MMP-9、Collagen III在胎膜组织中的表达及意义

王 倩

胎膜早破(premature rupture of membranes，PROM)是产科常见并发症之一，约占足月妊娠的10%、早产的2.0%～3.5%[1]，可使早产、新生儿死亡、感染、产后出血比例升高，对妊娠和分娩不利。因此，预防胎膜早破对改善母儿结局有重要意义。胎膜早破的发生可能与MMPs水解细胞外基质(ECM)，使其结构发生改变，导致胎膜的张力和弹性发生改变继而导致破裂。我们采用免疫组化的方法检测胎膜早破组和对照组胎膜组织中MMP-9和Collagen III的表达，探讨MMP-9和Collagen III与胎膜早破发生中的作用。

1 资料与方法

1.1资料 收集2011年1月-2011年12月我院妇产科住院分娩的孕周为28～42周、单胎头先露产妇60例，其中妊娠28-36+6周的未足月胎膜早破(pPROM)20例，37～42周的足月胎膜早破(tPROM)20例;对照组20例(早产10例，正常足月分娩10例)。标本经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，5 μm连续切片，每个标本各切3片，分别检测MMP-9，Collagen III的表达。

1.2方法 试剂：兔抗人MMP-9多克隆抗体、Collagen III多克隆抗体、S-P试剂盒和液体DAB酶底物显色试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。操作方法：MMP-9，Collagen III免疫组化检测均采用S-P法：石蜡切片脱蜡和水化，微波抗原修复，分别加入过氧化酶溶液和非免疫性动物血清，孵育后加入兔抗人MMP-9多克隆抗体、Collagen III多克隆抗体，最后加入二抗和链霉菌抗生物素·过氧化酶溶液，DAB染色，苏木素复染，常规脱水、封片，以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3结果判断 MMP-9胞浆内见棕黄色颗粒沉着，Collagen III定位于ECM中，呈棕黄色线状及细颗粒状结构为阳性信号，随机选择l0个高倍视野(×400)，每个视野计数100个细胞，共计数1000个细胞，计算阳性细胞百分率。<10% 为(-)；10%～50%为(+)，>50%为(++)。分析时(-)归为阴性表达；(+)、(++)均归为阳性表达。

1.4统计学方法 应用SPSS统计软件，各组间MMP-9，Collagen III表达及MMP-9，Collagen III的表达与PROM间关系的分析采用χ2检验和Spearman相关性分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1MMP-9在各组中的表达 正常足月组阳性表达率为30.0%，早产组表达率为40.0%，pPROM组和tPROM组阳性表达率均为90.0%。PROM和对照组，MMP-9阳性表达率相比差异有统计学意义(χ2=22.12，P<0.01)。进一步作两两比较结果显示，tPROM和pPROM、对照组中的早产和足月产两者差异均无统计学意义(P值>0.05)。见表1、图1。

表1 MMP-9在各组中的表达

图1 MMP-9在胎膜早破组织中阳性表达

2.2Collagen III在各组中的表达 正常足月组阳性表达率为80.0%，早产组表达率为60.0%，pPROM阳性表达率为25.0%，tPROM阳性表达率为35.0%。PROM和对照组，Collagen III阳性表达率相比差异有统计学意义(χ2=10.64，P<0.05)。两两比较显示，tPROM和pPROM、对照组中的早产和足月产两者差异均无统计学意义(P>0.05)。见表2、图2。

表2 Collagen III在各组中的表达

2.3MMP-9和Collagen III的相关性 PROM组织中MMP-9的表达与Collagen III的表达呈负相关(r=-0.612,P<0.05)。

图2 Collagen III组织中阳性表达

3 讨论

胎膜由羊膜层、绒毛膜层以及两者相连的细胞外基质(extracellular matrix,ECM)所组成。ECM是一类由纤维连接蛋白 (fibronectin,FN)、胶原蛋白(Collagens)、 层粘连蛋白(Laminin,LN)、玻连蛋白 (vitronectin,Vn)和血小板反应蛋白 (thrombospondin,Tsp)等多种糖蛋白、蛋白多糖和胶原组成的动态网架结构，能调节组织和细胞生理活动[2]。羊膜ECM由胶原蛋白、非胶原蛋白和蛋白多糖三大类组成，而Collagen III为胶原蛋白的主要成分，能维持正常妊娠中胎膜的张力和弹性[3]。MMP-9是一类含有金属离子的蛋白水解酶，可水解胶原、弹性蛋白、氨基葡聚糖等多种细胞外基质。本实验结果表明在PROM患者中MMP-9表达明显高于对照组，而Collagen III的表达明显低于对照组，提示MMP-9的高表达和Collagen III的低表达可能在PROM的发生中起重要作用，PROM的发生可能与MMP-9破坏ECM的结构, 造成Collagen III的流失，胎膜失去支持，导致胎膜的张力和弹性改变而破裂[4]，从而导致PROM的发生。但本实验中MMP-9和Collagen III表达在pPROM组和tPROM组中的表达并无差异性，可能与实验方法，标本量较小有关。也有报道[5]表明MMP-9与早产有关，但本实验中的早产组中MMP-9的表达与正常足月分娩组无统计学差异，两者均低于PROM组，可能与对照组标本量小有关，仍有待进一步研究。

【 参 考 文 献 】

[1] 乐 杰，主编．妇产科学[M]．第6版.北京：人民卫生出版社，2004：145-146.

[2] Sachlos E，Auguste DT．Embryoid body morphology influences diffusive transport of inductive biochemicals:a strategy for stem cell differentiation[J].Biomaterials,2008,29(34):4471-4480．

[3] Liu J,Liu T,Zheng Y，et al.Early responses of osteoblast-like cells to different mechanical signals through various signaling pathways[J].Biochem Biophys Res Commun,2006，348(3):1167-1173.

[4] Weiss A,Goldman S,Shalev E.The matrix metalloproteinases (MMPS) in the decidua and fetal membranes[J].Front Biosci,2007,12: 649-659.

[5] I Tency,H Verstraelen,I Kroes,et al.Imbalances between Matrix Metalloproteinases (MMPs) and tissue inhibitor of metalloproteinases (TIMPs) in maternal serum during preterm labor[J].PloS one,2012，7(11):.