氟苯尼考制剂中磺胺二甲嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶检测方法的研究

徐恩民　张颖　刘少宁等

摘要：为建立测定氟苯尼考制剂中非法添加的磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺间甲氧嘧啶（SMM）高效液相色谱分析方法，本研究使用C18色谱柱，以乙腈-0.2%冰醋酸溶液（27∶73）作为流动相进行等度洗脱（流速1.0 mL/min）；采用二极管阵列检测器，检测波长270 nm；进样量20 μL。结果表明，磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺间甲氧嘧啶（SMM）分别在进样浓度为31.25～500.00 μg/mL和12.50～200.00 μg/mL范围内呈良好线性关系（r2分别为0.9996和1.0000）；平均回收率分别为98.6%（SM2）和99.8%（SMM）；检出限分别为0.125 μg/mL（SM2）和0.225 μg/mL（SMM）。建立的方法简便、准确、可行，适用于氟苯尼考制剂中非法添加的磺胺二甲嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的检测。

关键词：氟苯尼考制剂；磺胺二甲嘧啶；磺胺间甲氧嘧啶

中图分类号：S859文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）07-0129-03

AbstractA detection method of SM2 and SMM illegally adulterated in florfenicol preparations were established by high performance liquid chromatography （HPLC）. The chromatography was performed with C18 column at 270 nm using PDAD. The mobile phase consisted of a mixture of acetonitrile-0.2%acetic acid （27∶73） at a constant flow rate of 1.0 mL/min. The injection volume was 20 μL. The results showed that there were good linear relations （with r2 as 0.9996 and 1.0000 respectively） when the injection concentration was 31.25～500.00 μg/mL （SM2） and 12.50～200.00 μg/mL （SMM） repectively. The average recovery rate was 98.6% （SM2） and 99.8% （SMM）. The detection limit was 0.125 μg/mL（SM2） and 0.225 μg/mL（SMM） respectively. This method was simple， accurate and feasible and was suitable for detection of SM2 and SMM illegally adulterated in florfenicol preparations.

Key wordsFlorfenicol preparations； SM2； SMM

氟苯尼考是20世纪80年代研制的一种兽医专用氯霉素类广谱抗菌药，为氯霉素的结构同系物，在作用机理及抗菌谱方面与氯霉素和甲砜霉素相似，但却不会产生类似氯霉素和甲砜霉素质粒介导的耐药性，而且对许多氯霉素耐药菌株仍然敏感，因此在我国当前兽药市场具有很好的应用前景[5]。然而近年来，兽药中非法添加的现象愈演愈烈，农业部针对此现象调研并展开了系列非法添加物检查方法的研究工作[4]。本试验就氟苯尼考制剂中非法添加磺胺二甲嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的检测标准进行了研究。

1材料与方法

1.1仪器

Waters e2695高效液相色谱仪，Waters 2998 二极管阵列检测器，AE240梅特勒电子天平。

1.2试药

磺胺间甲氧嘧啶（SMM）对照品，中国兽医药品监察所，批号C0031007，含量99.4%；磺胺二甲嘧啶（SM2）对照品，中国兽医药品监察所，批号H0371008，含量99.8%；甲醇为色谱纯；冰醋酸为优级纯。

1.3试验方法

1.3.1色谱条件Waters Atlantis T3 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.2%冰醋酸溶液（27∶73）；流速1.0 mL/min；检测波长270 nm；进样量20 μL。

1.3.2溶液的制备 ①对照品溶液的制备：分别称取SM2、SMM对照品适量，用0.1 mol/L NaOH溶液超声处理溶解后，加27%乙腈水溶液分别制成每1 mL含1.0、0.5 mg的溶液，再分别取适量以27%乙腈水溶液稀释10倍，作为对照品溶液。

②空白溶液的制备：取氟苯尼考制剂适量，用流动相稀释成含氟苯尼考50 μg/mL的溶液，作为空白溶液。

③供试品溶液的制备：在氟苯尼考制剂中添加SM2、SMM，用流动相配制成含氟苯尼考50 μg/mL、SM2 100 μg/mL、SMM 50 μg/mL的溶液。

1.3.3专属性考察按上述色谱条件，对供试品溶液和空白溶液进行分析比对，以确定氟苯尼考是否对SM2、SMM峰有影响。

1.3.4最低检测限按上述色谱条件，对对照品溶液进一步稀释，同时记录色谱图及光谱图。报告溶液光谱图失真的最大浓度为检测限。

1.3.5线性关系考察精密量取对照品溶液，加27%乙腈水溶液稀释分别制成含SM2 31.25、62.50、125.00、250.00、500.00 μg/mL的溶液，按上述色谱条件分析，以峰面积对进样浓度进行回归，求SM2的回归方程；同法稀释分别制成含SMM 12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 μg/mL的溶液，求SMM的回归方程。

1.3.6中间精密度试验于不同时间制备3批样品，由不同人员进行检测，每份样品至少进样两次，取平均值。

1.3.7回收率试验用对照品分别配制相当SM2、SMM测试浓度的80%、100%、120%的系列溶液，进样分析并计算回收率。

2结果与分析

2.1专属性考察结果

供试品溶液和空白溶液色谱图对比结果见图1～2，表明空白溶液中无SM2、SMM吸收峰，氟苯尼考峰与SM2、SMM色谱峰分离度符合要求。

3判定依据

在相同试验条件下，供试品色谱图中如出现色谱峰与相应对照品峰保留时间一致（差异小于等于±5%）；并且在200～400 nm波长范围内，如供试品色谱图中与对照品相应保留时间处有色谱峰检出，分别提取相同保留时间的色谱峰峰顶点的光谱图，二者的光谱图无明显差异且最大吸收波长一致（差异小于等于±2 nm），判为检出各测试药物。

若峰形和测定数值结果无法判定，用重叠色谱法判定，即将对照品溶液与供试品溶液按1∶1比例混合进样，按如下两种方式进行判定：①如果供试品色谱峰在与对照品保留时间相同处有色谱峰，且色谱峰半峰宽变化不大于10%，峰高或峰面积成比例变化，判为检出各测试药物；②如果供试品色谱峰峰面积小于对照品检测限峰面积，则判为未检出各测试药物。

4小结

磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺间甲氧嘧啶（SMM）同属于磺胺类药物，是一种广谱抗菌药，其不合理使用会引起在动物性食品中残留等进而危害到人类健康[2，3]。目前，我国还没有关于氟苯尼考制剂中添加磺胺类药物的检测标准，类似于此种的非法添加现象就给兽药监管带来了困难。本试验对色谱条件、专属性、最低检测限、线性关系、回收率等方面进行考察，建立了高效液相色谱法测定氟苯尼考制剂中非法添加SM2和SMM的方法。本方法相对于以往测定SM2和SMM含量常用到的滴定法、紫外法而言具有重现性好、影响因素少、引入物质少等优点，大大提高了检测效率[1]。试验结果也表明，本研究建立的方法精密度、线性、回收率试验均符合《中国兽药典》要求，能有效检测氟苯尼考制剂中是否添加SM2、SMM及其添加量。

参考文献：

[1]中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典一部[M].2010年版.北京：中国农业出版社，2011.

[2]孙雷，毕言锋，李丹，等. 猪肉中磺胺类药物残留检测能力验证分析[J].中国兽药杂志， 2012，46（2）：23-26.

[3]王云龙，闵红岩. 磺胺类药物在养猪生产中的正确使用[J].中国兽药杂志， 2004， 38（9）：52.

[4]农业部.关于组织开展中兽药非法添加禁用药物和其他药物成分检测查处工作的通知[Z].2009.

[5]朱力军，赵晖.高效液相色谱法测定氟苯尼考及其制剂的含量[J].中国兽药杂志， 2000， 34（6）：19-20.

1.3.6中间精密度试验于不同时间制备3批样品，由不同人员进行检测，每份样品至少进样两次，取平均值。

1.3.7回收率试验用对照品分别配制相当SM2、SMM测试浓度的80%、100%、120%的系列溶液，进样分析并计算回收率。

2结果与分析

2.1专属性考察结果

供试品溶液和空白溶液色谱图对比结果见图1～2，表明空白溶液中无SM2、SMM吸收峰，氟苯尼考峰与SM2、SMM色谱峰分离度符合要求。

3判定依据

在相同试验条件下，供试品色谱图中如出现色谱峰与相应对照品峰保留时间一致（差异小于等于±5%）；并且在200～400 nm波长范围内，如供试品色谱图中与对照品相应保留时间处有色谱峰检出，分别提取相同保留时间的色谱峰峰顶点的光谱图，二者的光谱图无明显差异且最大吸收波长一致（差异小于等于±2 nm），判为检出各测试药物。

若峰形和测定数值结果无法判定，用重叠色谱法判定，即将对照品溶液与供试品溶液按1∶1比例混合进样，按如下两种方式进行判定：①如果供试品色谱峰在与对照品保留时间相同处有色谱峰，且色谱峰半峰宽变化不大于10%，峰高或峰面积成比例变化，判为检出各测试药物；②如果供试品色谱峰峰面积小于对照品检测限峰面积，则判为未检出各测试药物。

4小结

磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺间甲氧嘧啶（SMM）同属于磺胺类药物，是一种广谱抗菌药，其不合理使用会引起在动物性食品中残留等进而危害到人类健康[2，3]。目前，我国还没有关于氟苯尼考制剂中添加磺胺类药物的检测标准，类似于此种的非法添加现象就给兽药监管带来了困难。本试验对色谱条件、专属性、最低检测限、线性关系、回收率等方面进行考察，建立了高效液相色谱法测定氟苯尼考制剂中非法添加SM2和SMM的方法。本方法相对于以往测定SM2和SMM含量常用到的滴定法、紫外法而言具有重现性好、影响因素少、引入物质少等优点，大大提高了检测效率[1]。试验结果也表明，本研究建立的方法精密度、线性、回收率试验均符合《中国兽药典》要求，能有效检测氟苯尼考制剂中是否添加SM2、SMM及其添加量。

参考文献：

[1]中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典一部[M].2010年版.北京：中国农业出版社，2011.

[2]孙雷，毕言锋，李丹，等. 猪肉中磺胺类药物残留检测能力验证分析[J].中国兽药杂志， 2012，46（2）：23-26.

[3]王云龙，闵红岩. 磺胺类药物在养猪生产中的正确使用[J].中国兽药杂志， 2004， 38（9）：52.

[4]农业部.关于组织开展中兽药非法添加禁用药物和其他药物成分检测查处工作的通知[Z].2009.

[5]朱力军，赵晖.高效液相色谱法测定氟苯尼考及其制剂的含量[J].中国兽药杂志， 2000， 34（6）：19-20.

1.3.6中间精密度试验于不同时间制备3批样品，由不同人员进行检测，每份样品至少进样两次，取平均值。

1.3.7回收率试验用对照品分别配制相当SM2、SMM测试浓度的80%、100%、120%的系列溶液，进样分析并计算回收率。

2结果与分析

2.1专属性考察结果

供试品溶液和空白溶液色谱图对比结果见图1～2，表明空白溶液中无SM2、SMM吸收峰，氟苯尼考峰与SM2、SMM色谱峰分离度符合要求。

3判定依据

在相同试验条件下，供试品色谱图中如出现色谱峰与相应对照品峰保留时间一致（差异小于等于±5%）；并且在200～400 nm波长范围内，如供试品色谱图中与对照品相应保留时间处有色谱峰检出，分别提取相同保留时间的色谱峰峰顶点的光谱图，二者的光谱图无明显差异且最大吸收波长一致（差异小于等于±2 nm），判为检出各测试药物。

若峰形和测定数值结果无法判定，用重叠色谱法判定，即将对照品溶液与供试品溶液按1∶1比例混合进样，按如下两种方式进行判定：①如果供试品色谱峰在与对照品保留时间相同处有色谱峰，且色谱峰半峰宽变化不大于10%，峰高或峰面积成比例变化，判为检出各测试药物；②如果供试品色谱峰峰面积小于对照品检测限峰面积，则判为未检出各测试药物。

4小结

磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺间甲氧嘧啶（SMM）同属于磺胺类药物，是一种广谱抗菌药，其不合理使用会引起在动物性食品中残留等进而危害到人类健康[2，3]。目前，我国还没有关于氟苯尼考制剂中添加磺胺类药物的检测标准，类似于此种的非法添加现象就给兽药监管带来了困难。本试验对色谱条件、专属性、最低检测限、线性关系、回收率等方面进行考察，建立了高效液相色谱法测定氟苯尼考制剂中非法添加SM2和SMM的方法。本方法相对于以往测定SM2和SMM含量常用到的滴定法、紫外法而言具有重现性好、影响因素少、引入物质少等优点，大大提高了检测效率[1]。试验结果也表明，本研究建立的方法精密度、线性、回收率试验均符合《中国兽药典》要求，能有效检测氟苯尼考制剂中是否添加SM2、SMM及其添加量。

参考文献：

[1]中国兽药典委员会. 中华人民共和国兽药典一部[M].2010年版.北京：中国农业出版社，2011.

[2]孙雷，毕言锋，李丹，等. 猪肉中磺胺类药物残留检测能力验证分析[J].中国兽药杂志， 2012，46（2）：23-26.

[3]王云龙，闵红岩. 磺胺类药物在养猪生产中的正确使用[J].中国兽药杂志， 2004， 38（9）：52.

[4]农业部.关于组织开展中兽药非法添加禁用药物和其他药物成分检测查处工作的通知[Z].2009.

[5]朱力军，赵晖.高效液相色谱法测定氟苯尼考及其制剂的含量[J].中国兽药杂志， 2000， 34（6）：19-20.