木香大安颗粒的质量标准研究*

★ 韩飞 曾文雪 黄潇* 姚雪莲 赵志冬 罗晓健

(1.江西中医药大学 江西 南昌 330004；2.中药固体制剂制造技术国家工程研究中心 江西 南昌 330006)

木香大安丸出自《痘疹世医心法》卷十二，全方由木香、枳实、黄连、陈皮、山楂、砂仁等十一味中药组成，具有消食导滞、祛热健脾、缓消平补、不温不燥等功效，用于治疗小儿食滞，头温腹热，嗳气恶食，烦不安眠等病症临床效果显著。将其剂改成颗粒剂后，具有剂量准确、稳定性强、更适合小儿服用等优点。由于原方无质量标准，为能有效控制其质量，本文对方中主要药味及有效成分分别进行定性、定量研究，可为制剂提供质量控制标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent-1200高效液相色谱仪(VWD检测器，Agilent-1200化学工作站)；BSZZ4S型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司,感量0.01mg)，Labomed UVS-2800紫外可见分光光度计(美国奥然科技有限公司)，超声仪(KQ5200DA型昆山市超声仪器有限公司)，紫外荧光灯(Q/3202 2LDJA02无锡科达仪器厂)，真空干燥箱(DGF-6020型上海一恒科学仪器有限公司)。

1.2 试药 橙皮苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110721-200211)；辛弗林对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110727-200306)；去氢木香内酯对照品(中国药品生物制品检定所，批号：111525-200706)；硅胶G板(青岛海洋化工分厂)；乙腈、甲醇为色谱纯(天津市永大化学试剂厂)，冰醋酸、无水乙醇为分析纯(天津市博迪化工有限公司)，水为超纯水，其余均为分析纯(天津市永大化学试剂厂)，木香大安颗粒自制，木香、陈皮、枳实等对照药材均为中国药品生物制品鉴定所提供。

2 薄层鉴别

2.1 木香的鉴别

2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取去氢木香内酯对照品2.066mg，加三氯甲烷定容至10mL的容量瓶中，摇匀，即得0.2066g/L对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 取成品颗粒(批号：20100813)适量，研磨成细粉，称取细粉3.0g，加甲醇50mL，索式提取6h，滤去残杂，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷10mL使溶解，微孔滤膜过滤，取续滤液1mL作为供试品溶液。

2.1.3 对照药材溶液的制备 取木香对照药材1.0g，加甲醇50mL，回流提取2h，放冷，滤过，滤液浓缩至5mL，滤过，滤液作为对照药材溶液。

2.1.4 阴性对照品溶液的制备 按处方中药物比例，制成缺木香的阴性颗粒，按2.1.2项下制成阴性对照品溶液。

薄层层析：照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述四种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-环己烷(5∶1)为展开剂，展开10cm，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点，阴性对照品无此斑点，见图1。

图1 木香薄层鉴别图谱

2.2 枳实的鉴别

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取辛弗林对照品2.364mg，加甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，即得0.2364g/L对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取成品颗粒(批号：20100813)适量，研磨成细粉，精密称取细粉3.0g，加甲醇50mL，超声处理2次，每次30min，滤去残杂，滤液蒸干，残渣加甲醇5mL使溶解，微孔滤膜过滤，取续滤液1mL作为供试品溶液。

2.2.3 对照药材溶液的制备 另取枳实对照药材1.0g，加甲醇50mL，超声提取40min，放冷，滤过，甲醇补足失重，取续滤液1mL作为对照药材溶液。

2.2.4 阴性对照品溶液的制备 按处方中药物比例，制成缺陈皮和枳实的阴性颗粒，按2.2.2项下制成阴性对照品溶液。

图2 枳实薄层鉴别图谱

薄层层析：按照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述四种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-氨水(3∶1∶1)的溶液为展开剂，饱和1h，展开12cm，取出，晾干，喷以0.5%茚三酮乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照品无此斑点，见图2。

2.3 陈皮的鉴别

2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品4.117mg，加甲醇定容至10mL容量瓶中，摇匀，即得0.4117g/L对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 取成品颗粒(批号：20100813)适量，研磨成细粉，称取细粉3.0g，加甲醇50mL，回流提取3h，滤过，滤液蒸干，残渣用水20mL溶解，离心，取上清液上聚酰胺柱，分别用水40mL，30%乙醇40mL洗脱，洗脱液蒸干，残渣加5mL甲醇溶解，微孔滤膜过滤，取续滤液1mL作为供试品溶液。

2.3.3 对照药材溶液的制备 另取陈皮对照药材1.0g，加甲醇50mL，回流提取3h，放冷，滤过，滤液浓缩至10mL，滤过，取续滤液1mL作为对照药材溶液。

2.3.4 阴性对照品溶液的制备 按处方中药物比例，制成缺取陈皮和枳实的阴性颗粒，按2.3.2项下制成阴性对照品溶液。

薄层层析：按照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VIB)，吸取上述四种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)为展开剂展开约3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)的上层溶液为展开剂，展至约12cm，取出，晾干，喷以3%三氯化铝试液，置紫外灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色荧光斑点，阴性对照品无此斑点，见图3。

图3 陈皮薄层鉴别图谱

3 含量测定

3.1 橙皮苷的含量测定

3.1.1 色谱条件 色谱柱:Hypersil 0DS2 C18(5μm，250mm×4.6mm，大连依利特公司)；流动相：乙腈-6.0%醋酸溶液(79∶21)；流速：1.0mL/min；检测波长：283nm；柱温：30℃；进样量：20μL，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于5000。

3.1.2 溶液的制备 (1)对照品溶液的制备 称取橙皮苷对照品约9mg,置10mL容量瓶中,加甲醇适量使溶解,并稀释至刻度，摇匀。精密吸取1mL置5mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，定容即得(每1mL含橙皮苷0.1823mg)。

(2)供试品溶液的制备 取同一批成品颗粒(批号:20100911)适量，研细，精密称取1.0g粉末，置100mL容量瓶中，精密加入甲醇定容，密塞，精密称定重量，超声处理(200W，40KHz)3次，每次20min，放冷，用甲醇补足失重，滤过，取续滤液，即得。

(3)阴性对照溶液的制备 按供试品的处方比例和制备工艺，制成阴性对照颗粒。取本品1.0g，按3.1.2中(2)项下方法制成阴性对照溶液，即得。

3.1.3 系统适应性试验 取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，分别进样20μL，记录色谱图。结果在上述色谱条件下，理论板数按橙皮苷峰计算应不低于4000，与相邻峰分离度大于2，主峰保留时间9.86min。阴性对照品色谱图中,在与对照品色谱图相对应的保留时间处无色谱峰出现。表明制剂中其他成分对橙皮苷的测定无干扰。

3.1.4 线性关系考察 精密量取橙皮苷对照品溶液(0.1823mg/mL)0.1，0.2，0.4，0.8，1.6，3.2，6.4mL，分别置10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，定容，分别精密吸取溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以橙皮苷对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为:Y=2016.2X-24.147相关系数:R=0.9999，结果表明，橙皮苷对照品在0.0363～2.3219μg范围内线性关系良好。

3.1.5 精密度试验 精密吸取橙皮苷对照品溶液(0.1823mg/mL)及供试品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，连续进样6次，依法测定，记录峰面积，得相对标准偏差(RSD)分别0.78%，1.25%，结果表明仪器精密度良好。

3.1.6 重复性试验 按3.1.2中(2)项下方法制备供试品溶液，对同一批样品(批号20100911)6份进行测定，橙皮苷平均含3.0568mg/g，RSD为0.514%(n=6)，结果表明方法重现性良好。

3.1.7 稳定性试验 取成品颗粒(批号20100911)适量，研细，精密称取粉末1.0g，按3.1.2中(2)项下制备成供试品溶液，精密吸取同一供试品溶液各20μL，分别于制备后0，2，4，8，12，24h，依法测定，峰面积的RSD为0.673%，结果表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

3.1.8 加样回收率试验 称取同一批号的样品(批号20100911，含量为3.0568mg/g)0.5g，共9份，分成3组，每组3份，精密称定后，第1组每份加入样品含量80%的橙皮苷对照品，第2组每份加入样品含量100%的橙皮苷对照品，第3组每份加入样品含量120%的橙皮苷对照品，按3.1.2中(2)项下制备成样品溶液，依法测定，平均含量为结果见表1。

表1 橙皮苷加样回收率试验(n=6)

3.1.9 样品含量测定 取三批(20100906、20100925、20101018)样品，按3.1.2中(2)项项下方法制备成供试品溶液，进行测定，根据峰面积计算橙皮苷的含量3.0706mg/g，结果见表2。

表2 3批样品中橙皮苷含量测定结果/mg·g-1

4 讨论

4.1 提取方法和展开系统的选择

本文对制剂中主要成分进行TLC鉴别时，在《中国药典》[1]及参考相关文献[2-4]的基础上尝试了多种提取方法和展开系统，取得不错的效果。

4.1.1 在枳实薄层鉴别中，药典上规定正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)为展开剂，而经比较发现以正丁醇-冰醋酸-氨水(3∶1∶1)为展开剂效果更好，不仅斑点清晰，分离度好，且展开时间大大缩短。

4.1.2 在陈皮的薄层鉴别中，尝试了乙酸乙酯-甲醇-水(65∶35∶10)、氯仿-甲醇-丁酮-丙酮(8∶2∶1∶1)、乙酸乙酯-甲苯(65∶35)等多种展开剂，最终以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)展开约3cm，取出晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)展开至12cm，效果最好。

4.2 流动相的选择

本实验在进行橙皮苷含测时，曾尝试过甲醇-水(35∶65)，甲醇-1%磷酸水溶液(40∶60)，乙腈-3%醋酸水溶液(25∶75)等流动相，效果均不如本文所采用流动相乙腈-6.0%醋酸溶液(79∶21)，在该色谱条件下，橙皮苷与其它组分峰能达到基线分离，理论塔板数大于4000。

本文通过对成品颗粒的质量研究，建立了制剂中木香、枳实、黄连、陈皮等四味药材的定性鉴别方法，该法重现性好，专属性强，色谱斑点清晰，分离度好；采用HPLC法对指标成分橙皮苷进行含量测定，并进行了方法学考察，结果表明含测方法分离度好，重现性强，回收率高，可用于木香大安颗粒的质量控制。

[1]国家药典委员会.中国药典.一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010:758．

[2]利毛才让，热增才旦.藏药四味藏木香汤散的质量研究[J].中成药，2010，32(3)：524-526.

[3]项海芝，桑育黎，郝延军,等.小儿肺咳颗粒中陈皮的薄层鉴别方法改进研究[J].中华中医药学刊，2007，25(3)：462-463.

[4]王振江，吕洁，丁芳,等.《中国药典》2005年版枳实辛弗林含量及薄层鉴别的探讨[J].中国药品标准，2010，11(2)：148-149.