分别置于25 mL容量瓶中，加甲醇至6.0 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，静置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，混匀，静置6 min，加1 mol·L-1的氢氧化钠溶液10 mL，再加甲醇至刻度，摇匀，静置15 min，以相应试剂为空白，在510 nm测定吸光度，以对照品芦丁浓度(X)为横坐标，测得的吸光度(Y)为纵坐标，得回归方程为Y=0.010 4X+0.054 8，相关系数r=0.999 5。表明样品溶液在6～60 μg·mL-1范围内具有良好的线性关系。

1.3.2 供试品溶液制备 精密称取取四叶参粉末(过2号筛)2 g，至具塞锥形瓶中，加入甲醇50 mL，超声提取30 min，放冷，补足重量，过0.45 μm的微孔滤膜，滤液即为供试品溶液，备用。

1.3.3样品总黄酮含量的测定 准确量取1 mL供试品溶液至25 mL容量瓶中，加甲醇至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，静置6 min，加10%硝酸铝溶液1 mL，混匀，静置6 min，加1 mol·L-1的氢氧化钠溶液10 mL，再加甲醇至刻度，摇匀，静置15 min，以相应试剂为空白，在510 nm测定吸光度。计算四叶参中总黄酮的含量。黄酮标准曲线的制备见表1、图1。

表1 四叶参不同浓度下的吸光度

图1 黄酮标准曲线

2 结果与分析

2.1 泰山四叶参不同品种总黄酮含量

试验数据采用DPS软件进行方差分析，不同品种之间采用Duncan新复极差法进行多重比较。以4个品种的平均总黄酮含量，用Excel作柱形分析图。结果见表2和图2。

表2和图2结果表明，泰山四叶参不同品种之间总黄酮含量有差异，3个品种总黄酮含量均高于对照，泰参3号品种总黄酮含量最高，其次为泰参4号，泰参2号。多重比较表明，3个品种总黄酮含量与对照差异均达极显著水平，泰参3号与泰参2号、泰参4号差异达极显著水平，泰参2号、泰参4号两品种之间差异不显著。

表2 泰山四叶参不同品种总黄酮含量

图2 泰山四叶参不同品种总黄酮含量比较

3 结论

紫外分光光度法测定泰山四叶参总黄酮含量，样品溶液在6～60 μg·mL-1范围内具有良好的线性关系。结果表明，泰山四叶参品种之间总黄酮含量有一定差别。本研究结论与刘伟等[7-8]不同丹参品种其活性成分含量存在差异一致。

3个参试品种在根的外观质量与内在品质上都优于对照品种泰参1号，与对照品种比较总黄酮含量差异均达极显著水平。生产上应根据不同的应用目的在适宜的种植区选用不同的四叶参品种，从而达到对四叶参药材的最佳利用。

产地、生长环境及生长年限均是影响多年生药用植物主要成分含量的因素，不同栽培年限和采收季节，药材质量有较大变化[9-10]。本试验首次比较了泰山四叶参不同品种总黄酮含量，同时也对同一品种的不同生长年限总黄酮含量做了测定和分析，总

黄酮含量表现随生长年限延长而逐步增加的趋势，但年际间总黄酮含量差异没有达到显著水平，其原因有待进一步研究。

[1] 陈宝芳，毕研文，杨永恒，等.泰山四叶参新品种泰参2号的选育[J].中国现代中药，2013，15(12)，1075-1077.

[2] 毕胜，李桂兰，于崇田.泰山四大名药及其保护[J].中国林副特产，1999，(2)：62.

[3] 王德才，冯蕾，吴从平.泰山四叶参中总黄酮和多糖的含量测定.医学研究杂志，2009，17(23)：87-93.

[4] 薛梅，兰卫，王自军，等.虎杖中总黄酮和多糖的含量测定[J].中成药，2006，28(5)：735-736.

[5] 李艳，兰卫，孙萍，等.新疆党参总黄酮和多糖的含量测定[J].中草药，2004，35(2)：214-215.

[6] 邹慧琴，刘勇，闫永红，等.砂仁不同部位总黄酮的含量测定[J].中华中医药学刊，2013，31(2)：376-378.

[7] 代云桃，秦雪梅，郭小青，等.不同产地不同品种丹参药材内在质量评价[J].山西医科大学学报，2006，37(7)：716-719

[8] 张晓阳，李先恩，伊伟贞.不同品种丹参质量比较[J].中国农学通报 2012，28(34)：238-243

[9] 李正国，于立佐.不同采收期山东产丹参脂溶性成分含量变化的研究[J].齐鲁药事，2007，26(7)：401-402.

[10] 刘伟，刘建华，周洁，等.不同生长年限对丹参品种活性成分含量的影响[J].中国现代中药，2012，14(11)：37-41.

DeterminationandComparisonofTotalFlavonoidsContentinDifferentTaishanCodonopsislanceolataVarieties

CHENBaofang*，LIUZhengbo，BIYanwen，YANGYongheng，GONGJunhua

(TaianAcademyofAgriculturalSciences，Taian271000，China)

Objective：To investigate the total flavonoids content in different varieties of TaishanCodonopsislanceolata，and provide the basis for quality evaluation and reasonable utilization of TaishanC.lanceolatavarieties.Methods：The content of total flavonoids was determined by UV spectrophotometry，with rutin as a standard，the detection wavelength was 510 nm.Results：The content of total flavonoids in three TaishanC.lanceolatatested varieties were 1.32%，1.59%，1.38%，the content of total flavonoids in the Taishen No.1 was 1.11%.Conclusion：The differences between the content of total flavonoids in three varieties of TaishanC.lanceolata，as compared with the total flavonoids content of Taishen No.1，all reached the extremely significant level.Total flavonoids content of Tai Shen No.3 was significantly higher than that of the Taishen No.2 and Taishen No.4 and it shows apparant heterosis.

Codonopsislanceolata；Taishan；Varieties；Total flavonoids

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.08.009

2014-03-07)

泰山四叶参新品种选育及加工利用，泰安市科技计划(201340629)；泰安市中草药科技平台建设项目

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陈宝芳，高级农艺师，研究方向：中草药育种、加工及质量评价；E-mail：chenbaofangts@163.com