祛瘀通脉汤对家兔DVT同型半胱氨酸的影响

1.广州中医药大学针灸康复临床医学院，广东 广州 510405；2.广东省阳江市中医院，广东 阳江 529500

祛瘀通脉汤对家兔DVT同型半胱氨酸的影响

蓝丹纯1廖荣臻2

1.广州中医药大学针灸康复临床医学院，广东 广州 510405；2.广东省阳江市中医院，广东 阳江 529500

目的观察祛瘀通脉汤对家兔深静脉血栓同型半胱氨酸的影响。方法通过结扎家兔股静脉造成深静脉血栓模型，分为A组为祛瘀通脉汤组、B组为血塞通组、C组为空白对照组，D组正常组，观察干预后，家兔同型半胱氨酸及血管阻塞程度的变化。结果A、B、C三组间同型半胱氨酸浓度无差异。三组白兔同型半胱氨酸各指标均数与D组同型半胱氨酸各指标均数比较均有统计学意义(P<0.05)。造模后第7天、14天，A、B两组同型半胱氨酸各指标均数与C组各均数比较有统计学意义(P<0.05)。A、B两组间的两两比较均无统计学意义(P>0.05)。三组均有血栓形成，且用药干预组2级以上血栓发生率均明显低于空白对照组。结论祛瘀通脉汤显著降低血液中同型半胱氨酸浓度，抑制静脉血栓形成。

祛瘀通脉汤；同型半胱氨酸；血栓；动物实验

深静脉血栓形成(deep venous thrombosis，DVT)是一种严重的骨科术后并发症。随着骨科内固定术以及膝关节置换术、人工髋关节的广发开展，骨科术后DVT的发生率逐渐增高。DVT并发症急性期有肺栓塞等，而慢性期可能遗留血栓形成后综合征。前者可能导致DVT患者截肢，同时也是DVT患者的主要死亡原因之一；后者则可导致患者患肢处于失去功能状态，严重影响患者生活质量。因此，防治骨科术后DVT发生越来越受到重视。当前DVT防治措施以机械性治疗、抗凝溶栓及手术治疗为主，但存在风险大、费用高等不利因素。近年来，许多学者采用中医药防治DVT，取得一定的疗效。此外，许多学者通过临床病例统计报道及实验室相关研究表明DVT患者中同型半胱氨酸(homo-cysteine，Hcy)与深静脉血栓形成有密切关系，两者相互影响，存在协同作用。祛瘀通脉汤是黄有荣教授临床防治下肢骨折术后DVT的经验方，临床疗效好。试验通过探讨祛瘀通脉汤对兔DVT的影响，以期评价祛瘀通脉汤对DVT的防治效果，为治疗DVT提供新的视野，为推动中医药治疗DVT的机理研究和临床应用提供进一步实验依据。

1 材料与方法

1.1 动物 40只健康大白兔，体重(2.5±0.5)kg，雌雄各半。单笼饲养，期间给兔子自由饮水，颗粒饲料，兔舍室温约25℃，相对湿度65%RH，保持通风良好。实验用兔及饲料均购于广西中医药大学动物实验中心。

1.2 试药及仪器

1.2.1 药物 祛瘀通脉汤(丹参20g，川芎10g，当归15g，丹皮10g，牛膝15g，赤芍15g，黄芪20g，甘草5g)，康美药业股份有限公司生产。由广西中医药大学附属瑞康医院煎药机浓煎并真空包装待用。血塞通片购自云南维和药业股份有限公司。将血塞通片按1.76mg/ml溶于蒸馏水中制成溶液待用。

1.2.2 试剂 同型半胱氨酸检测试剂盒，北京九强生物技术有限公司生产。

1.2.3 仪器 7600全自动生化分析仪，日本株式会社日立制作所制造；ZMN-2802全电脑自动组织染色机；ZMN-7803自动组织包埋机，常州市华利电子公司生产；MOOEL DSU-N组织标本快速处理仪，中科集团提供；TS-12H 生物组织自动脱水机，孝感市电子仪器厂制造；SHAN DON全自动切片机；OLYMPUS光学显微镜。

1.3 模型制备及分组 造模前1天，全部兔禁食12h，随机抽取10只兔子，作为D组(正常对照组)，取空腹静脉血5ml，做同型半胱氨酸检测。采血后予以自由饮水及颗粒饲料喂养，并于第二天参照王辉等[1]的下肢深静脉血栓动物模型的制备方法建立兔左后肢股静脉结扎DVT模型：取30只大白兔耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠，按1ml/kg体重进行麻醉。麻醉显效后，取仰卧位，四肢外展固定于兔架手术台上。在腹股沟韧带下约1cm，扪及股动脉搏动处，沿股动静脉走向切开皮肤约2cm，逐层分离出股动静脉，并用1#线结扎股静脉。生理盐水冲洗术口，逐层缝合皮下及皮肤。

将模型白兔随机分A、B、C三组：A组为祛瘀通脉汤组、B组为血塞通组、C组为空白对照组。每组10只。予以自由饮水，颗粒饲料喂养，均不用抗生素。

1.4 灌胃及取材 造模后第2d开始给药，按10ml/kg体重灌胃，每日1次。A组：给予祛瘀通脉汤煎剂浓缩液，按10ml/kg灌胃；B组：给予血塞通溶液，按17.6mg/kg灌胃；C组：给予等量蒸馏水。于造模后第2d、第7d及第14d清晨取三组兔空腹静脉血5ml，做同型半胱氨酸检测。并于造模后第14d采血后麻醉，于血栓发生明显处结扎近端及远端并切取股静脉，标记近远端，置于10%福尔马林液中固定48h。

1.5 指标观测

1.5.1 同型半胱氨酸检测 采血前兔子均禁食12h，并于清晨经兔子耳缘静脉采空腹血5ml，置于分好组并做好标记的血生化真空采血管中，竖直摆放，并于采血后2h内送广西壮族自治区民族医院检验科做同型半胱氨酸检测，记录检测结果。

1.5.2 病理切片制作 取出的股静脉经过水洗、脱水、媒浸后，用自动组织包埋机石蜡包埋后切片，并自动组织染色机行HE染色，制成切片在100倍光镜下观察有无血栓形成。根据组织学检查血栓分级评价标准，由病理科专业人员进行评定及记录。血栓发生不确定的，取远端、中间、近端三点作切片，以血栓明显的纳入统计。

1.5.3 组织学检查血栓分级评价标准[2]根据血栓对血管的阻塞程度分为4级：0级为血管无血栓；1级为血管阻塞<50%；2级为血管阻塞>50%，但未完全阻塞；3级为血管完全阻塞。

2 结果与分析

2.1 兔子存活情况 兔子左后肢股静脉结扎DVT模型造模成功率100%；实验期间，A组：造模后第4d，死亡1只，B组：造模后第3d，灌胃时死亡1只，C组：于造模后第6d，死亡1只。

2.2 对同型半胱氨酸的影响

表1 造模后第2天同型半胱氨酸结果±s)

注：与D组比较，*P<0.05。

表2 造模后第7天同型半胱氨酸结果±s)

注：与C组比较，*P<0.05。

表3 造模后第14天三组白兔同型半胱氨酸结果±s)

注：与C组比较，*P<0.05。

2.3 光镜观察血栓形成结果 光镜观察各组左股静脉血栓发生结果见表4，可见三组均有血栓形成，本实验兔子左肢股静脉结扎DVT模型造模成功率100%。且用药干预组2级以上血栓发生率均明显低于模型组，说明祛瘀通脉汤与血塞通均具有防治DVT的作用。

表4 光镜下观察各组深静脉血栓发生结果

3 讨论

造模后第2d，根据统计学结果可以说明A、B、C三组间同型半胱氨酸浓度无差异。三组白兔同型半胱氨酸各指标均数与D组同型半胱氨酸各指标均数比较均有显著统计学意义(P<0.05)，说明造模后第2d三组均处于DVT造模后的高同型半胱氨酸血症状态且各组间无明显差异。造模后第7d、14d，A、B两组同型半胱氨酸各指标均数与C组各均数比较有显著统计学意义(P<0.05)。说明祛瘀通脉汤用药组及血塞通用药组均能显著降低血液中同型半胱氨酸浓度。A、B两组间的两两比较均无显著统计学意义(P>0.05)。说明祛瘀通脉汤用药组及血塞通用药组在降低血液中同型半胱氨酸浓度方面无显著差异，祛瘀通脉汤与血塞通具有同样的改善高同型半胱氨酸血症的作用。祛瘀通脉汤为黄有荣教授临床防治下肢骨折术后DVT经验方。丹参具有活血祛瘀、调经止痛、凉血消痈等功效，研究表明，丹参中的丹参素能明显抗体外血栓形成，抑制血小板的增殖。杨铁虹等[3]通过分析当归多糖与硫酸酯抗凝血的过程中，发现其具有双向性调节作用，既具有抗凝血功能，又具有促凝血功能。川芎具有活血祛瘀、行气开郁、祛风止痛等功效。牡丹皮、赤芍等都具有活血祛瘀的功效。牛膝具有改善血液流变学、抗凝血等功效。综上所述，祛瘀通脉汤具有明显的活血通络功效，可减少血栓造成的损伤。

近年来，中医药防治下肢深静脉血栓形成的实验研究取得了很大的进展，各家从不同角度，不同观测指标进行观察，为中医药防治下肢深静脉血栓提供了客观依据。本实验通过探讨祛瘀通脉汤对兔结扎股静脉DVT模型的影响，结果可见祛瘀通脉汤在防治DVT方面与血塞通均有较好的疗效，为中医药结合现在代科技手段防治DVT积累可以借鉴的研究思路与方法。

[1] 王辉，王岭，陈江浩，等．下肢深静脉血栓模型制备更接近临床血栓形成的可行性研究[J]．中国临床康复，2003,7(14)：2001-2002．

[2] 王鸿利，王学锋．血栓病临床新技术[M]．北京:人民军医出版社，2003. 25-26．

[3] 杨铁虹，商澎，梅其炳．当归多糖硫酸酯对凝血和血小板聚集的作用[J]．中草药，2002，33(11)：1011-1013．

蓝丹纯(1988-)，2012级硕士研究生，E-mail: 644173677@qq.com

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1007-8517(2014)14-0009-02

2014.05.25)