SPE-GC-μECD测定蔬菜中6种三唑类农药的残留量

徐颖洁

(南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室，江苏南京 210095)

三唑类农药具有高效、广谱、长效、内吸性强以及立体选择性等特点。自第1个商品化的三唑类农药——三唑酮问世后，该类农药引起广泛关注并发展迅速，已有近30个品种商品化［1－4］。随着三唑类农药在蔬菜、水果中的施用量逐渐加大，由其残留引发的食品安全问题也越来越受到人们的广泛关注。美国、日本、欧盟等发达国家均已制定严格的最大残留限量标准并实施残留监控。特别是日本“肯定列表”制度实施后，我国出口日本的蔬菜中多次被查出三唑类农药残留超标，其中涉及氟硅唑、苯醚甲环唑、三唑醇等。

国内外虽然已有基于高效液相色谱法［5－8］、液相色谱－串联质谱法［9－11］、气相色谱法［12－13］、气相色谱－质谱法［14－20］等检测手段的三唑类农药残留检测的文献报道，但个别方法的检测限不能完全满足最高残留限量(MRL)要求;同时有些方法的检测技术和样品前处理技术相对落后。鉴于此，笔者以目前在蔬菜上广泛使用的6种三唑类农药(腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲环唑、丙环唑和三唑醇)为研究对象，采用SPE-GC-μECD方法测定了萝卜、黄瓜、青菜中上述6种三唑类农药残留，以期为蔬菜中上述6种三唑类农药残留的检测提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验材料。萝卜、黄瓜、青菜样品购于超市。

1.1.2 试剂。乙腈:色谱纯;氯化钠:优级纯;无水硫酸钠:分析纯，用前在650℃灼烧4 h，贮于干燥器中，冷却后备用;正己烷:色谱纯;丙酮:分析纯，重蒸;Innovation Florisil固相萃取柱:6 ml，0.5 g，使用前需用5 ml正己烷活化，无锡科奥美萃生物科技有限公司生产;微孔滤膜:0.45 μm，有机相;腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲环唑、丙环唑、三唑醇标准物质:纯度大于或等于99%，购于德国Dr.Ehrenstorfer公司。淋洗液:丙酮+正己烷(10+90，体积比);洗脱液:丙酮+正己烷(20+80，体积比)。

1.1.3 仪器。气相色谱仪:配有微电子捕获检测器(μECD)，美国Agilent公司生产;分析天平:感量为0.000 1 g和0.010 0 g。

1.2 方法

1.2.1 试样的提取。称取25 g试样(精确至0.01 g)于100 ml锥形瓶中，向锥形瓶中加入50 ml乙腈，将锥形瓶置于超声波清洗器中超声提取20 min，过滤，将滤液转移到100 ml具塞量筒中，加入5 g氯化钠，剧烈振荡3 min，静置30 min。准确移取10 ml上层清液，使之通过装有2 cm厚的无水硫酸钠层的滤纸进入100 ml锥形瓶Ⅱ，并用5 ml乙腈洗涤无水硫酸钠层，收集、合并乙腈于锥形瓶Ⅱ，于65℃水浴中氮气吹干，用2 ml淋洗液溶解残渣，待净化。

1.2.2 试样的净化。将待净化液转移至固相萃取柱中，调节装置使淋洗液流速约为2 ml/min，用12 ml淋洗液分3次洗涤锥形瓶Ⅱ，待液面到达固相萃取柱填料上层时，将洗涤液加入柱中，弃流出液。待液面到达固相萃取柱填料上层时，加入10 ml洗脱液，收集洗脱液于100 ml锥形瓶Ⅲ，于40℃水浴中用氮气吹干。用1.0 ml洗脱液溶解残渣，有机微孔滤膜过滤，待测。

1.2.3 气相色谱条件。色谱柱:石英毛细管色谱柱DB-1ms，30 m ×0.25 mm ×0.25 μm;柱温:150 ℃，保持 2 min，以5℃/min升温至220℃，再以20℃/min升温至300℃，保持4 min;进样口温度:250℃;检测器温度:320℃;载气:N2，纯度99.999%，流速1.2 ml/min;进样方式:分流进样，分流比40∶1;进样量:1.0 μl。

1.2.4 标准溶液的配制。分别称取腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲环唑、丙环唑、三唑醇各标准物质约0.025 g(精确至0.000 2 g)于25 ml容量瓶中，加淋洗液超声振荡溶解，定容，摇匀，配制成单一标准溶液。

2 结果与分析

2.1 气相色谱条件的选择 腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲环唑、丙环唑、三唑醇6种农药的结构中均含有电负性原子，而微电子捕获检测器对含电负性原子的物质具有很强的响应。为了能实现较低的检测限，在该研究中选择微电子捕获检测器对腈菌唑等6种杀菌剂进行同时测定。

参考相关文献［13］，选用DB-1ms石英毛细管色谱柱作为腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲环唑、丙环唑、三唑醇的分析测试色谱柱。为了保证6种三唑类农药合适的保留时间和较好的分离度，进行不同柱温的分离试验。通过不同柱温的分离试验，确定柱温条件为:150℃保持2 min，以5℃/min升温至220℃，再以20℃/min升温至300℃，保持4 min。该条件下，6种三唑类农药均达到基线分离，出峰时间在12～21 min，从而可有效避免样品中其他杂质的干扰。

在“1.2.3”色谱条件下，腈菌唑、戊菌唑、三唑酮、苯醚甲环唑、丙环唑、三唑醇的色谱及保留时间见图1。

图1 6种三唑类农药的气相色谱

2.2 标准曲线 分别配制不同浓度的系列标准混合工作溶液，在“1.2.3”气相色谱条件下对系列标准工作溶液进行测定。由表1可知，6种三唑类农药的线性关系均良好。三唑酮、戊菌唑、三唑醇、腈菌唑、丙环唑和苯醚甲环唑的检出限分别为 0.013、0.013、0.210、0.057、0.010 和0.025 mg/kg。

表1 6种三唑类农药的线性方程和相关系数

表2 样品中的添加水平、回收率和相对标准偏差

2.3 回收率和精密度 在不含6种待测三唑类农药的萝卜、青菜、黄瓜3种样品中添加6种三唑类农药，进行添加回收试验，添加3个浓度水平，每个浓度水平重复6次。由表2可知，该方法的平均加标回收率在72.90% ～98.80%，相对标准偏差范围在1.18% ～9.88%，符合农药残留检测标准。

3 结论

采用气相色谱测定蔬菜(萝卜、黄瓜和青菜)中腈菌唑等6种三唑类杀菌剂的残留量，该方法简便、快速、可操作性很强，准确度、精密度和灵敏度等指标均符合农药残留检测标准。该研究中建立的检测方法为蔬菜中腈菌唑等6种三唑类杀菌剂残留的检测提供了技术参考。

［1］杨扬，吕文硕，史延年.具有生物活性的N-1取代1，2，4-三唑类化合物的研究与进展［J］.化学通报，1996(10):6 －14.

［2］张一宾.全球三唑类杀菌剂的市场、品种、特点及发展［J］.中国农药，2010(12):11－13.

［3］穆曼曼，卢博为，卢俊瑞，等.3-(N-取代苯基-2-乙酰胺基)硫基-4-N-取代邻羟苯基亚胺基-5-甲基-1，2，4-三唑类化合物的合成及生物活性研究［J］.有机化学，2012(6):1101－1107.

［4］王献友，薛潇沛，庞艳萍，等.1，2，4-三唑类化合物杀菌活性的研究进展［J］.江苏农业科学，2013(8):134 －137.

［5］胡楠，伍心妮，王和平，等.分散液相微萃取－高效液相色谱法测定三唑类衍生物［C］//河南省化学会2012年学术年会论文摘要集.河南省化学学会，2012:1.

［6］胡静，吴晓燕，高文惠.分子印迹固相萃取－高效液相色谱法分析2种三唑类杀菌剂残留［J］.药物分析杂志，2012(6):1043－1047.

［7］张敏，黄其亮，殷帅，等.基于离子液体的分散液相微萃取－高效液相色谱法测定水中三唑类农药［J］.华中农业大学学报，2012(3):341－345.

［8］王卫娜，马小星，吴秋华，等.石墨烯磁性固相萃取－高效液相色谱测定环境水样中的三唑类杀菌剂［C］//全国生物医药色谱及相关技术学术交流会(2012)会议手册.中国化学会，2012:3.

［9］胡艳云，徐慧群，姚剑，等.分子印迹固相萃取－液相色谱－质谱法测定果蔬中20种三唑类农药残留［J］.分析化学，2014(2):227－232.

［10］肖颖，彭敬东，张晶，等.分散固相萃取分散液液微萃取高效液相色谱/质谱法测定荔枝或香蕉中的三唑类农药残留［J］.西南大学学报:自然科学版，2013(5):102 －106.

［11］王菲，李彤，马辰.超高效液相色谱－串联质谱法测定中药材中三唑类杀菌剂及三嗪类除草剂的残留量［J］.色谱，2013(3):191－199.

［12］刘红梅，李文英，黎小鹏，等.全自动索氏提取－气相色谱法检测小麦粉中菊酯、取代苯类、三唑类农药残留［J］.广东农业科学，2012(12):93 －95.

［13］吴俐，陈铭学，牟仁祥，等.植物源食品中6种三唑类杀菌剂残留量的气相色谱法测定［J］.分析测试学报，2009(7):846 －848，854.

［14］沈伟健，桂茜雯，余可垚，等.气相色谱－负化学离子源质谱测定大豆和玉米中12种三唑类杀菌剂的残留量［J］.色谱，2009(1):91－95.

［15］游明华，孙广大，陈猛，等.环境水样中9种三唑类农药的固相萃取－气相色谱 －质谱分析［J］.色谱，2008(6):704 －708.

［16］陈丽华，张丽君，张磊，等.中空纤维膜液相微萃取－GC－MS测定水果和蔬菜中三唑类杀菌剂残留量［J］.光谱实验室，2011(1):413－418.

［17］李继革，王玉飞，施家威，等.分散液－液微萃取－气质联用法同时测定水中13种三唑类杀菌剂［J］.中国卫生检验杂志，2013(6):1345－1349.

［18］张会芳.气相色谱－串联质谱法测定蔬菜水果中18种三唑类杀菌剂残留的研究［D］.郑州:郑州大学，2012.

［19］李继革，王玉飞，施家威，等.固相萃取－气相色谱－串联质谱法测定水果中11种三唑类杀菌剂［J］.色谱，2012(3):262－266.

［20］葛娜，刘晓茂，李学民，等.气相色谱－质谱法测定蔬菜与水果中11种三唑类农药残留［J］.分析测试学报，2011(12):1351－1355.