HPLC法测定注射用乳糖酸阿奇霉素中的有关物质

谭佳　李凤鸣　吴群容

[摘要] 目的 建立高效液相色谱法测定注射用乳糖酸阿奇霉素的有关物质。 方法 采用高效液相色谱法测定已知杂质以及未知单杂。使用BDS HYPERSIL C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），以乙腈∶pH8.2磷酸盐缓冲液（0.05mol/L磷酸氢二钾溶液， 用20%磷酸调节pH至8.2）（55∶45）为流动相。样品溶液的进样量为200μg，流速：1.5mL/min，检测波长：293nm。 结果 乳糖酸阿奇霉素与其杂质能达到基线分离，且阿奇霉素注射剂中的酸根对阿奇霉素的有关物质测定无影响，供试品溶液的浓度与峰面积线性良好，方法的准确性以及灵敏度均可满足要求。 结论 该方法简便、专属性好、灵敏度高，能较好反映各种乳糖酸阿奇霉素制剂中的有关物质的情况。

[关键词] 高效液相色谱法；乳糖酸阿奇霉素；有关物质；制剂

[中图分类号] R927 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2014）13-97-03

[Abstract] Objective To establish the determination method of the related substances in azithromycin lactobionate and its injection. Methods High performance liquid chromatography（HPLC）was used for the determination of the known impurity and the unknown impurities. The analysis was performed on a BDS HYPERSIL C18 column （250mm×4.6mm， 5μm）. The mobile phase was composed of acetonitrile∶pH8. 2 phosphate buffer （0.05mol/L K2HPO4 solution， adjust pH to 8.2 with 20% phosphate acid） （ 55∶45） ，the injection amounts of sample solutions were 200μg，with the flow of 1.5mL/min.The detection wavelength was 293nm. Results Azithromycin lactobionate and its related substances can be well separated from each other on the developed system. The co-existence acids in azithromycin for injection did not interfere with the determination of the related substances. The chromatographic peak area and concentration of moxacin hydrochloride showed a good linear relationship。Accuracy and sensitivity of the method could meet the specific analytical requirements. Conclusion The developed method is convenient， a good specificity， high sensitivity. It can be used to determine the related substances in azithromycin lactobionate and its injection.

[Key words] HPLC； Azithromycin lactobionate； Related substances； Drug products

阿奇霉素在水中几乎不溶解，但在稀酸溶液中易溶，且其对酸较敏感，在酸溶液中可使其完全降解[1-2]。中国药典2005年版中收载有阿奇霉素，目前常用盐酸、硫酸、乳糖酸、马来酸、门冬氨酸阿奇霉素以及阿奇霉素磷酸二氢钠、阿奇霉素柠檬酸二氢钠及相应的注射剂（粉针，小针剂及大输液）[3]。有关物质检查是目前药品安全性评价的一个重要指标。HPLC法是最常用的有关物质检查方法之一[4]。近年，我国呼吸系统感染发病率直线上升，本品需求量稳步攀升，已逐渐成为治疗呼吸道感染的重要药物。现参考国内外药典及有关文献，建立控制注射用阿奇霉素有关物质的方法，报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AG-135电子天平（瑞士Mettler Toledo公司），戴安U3000高效液相色谱仪，检测器：VWD检测器，工作站：变色龙软件；Milli-Q超纯水系统（美国密理博公司）。

1.2 试药及溶剂

市售注射用乳糖酸阿奇霉，阿奇霉素系统适用性对照品、阿奇霉素峰鉴别对照品（均为欧洲药典对照品）；其原料、辅料均由沈阳第一制药有限公司提供。甲醇、乙腈均为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

使用BDSHYPERSILC18色谱柱（250mm× 4.6mm，5μm），以乙腈∶pH8.2磷酸盐缓冲液（0.05mol/L磷酸氢二钾溶液液，用20%磷酸调节pH至8.2）（55∶45）为流动相。样品溶液的进样量为200μg，流速：1.5mL/min，进样量：20μL，理论板数不低于3500，检测波长：293nm，柱温：40℃。

2.2 供试品溶液和对照溶液的制备

精密称取供试品3mL，置于10mL棕色容量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密称取1mL，置于10mL棕色容量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，精密称取1mL，置于100mL棕色容量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.3 检测方法

精密量取供试品溶液和对照溶液各50?L，分别注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，记录色谱图。取系统适用性对照品溶液及峰鉴别对照品溶液50?L注入液相色谱仪，根据峰鉴别溶液色谱图确定杂质峰位，录色谱图至主峰保留时间的2.5倍。

2.4 线性

称取供试品适量，置于50mL棕色容量瓶中，加溶剂稀释至每毫升含0.1mg的溶液，摇匀，量取1mL，置于100mL棕色容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为线性储备液；精密称取上述储备液2、5、10、20、30mL，分置于100mL棕色容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为线性测试溶液1、2、3、4、5；精密量取上述线性测试溶液1、2、3、4、5线性储备液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见表1，表明在2.017～30.255范围内，线性关系较好。

2.5 精密度试验

精密取供试品50mg，置于100mL棕色容量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，精密量取1mL，置于10mL棕色容量瓶中，加溶剂至刻度，摇匀，精密量取1mL，置于100mL棕色容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取上述供试品溶液50?L连续进样5次。见表2。

3 讨论

阿奇霉素为半合成的十五大环内酯类药物，其属于广谱抗生素，其抗菌谱与红霉素相近，但其作用较强，对淋球菌、流感嗜血杆菌的作用比红霉素强4倍；不仅对革兰阳性菌有较强的抗菌活性，且对嗜肺军团菌、肺炎衣原体及沙眼衣原体等作用也较强，对抗梭状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌感染也比红霉素有效；该药物口服吸收迅速，口服生物利用度为40%，消除半衰期可长达32～45h临床广泛用于控制呼吸系统感染，泌尿系统感染及其他感染[5-10]。

本研究对乳糖酸阿奇霉素中有关物质测定的HPLC法进行了系统的方法学验证。结果显示，乳糖酸阿奇霉素进样质量在2.017～30.255μg/mL（r=0.9999）范围内，供试品溶液的浓度与峰面积线性良好。最小检出限：供试品的最小检测限为0.11μg/mL。最小定量限为4.03ng，精密度：RSD为0.92%。溶液稳定性：RSD为0.87%，试品溶液及其对照溶液在8h内稳定。

本研究对样品和市售品进行了检测，对已知杂质进行了检测及定量分析，结果显示，乳糖酸阿奇霉素中单个已知杂质均达到检测限，且未知杂质未检出。综上所述，本研究建立的易在国内普及、专属性较好的阿奇霉素有关物质HPLC分析方法，较好地解决了阿奇霉素有关物质分析的难题，为阿奇霉素注射剂质量控制提供了良好的分析手段。但阿奇霉素对酸敏感、对热不稳定，因此，阿奇霉素输液剂型应注重其合理性。

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（收稿日期：2014-04-21）