Livin、Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达及与肿瘤侵袭转移的关系

江丽琴　周静　黄伟政

[摘要] 目的 探讨Livin、Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达及与肿瘤侵袭转移的关系。方法 选取于我院及吉林大学附属医院诊治的65例卵巢上皮性肿瘤患者和正常卵巢组织标本蜡块15例。将切除的卵巢组织以免疫组化法检测Livin及Beclin1蛋白表达情况，分析与卵巢癌组织分化、淋巴结转移及临床分期的关系。结果 Livin在正常卵巢组织几乎不表达（6.7%）、在卵巢癌组织中表达最高（68.6%）；Beclin1在正常卵巢组织表达最高（93.3%），在卵巢癌组织中表达最低（37.1%）。卵巢癌组织分化、淋巴结转移及临床分期与Livin与Beclin1表达程度相关（P< 0.05）。 结论 Livin、Beclin1在上皮性卵巢癌中的表达与肿瘤侵袭转移中起重要作用，可成为卵巢癌治疗的新靶点。

[关键词] 上皮性卵巢癌；Livin；Beclin1；免疫组化

[中图分类号] R737.31 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2014）23-0135-03

[Abstract] Objective To explore the expression of Livin and Beclin1 in epithelial ovarian cancer and their relations with tumor invasion and metastasis. Methods A total of 65 patients with epithelial ovarian cancer who were admitted and treated in our hospital and Jilin University Affiliated Hospital， plus 15 blocks of normal ovarian tissue samples were selected. Excised ovarian tissues were tested via immunohistochemistry to test the protein expression of Livin and Beclin1， and their relations with tissue differentiation of ovarian cancer， lymphatic metastasis and clinical staging were analyzed. Results Positive rate of expression of Livin， rare expression in normal ovarian tissues （6.7%）， and the highest expression rate in tissues of ovarian cancer （68.6%）； Positive rate of expression of Beclin1， the highest expression rate in normal ovarian tissues （93.3%） and the lowest in tissues of ovarian cancer （37.1%）. Tissue differentiation of ovarian cancer， lymphatic metastasis and clinical staging were interrelated with the expression degree of Livin and Beclin1 （P<0.05）. Conclusion Expression of Livin and Beclin1 in epithelial ovarian cancer and tumor invasion and metastasis plays an important role and may become a new target in the treatment of ovarian cancer.

[Key words] Epithelial ovarian cancer； Livin； Beclin1； Immunohistochemistry

卵巢癌作为女性生殖系统三大恶性肿瘤之一，死亡率最高，5年生存率不足30%。在肿瘤的发生、发展中细胞凋亡受阻是主要机制，可使化疗效果大打折扣。Livin基因属于凋亡抑制蛋白家族，可抑制细胞凋亡，与多种肿瘤的恶性程度与预后有关[1]。Beclin1基因可控制自噬活动，抑制肿瘤的生长，其机制为提高细胞自噬活性，多数肿瘤患者中可见Beclin1表达下调或缺失。本研究为探讨Livin及Beclin1基因蛋白与肿瘤侵袭转移的相关关系，检测其在卵巢癌组织中的表达情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2000年～2010年于本院及吉林大学附属医院诊治的原发性卵巢上皮性肿瘤标本65例，术前无化疗或放疗史，术后组织病理确诊。年龄26～72岁，平均（46.3±12.7）岁。15例良性卵巢肿瘤，15例交界性卵巢肿瘤，35例卵巢癌。按国际妇产科联盟（ FIGO，1985） 卵巢癌分期： Ⅰ期 7例，Ⅱ期 11例，Ⅲ期 13例，Ⅳ期 4例；13例有淋巴结转移，22例无淋巴结转移。15例正常卵巢组织来自卵巢活检病例，经病理证实无异常。

1.2 实验方法

免疫组织化学染色用品：SP检测试剂盒、DAB显色液、兔抗人Beclin1多克隆抗体（由福州迈新生物技术开发公司）、兔抗人Livin 多克隆抗体。已知阳性切片为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗为阴性对照。具体步骤参考说明书进行。

1.3 观察指标

于400倍光镜下选取5个视野，对细胞浆内可见棕黄色颗粒的细胞进行标记。随机选取5个高倍视野或记数500个细胞（尽量多次计算求平均值），细胞核或细胞浆为无色、淡黄色、棕黄色、棕褐色依次为0～3分[2]。阳性细胞所占比例：无为0分，≤10%为1分，10%～50%为2分，50%～75%为3分，75%～100%为4分[3]。统计Livin和Beclin1阳性患者分化程度、临床分期及淋巴结转移情况。endprint

1.4 统计学处理

应用SPSS19.0统计学软件处理结果，计数资料用χ2检验，采用Spearman 等级相关分析Livin、Beclin1之间的相关性，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各类卵巢组织中Livin、Beclin1表达结果

Livin 的表达阳性率：在正常卵巢组织几乎不表达（6.7%），在卵巢癌组织中表达最高（68.6%）；Beclin1的表达阳性率：在正常卵巢组织表达最高（93.3%），在卵巢癌组织中表达最低（37.1%）。见表1。

3 讨论

卵巢恶性肿瘤的诊断和治疗都是一大难题。细胞凋亡和增殖的平衡是生物个体正常生长发育的基础，平衡的破坏为疾病尤其是肿瘤的发生、发展提供了必要的平台，细胞增殖过度和细胞凋亡受阻是卵巢癌形成过程中的重要机制。Livin可发现于胚胎组织中，存在和表达于胎儿发育过程中，在正常人体终末组织一般不出现。Livin细胞定位的研究仍在继续，需要进一步证实其准确的定位。多种肿瘤研究表明，大多数肿瘤组织可出现Livin表达[4，5]，提示Livin的过表达对肿瘤细胞持续生长具有相关性。自噬（autophagy）性细胞死亡非细胞凋亡、坏死。肿瘤早期，自噬性抑制肿瘤发生，若自噬性下降将使得癌症发展。有研究发现自噬活性程度同肿瘤的发生发展关系紧密。Livin蛋白表达上调可能在促进卵巢癌细胞异常增殖和恶性转化中起重要作用，与肿瘤的发生、发展关系密切，因而成为研究热点。Beclin1基因参与自噬调控，是双等位抑癌基因，缺失可导致肿瘤转化为恶性。多种人类恶性肿瘤中存在Beclin1表达的下调或缺失[7，8]，可以认为Beclin1是新型的肿瘤抑制基因。自噬主要作用机制为：调节细胞内过氧化物浓度，调整蛋白代谢、维护内环境、避免肿瘤产生；若自噬功能下降，会出现氧化应激，增加致瘤性突变的积累[9]。自噬现象在真核细胞正常生理病理中均存在，发挥双重作用，细胞周围环境改变时，影响不同[10]。因此，抑制肿瘤的生长可运用提高细胞自噬活性进行研究。

本研究表明，Livin在正常卵巢组织几乎不表达（6.7%），在卵巢癌组织中表达最高（68.6%）；Beclin1在正常卵巢组织表达最高（93.3%），在卵巢癌组织中表达最低（37.1%）。Livin、Beclin1与FIGO分期和淋巴结转移及组织分化有关（P<0.05）。卵巢癌组织中Livin、Beclin1两者的表达不存在显著相关性。表明Livin的表达与癌症密切相关，对肿瘤细胞持续生长有一定作用，与临床其他同主题研究结果一致。同时，有研究也表明[6]Livin在卵巢癌发生、演化、浸润和转移中的作用也不容忽视。以上各点均可用于治疗卵巢癌，Livin很可能作为卵巢癌治疗高效分子靶点。Livin、Beclin1在卵巢癌组织中的表达无明显相关性。可能与样本量较少或者研究水平、研究设备等有关系，需要进一步研究。

综上所述，Livin在卵巢癌发生、演化、浸润以及转移过程中发挥重要作用；Beclin1蛋白表达下降提示自噬活性下降，与卵巢癌的出现、发展密切相关。

[参考文献]

[1] Anna CH，L ida M，Sills RC，et al. Expression of potentialbeta-catenin targets，cyclin D1，C-jun，C-Myc，E-cadherin，and EGFR in chemically induced hepatocellar ne2op lasms from B6C3F1 mice[J]. Toxico1 App l Pharmacol，2013，190（2）：1352145

[2] Crook NE，Clem RJ，Miller LK. An apoptosis inhibiting baculovirus gene with a zinc finger-like motif[J]. J Viro1，2013，67（4）：2168-2174.

[3] Lin JH，Deng G，Huang Q，et al. KIAP，a novel member of the inhibitor of apoptosis protein family[J]. Biochem Biophys Res Connntm，2013，279（3）：820-831.

[4] 刘文博，孔红霞. Livin、Smac和Ki67在上皮性卵巢癌中的表达及意义[J]. 中国妇幼保健，2011，26（12）：1875-1878.

[5] Yagihashi A，Asanuma K，Nakamura M，et al. Detection of anti-Survivin antibody in gastrointestinal cancer patients[J].Clin Chem，2013，47（9）：1729-1731.

[6] Chmollinger JC，Vonderheide RH，Hoar KM，et al. Melan oma inhibitor of apop tosis p rotein （ML-IAP）is a target for immune-mediated tumor destruction[J]. Lung Cancer，2014，46（5）： 299-304.

[7] Aita VM，Liang XH，Murty VV，et al. Cloning and genomic organization of beclin 1，a candidate tumor suppressor gene on chromosome 17q21[J]. Genomic，2012，59（1）：59-65.

[8] Klionsky DJ，Emr SD. Autophagy as a regulated pathway of cellular degradation[J]. Science，2011，290（1）：1717-1720.

[9] Holm E，Hildebrandt W，Kinscherf R. Low postabsorptive net protein degradation in male cancer patients：lack of sensitivity to regulatory amino acids[J]. Oncol Rep，2014， 17（3）：695-700.

[10] Marino G，Lopez-Otin C.Autophagy： Molecular mechanisms，physiological functions and relevance in human pathology[J]. Cell Mol Life Sci，2012，61（12）：1439-1454.

（收稿日期：2014-05-23）endprint

1.4 统计学处理

应用SPSS19.0统计学软件处理结果，计数资料用χ2检验，采用Spearman 等级相关分析Livin、Beclin1之间的相关性，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各类卵巢组织中Livin、Beclin1表达结果

Livin 的表达阳性率：在正常卵巢组织几乎不表达（6.7%），在卵巢癌组织中表达最高（68.6%）；Beclin1的表达阳性率：在正常卵巢组织表达最高（93.3%），在卵巢癌组织中表达最低（37.1%）。见表1。

3 讨论

卵巢恶性肿瘤的诊断和治疗都是一大难题。细胞凋亡和增殖的平衡是生物个体正常生长发育的基础，平衡的破坏为疾病尤其是肿瘤的发生、发展提供了必要的平台，细胞增殖过度和细胞凋亡受阻是卵巢癌形成过程中的重要机制。Livin可发现于胚胎组织中，存在和表达于胎儿发育过程中，在正常人体终末组织一般不出现。Livin细胞定位的研究仍在继续，需要进一步证实其准确的定位。多种肿瘤研究表明，大多数肿瘤组织可出现Livin表达[4，5]，提示Livin的过表达对肿瘤细胞持续生长具有相关性。自噬（autophagy）性细胞死亡非细胞凋亡、坏死。肿瘤早期，自噬性抑制肿瘤发生，若自噬性下降将使得癌症发展。有研究发现自噬活性程度同肿瘤的发生发展关系紧密。Livin蛋白表达上调可能在促进卵巢癌细胞异常增殖和恶性转化中起重要作用，与肿瘤的发生、发展关系密切，因而成为研究热点。Beclin1基因参与自噬调控，是双等位抑癌基因，缺失可导致肿瘤转化为恶性。多种人类恶性肿瘤中存在Beclin1表达的下调或缺失[7，8]，可以认为Beclin1是新型的肿瘤抑制基因。自噬主要作用机制为：调节细胞内过氧化物浓度，调整蛋白代谢、维护内环境、避免肿瘤产生；若自噬功能下降，会出现氧化应激，增加致瘤性突变的积累[9]。自噬现象在真核细胞正常生理病理中均存在，发挥双重作用，细胞周围环境改变时，影响不同[10]。因此，抑制肿瘤的生长可运用提高细胞自噬活性进行研究。

本研究表明，Livin在正常卵巢组织几乎不表达（6.7%），在卵巢癌组织中表达最高（68.6%）；Beclin1在正常卵巢组织表达最高（93.3%），在卵巢癌组织中表达最低（37.1%）。Livin、Beclin1与FIGO分期和淋巴结转移及组织分化有关（P<0.05）。卵巢癌组织中Livin、Beclin1两者的表达不存在显著相关性。表明Livin的表达与癌症密切相关，对肿瘤细胞持续生长有一定作用，与临床其他同主题研究结果一致。同时，有研究也表明[6]Livin在卵巢癌发生、演化、浸润和转移中的作用也不容忽视。以上各点均可用于治疗卵巢癌，Livin很可能作为卵巢癌治疗高效分子靶点。Livin、Beclin1在卵巢癌组织中的表达无明显相关性。可能与样本量较少或者研究水平、研究设备等有关系，需要进一步研究。

综上所述，Livin在卵巢癌发生、演化、浸润以及转移过程中发挥重要作用；Beclin1蛋白表达下降提示自噬活性下降，与卵巢癌的出现、发展密切相关。

[参考文献]

[1] Anna CH，L ida M，Sills RC，et al. Expression of potentialbeta-catenin targets，cyclin D1，C-jun，C-Myc，E-cadherin，and EGFR in chemically induced hepatocellar ne2op lasms from B6C3F1 mice[J]. Toxico1 App l Pharmacol，2013，190（2）：1352145

[2] Crook NE，Clem RJ，Miller LK. An apoptosis inhibiting baculovirus gene with a zinc finger-like motif[J]. J Viro1，2013，67（4）：2168-2174.

[3] Lin JH，Deng G，Huang Q，et al. KIAP，a novel member of the inhibitor of apoptosis protein family[J]. Biochem Biophys Res Connntm，2013，279（3）：820-831.

[4] 刘文博，孔红霞. Livin、Smac和Ki67在上皮性卵巢癌中的表达及意义[J]. 中国妇幼保健，2011，26（12）：1875-1878.

[5] Yagihashi A，Asanuma K，Nakamura M，et al. Detection of anti-Survivin antibody in gastrointestinal cancer patients[J].Clin Chem，2013，47（9）：1729-1731.

[6] Chmollinger JC，Vonderheide RH，Hoar KM，et al. Melan oma inhibitor of apop tosis p rotein （ML-IAP）is a target for immune-mediated tumor destruction[J]. Lung Cancer，2014，46（5）： 299-304.

[7] Aita VM，Liang XH，Murty VV，et al. Cloning and genomic organization of beclin 1，a candidate tumor suppressor gene on chromosome 17q21[J]. Genomic，2012，59（1）：59-65.

[8] Klionsky DJ，Emr SD. Autophagy as a regulated pathway of cellular degradation[J]. Science，2011，290（1）：1717-1720.

[9] Holm E，Hildebrandt W，Kinscherf R. Low postabsorptive net protein degradation in male cancer patients：lack of sensitivity to regulatory amino acids[J]. Oncol Rep，2014， 17（3）：695-700.

[10] Marino G，Lopez-Otin C.Autophagy： Molecular mechanisms，physiological functions and relevance in human pathology[J]. Cell Mol Life Sci，2012，61（12）：1439-1454.

（收稿日期：2014-05-23）endprint

1.4 统计学处理

应用SPSS19.0统计学软件处理结果，计数资料用χ2检验，采用Spearman 等级相关分析Livin、Beclin1之间的相关性，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各类卵巢组织中Livin、Beclin1表达结果

Livin 的表达阳性率：在正常卵巢组织几乎不表达（6.7%），在卵巢癌组织中表达最高（68.6%）；Beclin1的表达阳性率：在正常卵巢组织表达最高（93.3%），在卵巢癌组织中表达最低（37.1%）。见表1。

3 讨论

卵巢恶性肿瘤的诊断和治疗都是一大难题。细胞凋亡和增殖的平衡是生物个体正常生长发育的基础，平衡的破坏为疾病尤其是肿瘤的发生、发展提供了必要的平台，细胞增殖过度和细胞凋亡受阻是卵巢癌形成过程中的重要机制。Livin可发现于胚胎组织中，存在和表达于胎儿发育过程中，在正常人体终末组织一般不出现。Livin细胞定位的研究仍在继续，需要进一步证实其准确的定位。多种肿瘤研究表明，大多数肿瘤组织可出现Livin表达[4，5]，提示Livin的过表达对肿瘤细胞持续生长具有相关性。自噬（autophagy）性细胞死亡非细胞凋亡、坏死。肿瘤早期，自噬性抑制肿瘤发生，若自噬性下降将使得癌症发展。有研究发现自噬活性程度同肿瘤的发生发展关系紧密。Livin蛋白表达上调可能在促进卵巢癌细胞异常增殖和恶性转化中起重要作用，与肿瘤的发生、发展关系密切，因而成为研究热点。Beclin1基因参与自噬调控，是双等位抑癌基因，缺失可导致肿瘤转化为恶性。多种人类恶性肿瘤中存在Beclin1表达的下调或缺失[7，8]，可以认为Beclin1是新型的肿瘤抑制基因。自噬主要作用机制为：调节细胞内过氧化物浓度，调整蛋白代谢、维护内环境、避免肿瘤产生；若自噬功能下降，会出现氧化应激，增加致瘤性突变的积累[9]。自噬现象在真核细胞正常生理病理中均存在，发挥双重作用，细胞周围环境改变时，影响不同[10]。因此，抑制肿瘤的生长可运用提高细胞自噬活性进行研究。

本研究表明，Livin在正常卵巢组织几乎不表达（6.7%），在卵巢癌组织中表达最高（68.6%）；Beclin1在正常卵巢组织表达最高（93.3%），在卵巢癌组织中表达最低（37.1%）。Livin、Beclin1与FIGO分期和淋巴结转移及组织分化有关（P<0.05）。卵巢癌组织中Livin、Beclin1两者的表达不存在显著相关性。表明Livin的表达与癌症密切相关，对肿瘤细胞持续生长有一定作用，与临床其他同主题研究结果一致。同时，有研究也表明[6]Livin在卵巢癌发生、演化、浸润和转移中的作用也不容忽视。以上各点均可用于治疗卵巢癌，Livin很可能作为卵巢癌治疗高效分子靶点。Livin、Beclin1在卵巢癌组织中的表达无明显相关性。可能与样本量较少或者研究水平、研究设备等有关系，需要进一步研究。

综上所述，Livin在卵巢癌发生、演化、浸润以及转移过程中发挥重要作用；Beclin1蛋白表达下降提示自噬活性下降，与卵巢癌的出现、发展密切相关。

[参考文献]

[1] Anna CH，L ida M，Sills RC，et al. Expression of potentialbeta-catenin targets，cyclin D1，C-jun，C-Myc，E-cadherin，and EGFR in chemically induced hepatocellar ne2op lasms from B6C3F1 mice[J]. Toxico1 App l Pharmacol，2013，190（2）：1352145

[2] Crook NE，Clem RJ，Miller LK. An apoptosis inhibiting baculovirus gene with a zinc finger-like motif[J]. J Viro1，2013，67（4）：2168-2174.

[3] Lin JH，Deng G，Huang Q，et al. KIAP，a novel member of the inhibitor of apoptosis protein family[J]. Biochem Biophys Res Connntm，2013，279（3）：820-831.

[4] 刘文博，孔红霞. Livin、Smac和Ki67在上皮性卵巢癌中的表达及意义[J]. 中国妇幼保健，2011，26（12）：1875-1878.

[5] Yagihashi A，Asanuma K，Nakamura M，et al. Detection of anti-Survivin antibody in gastrointestinal cancer patients[J].Clin Chem，2013，47（9）：1729-1731.

[6] Chmollinger JC，Vonderheide RH，Hoar KM，et al. Melan oma inhibitor of apop tosis p rotein （ML-IAP）is a target for immune-mediated tumor destruction[J]. Lung Cancer，2014，46（5）： 299-304.

[7] Aita VM，Liang XH，Murty VV，et al. Cloning and genomic organization of beclin 1，a candidate tumor suppressor gene on chromosome 17q21[J]. Genomic，2012，59（1）：59-65.

[8] Klionsky DJ，Emr SD. Autophagy as a regulated pathway of cellular degradation[J]. Science，2011，290（1）：1717-1720.

[9] Holm E，Hildebrandt W，Kinscherf R. Low postabsorptive net protein degradation in male cancer patients：lack of sensitivity to regulatory amino acids[J]. Oncol Rep，2014， 17（3）：695-700.

[10] Marino G，Lopez-Otin C.Autophagy： Molecular mechanisms，physiological functions and relevance in human pathology[J]. Cell Mol Life Sci，2012，61（12）：1439-1454.

（收稿日期：2014-05-23）endprint