胃癌组织中p16、Cyclin D1和Survivin的表达及其相关性

魏卓文，党冬梅

(1.延安大学医学院2009级临床医学；2.延安大学医学院病原生物学教研室，陕西 延安 716000)

胃癌是常见的恶性肿瘤之一，其发生发展是一个极其复杂的过程，是多因素、多阶段、多基因共同作用而致的结果。p16、细胞周期素(Cyclin D1)是G1期细胞周期相关蛋白，当Cyclin D1表达失控时，引起细胞增殖周期失调，从而导致肿瘤发生。生存素(Survivin)是一种癌基因，高表达于多数肿瘤组织中。胃粘膜病变组织中p16、Cyclin D1和Survivin联合检测报道少见，因此本实验采用免疫组化(S-P法)检测胃癌及癌前病变组织中p16、Cyclin D1及Survivin的表达，探讨它们在胃癌发生发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

收集2012-09～2013-12本院病理科包埋蜡块组织120例，均经病理科确诊。其中，正常胃黏膜组织20例，不典型增生38例，胃癌组织62例，男39例，女23例，平均年龄50.6岁。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色 鼠抗人单克隆抗体Cyclin D1、兔抗人多克隆抗体Survivin均购自SantaCruz公司，鼠抗人单克隆抗体p16、S-P试剂盒、DAB显色试剂盒均购于北京中山金桥生物技术公司。实验步骤严格按试剂盒说明书进行，用PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性组织作阳性对照。

1.2.2 结果判断 p16阳性细胞核呈棕黄色，颗粒状，深浅不等。Cyclin D1阳性细胞核呈棕黄色。Survivin阳性为细胞浆呈棕黄褐色颗粒。每张切片随机选择10个视野，每个高倍视野计数100个细胞，共计1000个细胞，阳性细胞小于或等于10%为阴性，大于10%为阳性。

1.3 统计学方法

所有数据均用SPSS13.0统计软件进行分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 p16、Cyclin D1和Survivin在不同胃粘膜组织中的表达

正常胃黏膜和不典型增生组织中p16的表达率高于Cyclin D1和Survivin的表达，胃癌组织中p16的表达率低于二者(见表1)。

表1 p16、Cyclin D1和Survivin在不同胃粘膜组织中的表达[(n)%]

2.2 p16、Cyclin D1和Survivin的表达与胃癌临床病理参数的关系

p16、Cyclin D1和Survivin的表达与胃癌患者年龄、性别均无关；p16的表达与淋巴结转移相关(P<0.05)；Cyclin D1的表达与组织分化程度、淋巴结转移相关(P<0.001;P<0.05)；Survivin的表达与组织分化程度相关(P<0.05)(见表2)。

表2 p16、Cyclin D1和Survivin的表达与胃癌临床病理参数的关系[(n)%]

a.vs无淋巴结转移，x2=5.68，P<0.05；b.vs高中分化，x2=8.02，P<0.001；c.vs无淋巴结转移，x2=5.14，P<0.05；d.vs高中分化，x2=6.43，P<0.05.

2.3 p16、Cyclin D1和Survivin的相关性分析

经相关性分析，p16与Cyclin D1和Survivin在胃癌组织中的表达呈负相关(r=-0.486,P<0.05)，(r=-0.518,P<0.05)，Cyclin D1与Survivin呈正相关(r=0.431,P>0.05)。

3 讨论

p16是一个新型的抑癌基因，直接参与细胞生长增值负调控，p16基因突变、缺失和甲基化引起p16蛋白表达异常时，细胞增殖失控，导致肿瘤细胞无限制生长[1,2]。本研究发现，胃癌组织中p16蛋白表达显著低于正常胃粘膜组织和不典型增生，p16蛋白的低表达与淋巴结转移相关，提示p16基因的表达与胃癌的形成、转移均有关。

Cyclin D1在细胞周期G1-S期转换过程中起关键性作用，在生理状态下,细胞进入S期后Cyclin D1迅速分解。Cyclin D1过度表达可使CDK4对Rb蛋白调节失常，导致细胞失控性生长[3]。Cyclin D1可提高转录水平或者抑制转录而影响细胞的分化导致肿瘤形成[4]。近来研究发现，过度表达Cyclin D1的肿瘤组织更具有侵袭力，淋巴结转移率更高[5,6]。本研究表明，Cyclin D1在胃癌组织中的表达显著高于正常胃黏膜组织和不典型增生，Cyclin D1的过度表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移有关，提示Cyclin D1参与胃癌形成和进展。

Survivin在位于caspase存在的胞浆中具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂的功能,Survivin的过表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移状况密切相关，Survivin过表达预示着患者预后不良及低生存率[7]。Survivin表达于胚胎和多数恶性肿瘤组织，正常终末分化组织无表达[8]，当组织发生恶变时，会出现Survivin高表达，提示Survivin与组织的正常分化、自身稳定以及肿瘤的发生发展有着相当密切关系，与胃癌的形成和发展也有一定的相关性。本研究发现，Survivin在胃癌组织中的表达显著高于正常胃黏膜和不典型增生，其表达与胃癌的分化程度有关，提示其可能与胃癌的发生相关，是胃癌形成的重要因素。

本研究结果显示，随着胃粘膜病变的进展，p16蛋白的阳性表达率下降，而Cyclin D1和Survivin蛋白的阳性表达率升高，在正常胃黏膜组织和不典型增生组织中p16的表达率高于Cyclin D1和Survivin的表达，而在胃癌组织中p16的表达率低于二者；p16、Cyclin D1和Survivin的表达与胃癌患者年龄、性别均无关；p16的表达与淋巴结转移相关，(x2=5.68,P<0.05)；Cyclin D1的表达与组织分化程度、淋巴结转移相关(x2=8.02,P<0.001;x2=5.14,P<0.05)；Survivin的表达与组织分化程度相关(x2=6.43,P<0.05)；且p16与Cyclin D1在胃癌组织中的表达呈负相关(r=-0.486,P<0.05),p16与Survivin也呈负相关(r=-0.518,P<0.05),Cyclin D1与Survivin呈正相关(r=0.431,P>0.05)。因此联合检测胃黏膜组织中p16、Cyclin D1和Survivin蛋白的表达，对胃癌早诊断、早治疗及预后评估有一定的参考价值。

参考文献：

[1]Reika I,Takashi K,Yoichi A. Association of p16 homozy-gous deletions with clinicopathologic characteristics and EGFR/KRAS/p53 mutations in lung adenocarcinomaclin[J].Cancer Res,2008,14(12):3746-3753.

[2]Alfred K,Yin L,Chung Y. Clinicopathological roles of alterations of tumor suppressor gene p16 in papillary thyroid carcinoma[J].Ann Surg Oncol,2007,14(5):1772-1779.

[3]Ke Q,Yang R N,Ye F,et al. Impairment of liver regeneration by the histone deacetylase inhibitor valproic acid in mice[J].J Zhejiang Univ Sci B,2012,13( 9):695-706.

[4]Burd CJ,Petre CE,Moghadam H,et al. Cyclin D1 Binding to the Androgen Receptor(AR)NH2-Terminal Domain Inhibits Activation Function 2 Association and Reveals Dual Roles for AR Corepression[J].Mol Endocrinol,2005,19(3):607-620.

[5]Zhiping L,Chenguang W,Xuanmao J,et al. Cyclin D1 Regulates Cellular Migration through the Inhibition of Thrombospondin 1 and ROCK Signaling[J].Mol Cel Bio,2006,26(11):4240-4256.

[6]Gautschi O,Ratschiller D,Gugger M,et al. Cyclin D1 in non-small cell lung cancer:a key driver of malignant transformation[J].Lung Cancer,2007,55(1):1-14.

[7]张璐璐,谭 欣,何灏澜,等. Survivin与Cyclin D1在大肠息肉及大肠癌中的表达及相关性研究[J]. 现代肿瘤医学,2014,22(1):112-115.

[8] Ryan BM,O′Donovan N,Duffy MJ,Survivin:a new target for anti-cancer therapy[J]. Cancer Treat Rev,2009,35(7):553-562.