Clusterin 在肺癌中的表达及意义

申华峰 耿嘉男 李景贺 徐丽丽

(浙江省新昌县人民医院病理科，浙江 新昌 312500)

肺癌的预防与诊治始终是临床一大难题，最新调查显示我国肺癌的发病率、死亡率已位于八大肿瘤之首，可能与吸烟、人口老龄化以及工业化导致的环境恶化等多种原因有关〔1〕。Clusterin 最早发现于公羊睾丸液，主要作用为促进细胞聚集，现代医学研究表明Clusterin参与调控多种生理过程的细胞凋亡，而细胞凋亡抵抗是导致癌症发生、发展甚至死亡的主要原因之一。将Clusterin作为膀胱癌〔2〕和肾癌〔3〕等疾病的治疗及预后的分子标志物已有报道，而关于肺癌与Clusterin的研究较少。本实验拟观察不同类型肺癌组织Clusterin的表达及其与病理类型、分化程度和转移等因素的关系。

1 资料与方法

1.1标本来源 选择2011年1月至2012年12月在吉林大学第二医院住院治疗的患者。其中肺鳞癌16例，年龄43～78〔平均(61±10)〕岁；肺腺癌22例，年龄42～73〔平均(58±8)〕岁；小细胞癌10例，年龄44～69〔平均(56±9)〕岁，另取10例正常肺组织标本作为对照。所有患者在取材前均未经任何治疗，均经病理诊断证实。

1.2主要试剂 鼠抗人Clusterin单克隆抗体(购自美国圣克鲁斯生物技术公司)，通用型二步法免疫组化试剂盒(PV-6000)，DAB显色剂(北京中杉生物技术有限公司)。

1.3方法 取肺部组织固定后，常规石蜡包埋、切片，切片经二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化后微波热修复抗原；自然冷却后3% H2O2室温孵育20 min阻断内源性过氧化物酶；然后在鼠抗Clusterin单克隆抗体(1∶100稀释) 中4℃孵育过夜；加入二抗和染色步骤严格按照PV-6000说明书进行，染色时随时在显微镜下观察。PBS代替一抗作为空白对照。

1.4结果判断 胞质呈现黄色颗粒即为Clusterin蛋白阳性表达。每张切片随机选择5个高倍视野(每个视野阳性细胞数不少于200个)，按每张切片阳性细胞所占面积百分比及着色强度进行结果判断。总分采用6分评分制：阳性细胞<5%为0分、5%～25%为1分、26%～50%为2分、≥51%为3分；染色强度无着色为0分、浅黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分；据阳性细胞所占比例得分+染色强度得分计算总分，0分为阴性(-)、1～2分为弱阳性(+)，3～4分为阳性()、5～6分为强阳性()。

1.5统计学方法 采用SPSS19.0软件进行分析，以行×列表χ2检验进行各组间Clusterin蛋白阳性表达的差异分析。

2 结 果

2.1Clusterin在不同病理类型肺癌组织中的表达 Clusterin蛋白阳性染色主要位于细胞质，正常肺组织无Clusterin表达，小细胞癌Clusterin表达率仅为10%(1/10，为+)，并且该阳性病例Clusterin主要表达于肿瘤间质细胞，肿瘤细胞几乎不表达，鳞癌中Clusterin阳性表达率为75.0%(12/16，+7例，5例)、腺癌为68.2%(15/22，+8例，7例)，小细胞癌中Clusterin的表达阳性率低(P<0.05)。而鳞癌与腺癌之间的表达无差异。

图1 鳞癌、腺癌、小细胞癌肺组织中Clusterin的表达(免疫组化染色，×200)

2.2非小细胞肺癌Clusterin蛋白表达与临床病理学特征的关系 中低分化病例表达高于高分化病例(P<0.05)，淋巴结转移病例高于无转移病例(P<0.05)，非小细胞肺癌中Clusterin表达与病理类型、年龄、性别等因素无关(P>0.05)。见表1。

表1 非小细胞肺癌Clusterin表达与临床病理学特征的关系(n)

3 讨 论

Clusterin作为内源性异源二聚体糖蛋白参与多种生理过程，包括机体老龄化进程、肿瘤发生与发展、血管损伤、糖尿病、肾脏和神经变性等，这些疾病均能导致细胞氧化应激状态增强、促使靶蛋白非晶质聚集、增加基因组不稳定性和提高细胞死亡率，有报道显示以上过程均与Clusterin调节细胞凋亡、介导氧化损伤直接相关〔4〕。Clusterin mRNA的表达主要由小干扰RNAs (siRNAs)调控，即Clusterin mRNA随siRNAs表达增加而增加，进而抑制人类癌症细胞诱导的自发性细胞凋亡，加快细胞生长速度，降低细胞遗传毒性和对氧化应激的敏感性〔5〕。

研究表明Clusterin在人类很多肿瘤发生时其表达改变或参与调控癌症细胞表达，Clusterin mRNA对前列腺肿瘤发生和转移扩散有较大影响〔6〕，其mRNA表达上调会抑制前列腺癌进程，减慢癌细胞转移。此外不同组织学类型的子宫内膜癌中Clusterin也有不同程度的表达〔7〕；结肠癌中血小板分泌血小板反应蛋白1(TSP1)和Clusterin，二者作用于MAPK信号通路促p38MAPK磷酸化，进而刺激基质金属蛋白酶-9(MMP-9)上调导致结肠癌侵袭加剧，给药抑制p38MAPK磷酸化，则TSP1和Clusterin分泌减少，一定程度上能抑制结肠癌细胞对正常细胞侵袭，达到治疗目的。

本实验结果说明Clusterin与肺癌特别是非小细胞肺癌的发生发展密切相关。而Panico等〔8〕利用免疫组化染色检测早期肺腺癌中Clusterin的表达，Clusterin表达多的患者在手术治疗切除肿瘤后复发率更小且生存时间更久，显示Clusterin表达与癌症复发率呈负相关。

4 参考文献

1陈万青，张思维，邹小农.中国肺癌发病死亡的估计和流行趋势研究〔J〕.中国肺癌杂志，2010；13(5)：488-93.

2Hazzaa SM，Elashry OM，Afifi IK.Clusterin as a diagnostic and prognostic marker for transitional cell carcinoma of the bladder〔J〕.Pathol Oncol Res，2010；16(1)：101-9.

3Sakai I，Miyake H，Takenaka A，etal.Expression of potential molecular markers in renal cell carcinoma：impact on clinicopathological outcomes in patients undergoing radical nephrectomy〔J〕.BJU Intern，2009；104(7)：942-6.

4Trougakos IP，Gonos ES.Regulation of clusterin/apolipoprotein J，a functional homologue to the small heat shock proteins，by oxidative stress in ageing and age-related diseases〔J〕.Free Radical Res，2006；40(12)：1324-34.

5Trougakos IP，So A，Jansen B，etal.Silencing expression of the clusterin/apolipoprotein j gene in human cancer cells using small interfering RNA induces spontaneous apoptosis，reduced growth ability，and cell sensitization to genotoxic and oxidative stress〔J〕.Cancer Res，2004；64(5)：1834-42.

6Blumenstein B，Saad F，Hotte S，etal.Reduction in serum clusterin is a potential therapeutic biomarker in patients with castration-resistant prostate cancer treated with custirsen〔J〕.Cancer Med，2013；2(4)：468-77.

7Ahn HJ，Bae J，Lee S，etal.Differential expression of clusterin according to histological type of endometrial carcinoma〔J〕.Gynecologic Oncol，2008；110(2)：222-9.

8Panico F，Casali C，Rossi G，etal.Prognostic role of clusterin in resected adenocarcinomas of the lung〔J〕.Lung Cancer，2012；79(3)：294-9.