分化型甲状腺癌细胞免疫与侵袭性的相关性

韩 婷，梁 军，孟 超，杨 珂，李小毅，林岩松

1青岛大学医学院附属医院肿瘤科，山东青岛 266003 中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院 2病理科 3基本外科 4核医学科，北京 100730

·论 著·

分化型甲状腺癌细胞免疫与侵袭性的相关性

韩 婷1，梁 军1，孟 超1，杨 珂2，李小毅3，林岩松4

1青岛大学医学院附属医院肿瘤科，山东青岛 266003 中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院2病理科3基本外科4核医学科，北京 100730

目的探讨分化型甲状腺癌 (DTC)免疫状态与侵袭性的关系。方法以2012年9月至12月在北京协和医院核医学科就诊的74例DTC患者为研究对象，根据有无包膜侵犯分为侵犯组 (n=36)和未侵犯组 (n=38)，有无远处转移分为转移组 (n=18例)和未转移组 (n=56)，选择NK细胞和T细胞亚群作为细胞免疫指标，探讨细胞免疫与甲状腺癌侵袭性的相关性。结果单因素分析结果显示，包膜侵犯 (χ2=12．175，P=0．000)和远处转移 (χ2=8．139，P=0．006)与细胞免疫指标异常相关，远处转移与是否合并桥本氏病相关 (χ2=7．094，P=0．008);进一步分析结果显示，远处转移与CD8+T细胞异常 (χ2=5．429，P=0．020) 相关，包膜侵犯与NK细胞异常 (χ2=2．445，P=0．018) 和CD4/CD8异常 (χ2=8．079，P=0．002)相关。多因素分析结果显示，细胞免疫异常是包膜侵犯 ［OR=5．701，95%CI(2．075～15．666)，P=0．001］ 和远处转移 ［OR=5．063，95%CI(1．571 ～16．320)，P=0．008］ 的危险因素; 进一步分析结果显示，CD8+异常是远处转移的危险因素 ［OR=2．236，95%CI(1．084～4．613)，P=0．029］，CD4/CD8异常是包膜侵犯的危险因素 ［OR=2．802，95%CI(1．257～6．244)，P=0．012］。结论DTC患者免疫状态与肿瘤的局部侵袭和远处转移密切相关，当CD8+T细胞百分比降低和NK细胞、CD4/CD8异常时，易出现局部侵袭和远处转移。

分化型甲状腺癌;远处转移;局部侵袭;细胞免疫

Acta Acad Med Sin，2014，36(1)：42-46

甲状腺癌是最常见的头颈部恶性肿瘤之一，既可以原位静止状态存在，又可以迅速远处转移。研究发现，肿瘤的发生发展与宿主免疫状态密切相关［1］，但有关甲状腺癌患者自身免疫状态与局部侵袭及远处转移的关系尚存在争议［2-3］。本研究探讨了分化型甲状腺癌 (differentiated thyroid cancer，DTC)患者细胞免疫与侵袭性的关系。

对象和方法

对象及分组2012年9月至2012年12月在北京协和医院核医学科就诊的DTC患者74例，其中，男28例，女46例;平均年龄 (42．1±11．9) 岁 (11～64岁)，45岁以下50例，45岁及以上24例;所有患者均行甲状腺全切术及淋巴结清扫术，术后病理确诊为DTC，TNM分期Ⅰ期42例，Ⅱ期7例，Ⅲ期3例，Ⅳ期22例;均未经131I治疗。根据有无包膜侵犯分为侵犯组 (n=36)和未侵犯组 (n=38);根据有无远处转移分为转移组 (n=18例)和未转移组 (n=56)。确定患者远处转移的方法包括胸部高分辨率电子计算机X射线断层扫描技术 (high resolution computed tomography，HRCT)、131I诊断性全身显像及手术病理检查。18例有远处转移的患者中，10例由HRCT及131I诊断性全身显像确定，5例由HRCT及高Tg值确定，2例由HRCT确定，1例由131I诊断性全身显像及高Tg值确定。3例患者合并2型糖尿病，4例合并高血压，2例合并妇科疾病，1例合并系统性红斑狼疮，以上患者的合并症均可控制。

方法以自然杀伤 (natural killer，NK)细胞与T细胞亚群 (CD4+、CD8+、CD4/CD8)作为反映细胞免疫的指标，采用流式细胞仪对T细胞亚群 (CD3+、CD4+、CD8+)和NK细胞进行检测，所有患者均在术后、行放射性核素治疗前测定上述细胞免疫指标1次，后随诊时定期复查。正常值的参考范围： (1)NK细胞：8% ～26%;(2)CD3+T淋巴细胞：61% ～85%;(3)CD4+T细胞：28% ～58%; (4)CD8+T细胞：19% ～48%;(5)CD4/CD8：0．9 ～2．0。

统计学处理采用SPSS 17．0统计软件，计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用独立样本t检验，计数资料行χ2检验，评价免疫指标与DTC临床、病理特征的关系行单因素分析和多因素Logistic回归分析，P＜0．05为差异有统计学意义。

结 果

包膜侵犯及未侵犯组，有、无远处转移组的CD3+、CD4+、CD8+、CD4/CD8和NK水平间水平见表1。根据TNM分期，包膜侵犯和未侵犯组分别有2例 (5．2%)和20例 (55．6%)处于Ⅳ期，有、无远处转移组分别有11例 (19．6%) 和11例 (61．1%) 处于Ⅳ期。

单因素分析结果显示，包膜侵犯 (χ2=12．175，P=0．000) 和远处转移 (χ2=8．139，P=0．006) 与细胞免疫指标异常相关，远处转移与是否合并桥本氏病相关 (χ2=7．094，P=0．008)。多因素分析结果显示，细胞免疫异常是DTC包膜外侵犯 ［OR=5．701，95%CI(2．075 ～ 15．666)，P=0．001］ 和远处转移［OR=5．063，95%CI(1．571 ～ 16．320)，P=0．007］的危险因素 (表2、3)。

表1 淋巴细胞亚群及NK细胞检测结果Table 1 Lymphocyte subgroups and NK cells

表2 包膜侵犯的相关因素分析Table 2 Analysis on membrane invasion relevant factors

表3 远处转移的相关因素分析Table 3 Analysis on distant metastasis relevant factors

在细胞免疫中，单因素分析结果显示，远处转移相关与 CD8+T 细胞异常 (χ2=5．429，P=0．020)，包膜侵犯与NK细胞异常 (χ2=2．445，P=0．018) 和CD4/CD8 异常 (χ2=8．079，P=0．002) 相关 (表4)。多因素分析结果显示，CD8+异常是远处转移的危险因素 ［OR=2．236，95%CI(1．084 ～ 4．613)，P=0．029］，CD4/CD8异常是包膜侵犯的危险因素［OR=2．802，95%CI(1．257 ～ 6．244)，P=0．012］(表5)。

讨 论

DTC主要包括乳头状癌 (papillary thyroid cancer，PTC)和滤泡癌 (follicular thyroid cancer，FTC)，占甲状腺癌的90%以上［4］。近来研究显示，甲状腺癌发病率逐年增高，主要以PTC增高为主，其诱因与发病机制越来越引人关注。有研究报道，甲状腺癌患者CD4+T淋巴细胞，CD4/CD8及NK细胞活性明显低于正常人，而CD8+T淋巴细胞活性增高，且该现象随TNM分期进展更趋于明显［2］。也有报道提示，CD4+和CD4/CD8持续下降可能与甲状腺癌复发有关［5］。这些结果提示，细胞免疫在甲状腺癌患者中可能发挥主要作用，T细胞各亚群之间相互作用，特别是CD4和CD8在体内免疫调节中可能起重要作用。研究显示，正常人体内CD4/CD8以2～2．5∶1存在于血液中，当比值偏离正常值时，说明免疫状态处于异常［6］。但上述研究并未针对甲状腺癌具体病理类型进行细化的研究。因此，本研究选择甲状腺癌中发病率最高且以慢性侵袭性进程为特征［7］的DTC为主要研究对象，对DTC患者免疫功能异常与侵袭性和转移的进行了前瞻性研究。

本研究结果显示，当DTC患者免疫指标出现异常时，包膜侵犯和远处转移风险增高，且其远处转移与是否合并桥本氏并相关，细胞免疫在DTC患者的免疫功能异常中占主导地位，与以往研究结果一致［2，8］。CD4+T细胞作为辅助性T淋巴细胞在CD8+T淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤效应中起重要辅助作用，而NK细胞在肿瘤的免疫防御中既具有防御功能又具有杀伤效应。本研究结果显示，CD8+T细胞亚群百分比降低与远处转移存在相关性，推测CD8+T细胞作为细胞毒性杀伤细胞，数量减少使免疫系统的杀伤能力减弱，不能阻止肿瘤细胞快速生长、转移。同时，CD4/CD8比值异常与DTC包膜侵犯相关，并发现当其比值下降时包膜侵犯的风险更大，推测其可能是肿瘤细胞分泌免疫抑制性因子，刺激产生抑制性T细胞，降低CD4+T淋巴细胞的数量，使其比值下降。此外，本研究结果还显示，NK细胞异常与包膜侵犯相关，推测NK细胞作为非特异性免疫细胞，可通过激活免疫球蛋白超家族受体与肿瘤细胞相互作用［11］，其具体机制尚待进一步研究。

表4 NK细胞和T细胞亚群与临床病理特征单因素分析结果Table 4 Univariate analysis on the clinicopathological features of NK cells and T cells subgroup

表5 NK细胞、CD8+细胞及CD4/CD8的Logistic回归分析结果Table 5 Logistic analysis of NK cell，CD8+ ，and CD4/CD8

综上，本研究结果显示，DTC患者免疫状态与肿瘤的局部侵袭和远处转移密切相关，当CD8+T细胞百分比降低和NK细胞、CD4/CD8异常时，易出现局部侵袭和远处转移，监测患者外周血NK细胞和T细胞亚群，有助于指导临床从免疫角度进行治疗干预。

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Correlations between Cellular Immunity and Invasiveness in Differentiated Thyroid Cancer

HAN Ting1，LIANG Jun1，MENG Chao1，YANG Ke2，LI Xiao-yi3，LIN Yan-song4

1Department of Oncology，the Affiliated Hospital of Qingdao Medical College，Qingdao University，Qingdao，Shandong 266003，China
2Department of Pathology，3Department of General Surgery，4Department of Nuclear Medicine，PUMC Hospital，CAMS and PUMC，Beijing 100730，China

LIN Yan-song Tel：010-69155610，E-mail：linys@pumch．cn

ObjectiveTo investigate the relationship between the immunity and invasiveness in differentiated thyroid cancer(DTC)．MethodsTotally 74 DTC who were treated in Peking Union Medical College Hospital from September 2012 to December 2012 were enrolled in this study．These 74 patients were divided into membrane invasion group(n=36)and without membrane invasion group(n=38);also，they were divided into distant metastasis group(n=18)and without distant metastasis group(n=56)．Natural killer(NK)cells and T-cell subsets were chosen as indicators for cellular immunity to investigate the correlation between cellular immunity and invasiveness in DTC．ResultsUnivariate analysis showed that the membrane invasion( χ2=12．175，P=0．000)and distant metastasis( χ2=8．139，P=0．006)correlated with cell immunity，where-as distant metastasis correlated with lymphocytic thyroiditis( χ2=7．094，P=0．008) ．Further investigation shows that distant metastasis was associated with the percentage of CD8+T cell subgroup( χ2=5．429，P=0．020)，and membrane invasion was significantly associated with NK cells( χ2=2．445，P=0．018)and CD4/CD8 disorder subgroup( χ2=8．079，P=0．002) ．Multivariate analysis showed that cell immunity disorder was a risk factor for membrane invasion ［OR=5．701，95%CI(2．075 ～15．666)，P=0．001］ and distant metastasis ［OR=5．063，95%CI(1．571 ～16．320)，P=0．008］．Further analysis showed that CD8+T cell was a risk factor for metastasis ［OR=2．236，95%CI(1．084 ～4．613)，P=0．029］，and CD4/CD8 disorders were the risk factors for membrane invasion ［OR=2．802，95%CI(1．257 ～6．244)，P=0．012］．ConclusionCell immunity in thyroid cancer has close relationship with membrane invasion and distant metastasis，especially when the percentage of CD8+T cells decreases and when the NK cells and CD4/CD8 are abnormal，which may lead to membrane invasion and distant metastasis．

differentiated thyroid cancer;distant metastasis;regional invasiveness;cellular immune system

林岩松 电话：010-69155610，电子邮件：linys@pumch．cn

R581

A

1000-503X(2014)01-0042-05

10．3881/j．issn．1000-503X．2014．01．008

卫生部行业科研专项项目 (201202012)Supported by the Ministry of Health Industry Special Scientific Research Projects(201202012)

2013-06-27)