孙慕白,金 竺
(1.东北林业大学生命科学院,哈尔滨 150040;2.长春市中医院,长春 130022)
红参炮制工艺及质量研究
孙慕白1,金 竺2*
(1.东北林业大学生命科学院,哈尔滨 150040;2.长春市中医院,长春 130022)
目的 细化红参的炮制工艺参数,为红参的炮制规范提出参考性建议,完善红参的质量标准。方法 采用单因素考察的方法细化红参的炮制时间和温度,利用薄层色谱法建立红参的特征指纹谱,采用紫外分光光度法测定红参中总皂苷的含量。结果 确定红参的炮制时间为3 h,炮制温度为100℃;红参特征指纹谱Rf值范围为0.5~0.9;红参中总皂苷含量不低于1.97%。结论 从外观评价与薄层色谱细化了红参的炮制工艺,完善了红参的质量标准,为红参的开发提供了依据。
红参;炮制工艺;指纹图谱;含量测定
通过人参与红参药理作用的比较可以看出[1-3],人参经加工炮制后不但使成分发生变化,产生了新的成分,而且某些成分间的含量比例也随之发生改变,从而直接造成了红参的某些药理作用的性质和强度和人参形成差别。红参皂苷成分的研究晚于人参皂苷成分的研究。近年来,对其加工方法的探讨很多,认为红参较之人参有防虫蛀、防腐、易于保存、保持药效等优点。相反,目前市场上流通的红参却并没有严格的炮制规范,产地、外观、含量等均有不同程度的差异,这无疑对红参的疗效有着很大的影响。因此,本文从红参的炮制方法研究入手,通过对时间、温度等不同条件的摸索,细化红参的炮制工艺参数,为红参的炮制方法提出参考性建议,同时增加了红参薄层色谱鉴别及总皂苷含量测定项,为控制红参质量标准提供依据,填补了有关红参质量研究的空白。
1.1 药材 鲜参药材,购于靖宇县海源中药材饮片有限公司,经长春中医药大学鉴定为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.(Panax schinseng Nees)的根,符合《中国药典》(2005年一部)人参的质量标准。
1.2 仪器与试药 蒸参箱(上海南阳仪器有限公司);50探头型紫外可见分光光度计(美国Varian公司);DZF-6050K型真空干燥箱(上海横科科技有限公司)。人参 Re、Rb1、Rg1、Rg2 对照品(批号:111846-201001,供含量测定用,规格:20 mg,购于中国药品生物制品检定所);其他试剂均为分析纯。
2.1 炮制工艺考察 从检索文献[4-6]得出红参的炮制过程可分为净制、蒸制、烘干、晾晒、二次烘干5个过程,在此基础上,实验又针对不同因素影响红参炮制工艺进行了考察,包括时间及温度。
2.1.1 时间因素的考察 首先取3分人参放入带有屉布的蒸参箱内,将温度设置为100℃,分别蒸制1,3,5 h。将蒸制好的人参取出,放凉,切片,放入50℃真空干燥箱内至参片完全干燥,此过程约需要48 h。
2.1.2 温度因素的考察 再取等量3分人参,分别放入带有屉布的蒸参箱中,将蒸参箱分别设为80,100,120℃,蒸制3 h。将蒸制好的人参取出,放凉,切片,放入50℃真空干燥箱内至参片完全干燥,此过程约需要48 h。
2.2 红参的质量研究
2.2.1 薄层色谱鉴别[6]
2.2.1.1 对照品溶液的制备 取人参皂苷Re对照品,加甲醇制成1 mL含2 mg的溶液作为对照品溶液。
2.2.1.2 供试品溶液的制备 取不同炮制条件下干燥后的红参片,粉碎,过40目筛,分别取本品粉末1 g,置圆底烧瓶中,加入三氯甲烷40 mL,加热回流1 h。弃去三氯甲烷液,药渣挥干溶剂,加水0.5 mL搅拌湿润,加水饱和正丁醇10 mL,超声处理30 min,吸取上清液加三倍量氨试液(配制方法依药典附录:浓氨水400 mL加水至1 000 mL),摇匀,放置分层,取上层置蒸发皿中蒸干,残渣加甲醇1 mL,使溶解,作为供试品溶液。
2.2.1.3 展开 以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干。
2.2.1.4 检视 喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光灯及紫外灯(365 nm)下检视。
2.2.1.5 结果 100℃条件下蒸制1,3,5 h以及Re对照品。展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)下层溶液。由此薄层板可以看出,温度不变的条件下,蒸制3 h与蒸制5 h斑点颜色较深,说明皂苷含量相对较多,且二者的皂苷种类也多于蒸制1 h的红参。说明在温度不变的情况下蒸制3 h与蒸制5 h为较优炮制工艺。
炮制3 h条件下,80,100,120℃以及Re对照品,展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)下层溶液。由此薄层板可以看出,在时间不变的条件下,温度在100℃时人参皂苷Re的斑点较清晰,含量较多,其皂苷种类也多于80℃的炮制品。而在120℃相对于其他2种条件某些斑点颜色很浅而某些斑点颜色很深,说明某些成分发生了转移。
2.2.2 红参总皂苷含量测定原理及方法[7-8]分光光度法是通过测定被测物质在特定波长或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性和定量分析的方法。常用的波长范围为:1)200~400 nm的紫外光区;2)400~760 nm的可见光区;3)2.5~25 μm的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计。单色光辐射穿过被测的物质溶液时,被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度成正比,其关系如下:A=ECL,式中A为吸收度,T为透光率,E为吸收系数,采用的表示方法是(E1%1 cm),即吸收度换算成溶液浓度为1%(g/mL),液层厚度为1 cm的数值;C为100 mL溶液中所含被测物质的重量,g按干燥品或无水物计算;L为液层厚度,单位为cm。
测定时应用标准品或对照品同时操作。
2.2.3 方法学考察[9]
2.2.3.1 对照品溶液的制备 取人参皂苷Re对照品适量,精密称定,加甲醇溶解制成浓度1.012 mg/mL的对照品溶液。
2.2.3.2 供试品溶液的制备 取样品粉末(过4号筛)约0.5 g,精密称定,置离心管中,加甲醇约20 mL,超声(功率250 W,频率20 kHz)提取3次,20 min/次,离心,分离甲醇并蒸干,残渣加10 mL水超声溶解,转移至分液漏斗中,加水饱和正丁醇振摇提取3次,20 mL/次,合并正丁醇液,移至分液漏斗中,加入氨试液洗涤2次,每次20 mL,弃去氨试液,分取正丁醇提取液,水浴蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶内,摇匀,滤过,作为供试品溶液。
2.2.3.3 检测波长的选择 精密吸取人参皂苷Re对照品,供试品溶液适量,置10 mL具塞试管中,水浴挥干溶剂,精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL,再精密加入高氯酸溶液0.8 mL混匀,置60℃水浴中15 min取出,立即放入冰水浴中2 min,精密加入冰醋酸5 mL混匀,消除气泡后置紫外扫描仪器上,结果表明,人参皂苷Re对照品溶液和供试品溶液在547 nm处有最大吸收,确定547 nm为红参总皂苷的检测波长。
2.2.3.4 标准曲线的建立 精密称取干燥恒重的人参皂苷Re对照品5.0 mg,置25 mL容量瓶中,加乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀。精密吸取上述对照品溶液0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mL,分别置于 10 mL 容量瓶中,并各加乙醇1.0 mL,然后精密加蒸馏水稀释至刻度,摇匀。同时取乙醇1.0 mL,置于10 mL容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度,作为空白对照。于547 nm波长处测定吸光度。以对照品溶液浓度C(mg/mL)为横坐标(X),吸光度A为纵坐标(Y),进行线性回归,绘制标准曲线,得回归方程A=32.65C-0.000 2,r=0.998 9。结果显示,人参皂苷 Re对照品在0.041 2~0.202 3 mg范围内线性关系良好。
2.2.3.5 精密度试验 依法精密称取同一供试品按上述方法连续测定6次,计算供试品含量,以考察本方法的重现性。求得平均吸收度0.4186,RSD为1.17%。
2.2.3.6 重复性试验 称取6分红参各0.5 g,精密称定,按供试品项下操作,制得供试品溶液,进行测定。计算求得平均含量为2.46%,RSD为1.51%。
2.2.3.7 稳定性试验 取红参供试品溶液分别在0,0.5,1,1.5,2,2.5,3 h 进行测定,计算平均吸收度0.515 2,RSD为1.03%。结果表明样品在3 h内稳定。
2.2.3.8 回收率试验 采用加样回收率试验法,精密称定已知含量的供试品置100 mL容量瓶中,按供试品溶液的制备方法制成供试品溶液,并依法测定,计算回收率。结果平均回收率为98.05%,RSD为2.07%。
2.2.4 样品中总皂苷含量测定结果 分别将上述选定的2种炮制品分别制成供试品溶液,按上述方法进行测定。结果见表1。
表1 总皂苷含量测定结果(n=3)
本文为红参的炮制规范提供了数据支持,建议在今后的红参炮制中可依据不同人群的不同需求采用不同的炮制方法,达到充分利用红参或达到最大药效发挥的目的。也可为红参提供更广阔的市场需求,使消费者更明确的购买到所需红参品种。建议在今后的药典中可加入红参炮制规范的相关内容以及红参薄层色谱的特殊鉴别,使红参质量标准更加全面。
红参炮制过程中蒸制时间对人参皂苷含量有显著影响,而提温时间对人参皂苷含量影响不大。但是提温时间明显决定着红参的外观。温度过高,红参失水过快而导致许多纵皱纹,而温度过高容易使红参颜色过暗。
通过对红参不同炮制工艺的考察,对比了在不同炮制条件下红参中总皂苷的含量差异,说明了在不同温度,不同时间下红参中总皂苷含量虽无明显差异,但皂苷的种类仍然是有差异的,说明在《中国药典》2005年版中红参的薄层鉴别仅以人参为参考是不全面的。
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Processing technology and quality of red ginseng
SUN Mubai1,JIN Zhu2*
(1.Northeast University of Forestry,Biological Science,Haerbin 150040,China;2.Changchun Hospital of TCM,Changchun 130022,China)
ObjectiveThrough the refinement of processing technology parameters of red ginseng,referential suggestions are made for standards of red ginseng processing to improve its quality standard.MethodsThrough single factor investigation,researchers classify the time and temperature in red ginseng's processing.Thin layer chromatography is used to establish the dactylogram for red ginseng's characteristics;ultraviolet spectrophotometry is used to examine the amount of saponins in red ginseng.ResultsThe processing time of red ginseng is 3 hours and the processing temperature 100 ℃.In the dactylogram for red ginseng's characteristics,its Rf value was 0.5 ~0.9 and the volume of saponin in red ginseng is no less than 1.97%.ConclusionThrough the evaluation on its appearance and refinement of its processing technology,the research improved the quality standards for red ginsen and provided the basis for the development of red ginseng.
red ginseng;processing technology;dactylogram;quantity examination
R283.4
A
2095-6258(2014)04-0611-03
10.13463/j.cnki.cczyy.2014.04.018
吉林省科技厅计划项目(20110908)。
孙慕白(1992-),女,大学本科。研究方向:生物科学。
金 竺,女,硕士,电话:18743062321,电子信箱:584673587@qq.com。
2014-04-08)