CIP2A在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

黎 剑 于晓红 杜 峰 谢 康 魏玲丽 黄雅娟 张 乐

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，早期患者预后较好，但晚期乳腺癌预后仍较差。目前研究认为，乳腺癌的发生、发展与癌基因关系密切[1-2]。蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)的癌性抑制因子(cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A)是最近被发现的1种癌蛋白[3]。其在乳腺癌中的表达情况及其与临床病理的相关性仍不十分清楚。本研究应用免疫组织化学S-P法及RT-PCR检测CIP2A在乳腺癌组织及癌旁组织的表达，探讨乳腺癌组织中CIP2A表达，以及与患者预后的关系。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2010年1月-2012年12月我院乳腺外科收治的70例行手术切除的临床病理资料保存完整的乳腺癌石蜡切块，癌旁组织取自距癌组织0.5～1.0 cm。70例乳腺癌患者，年龄29～74岁，平均(48.6±13.2)岁；鳞状细胞癌46例，腺细胞癌24例；病理分级：G1～G2级39例，G3级31例；根据美国癌症联合委员会(AJCC)提出的分期标准进行临床分期：Ⅰ期35例，Ⅱ期9例，Ⅲ～Ⅳ期26例。所有病例术前均未行放化疗。另取20例正常乳腺组织作为对照组。上述组织均由同一副主任以上病理医师阅片明确病理诊断。

1.2 免疫组织化学

收集石蜡包埋的组织标本，切片(厚4～5 μm)，免疫组织化学采用S-P法，兔抗人CIP2A单克隆抗体(福建迈新生物工程公司)，工作浓度1∶20，S-P免疫组化试剂盒购自北京中杉桥生物公司，实验步骤按试剂盒说明书进行。PBS代替一抗作为阴性对照，已知抗体阳性标本作为阳性对照。

1.3 结果判定

CIP2A阳性染色信号为棕色细小颗粒，均位于细胞质。随机抽取10个高倍视野，结果判断采用半定量方法。按着色强度分：细胞无着色为0分；细胞着色为浅黄色为1分；细胞着色为棕黄色为2分；细胞着色为棕褐色为3分。阳性细胞百分率：无阳性细胞为0分；阳性细胞数<10%为1分；11%～50%为2分；51%～75%为3分；>75%为4分。上述两者积分相乘为最后结果：0～2分为-；3～5分为+；6～8分为++；9～12分为+++。3分及以上为阳性。

1.4 RT-PCR检测

将乳腺癌组织剪碎后提取总RNA，按照试剂盒说明书步骤进行RT-PCR检测，应用GeneSnap软件对成像进行分析。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 CIP2A在乳腺癌、癌旁及正常组织中的表达

CIP2A阳性染色定位于肿瘤细胞胞质中，呈棕色细小颗粒，也可以呈弥漫分布。在乳腺癌组织中CIP2A阳性表达率为65.7%(46/70)，而20例正常组织中仅2例阳性(10.0%)，两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)；癌旁组织中CIP2A阳性表达率为21.4%(15/70)，与正常组及乳腺癌组比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。

2.2 CIP2A mRNA在乳腺癌组织中的转录水平

乳腺癌组织中CIP2A mRNA阳性检出率为81.7%，高于癌旁组织中的26.7%。根据GeneSnap软件分析提示，乳腺癌组织中CIP2A mRNA的转录水平明显高于癌旁组织的，差异具有统计学意义(P<0 05)。

2.3 CIP2A表达与乳腺癌临床病理因素的关系

CIP2A阳性表达与乳腺癌患者年龄、家族史无关，而与肿瘤大小、病理类型、淋巴结有无转移、肿瘤组织学分级、病理分期及病理分级有关(P<0.05)，见表1。

3 讨论

表1 CIP2A表达与乳腺癌临床病理因素的关系(例，%)

CIP2A(cancerous inhibitor of PP2A)是近年来新发现的抑制蛋白磷酸酶2A(PP2A)活性的蛋白，大量研究表明，CIP2A在人肺癌、直肠癌、胃癌等中大量存在，而且与癌症的恶性程度密切相关，提示肿瘤的不良结局[4-6]。进一步研究证实，CIP2A在促进肿瘤细胞分裂和肿瘤生长方面起到关键作用[7]。CIP2A的大量扩增能防止肿瘤细胞的过度衰亡，使肿瘤细胞转化和增殖[8-10]。因此，推测CIP2A可能与癌症的起源、进展关系密切，被认为是新一代的癌症基因。

本研究结果表明，乳腺癌组织高表达CIP2A mRNA及蛋白，而且样本阳性率高于癌旁组织。结果提示，CIP2A的存在代表着细胞生物学转化的中间环节，其水平变化在正常组织向乳腺癌转化中起重要作用。同时，结合临床资料研究发现，我们回顾性分析CIP2A蛋白与乳腺癌各临床参数及预后的关系，结果显示CIP2A蛋白在乳腺癌中表达情况与患者家族史、肿瘤大小、病理类型、有无淋巴结转移有相关性。而且随着组织学分级和病理分期、分级的增加，CIP2A过表达也随之升高，差异有统计学意义，可以看出，CIP2A基因表达程度与肿瘤的发生、发展和恶性程度相关。

综上所述，CIP2A在乳腺癌中的异常表达与乳腺癌的发生展密切相关，有望成为早期诊断及预测乳腺癌预后的一个重要指标。

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