荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA的应用价值

张桂花 广东省惠州市第六人民医院检验科 516211

结核病是由结核分枝杆菌引起的一种以呼吸系统为主的传染病，主要由含菌的飞沫通过呼吸道传播［1］，是目前严重威胁人类健康的重大传染性疾病之一。临床常通过检测患者痰液中的结核分枝杆菌，对结核病进行及时诊断和治疗［2］。选择我院自2011年7月－2013年8月在我院住院治疗的78例结核病患者，采取荧光定量PCR、抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养三种方法对患者的同一份痰标本进行检测，对比分析荧光定量PCR在结核分枝杆菌检测中的临床应用价值，现将具体情况汇报如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011年7月－2013年8月在我院住院治疗的肺结核患者78例，其中男53例，女25例，年龄17～79岁，平均年龄（49.3±3.6）岁。所有患者均有低热、盗汗及呼吸道感染等症状出现。

1.2 痰标本收集 一般在清晨，患者用生理盐水多次漱口后，将第一口咳痰弃去，取深部咳痰3口分装于3个无菌标本盒内送检。提醒患者为保证检验结果，勿将唾液吐入标本盒。

1.3 检测方法 抗酸菌涂片染色：不需特殊仪器，试剂标准自行配置，按照《全国临床检验操作规程》（第3版）（795－796）标准操作执行。改良罗氏培养：检测方法按照试剂配套说明书进行操作，操作均在生物安全柜内进行。BacT／AL E R T3D培养管置仪器培养。荧光定量PCR：仪器LightCycler 3.5全自动荧光定量基因扩增仪由罗氏公司提供，具体操作按照试剂配套说明书进行。扩增完计算机自动分析，建立标准曲线。

1.4 统计学处理 本文所有数据均采用SPSS16.0软件进行分析，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三种检测方法痰结核分枝杆菌检出率比较 通过同一例痰标本三种检测方法的对比，可以看出应用荧光定量PCR技术检测痰结核分枝杆菌DNA，检出率明显高于抗酸菌涂片染色方法和改良罗氏培养检测方法，这说明荧光定量PCR检测体系可有效检测出痰液标本中结核杆菌的存在，可在临床检测中推广应用。见表1。

表1 三种检测方法痰结核分枝杆菌检出率比较

2.2 三种检测方法痰结核分枝杆菌阳性检出率比较 通过对比分析，抗酸菌涂片染色法检测痰中结核分枝杆菌的阳性检出率为29.5%（23／78）；改良罗氏培养法检测痰中结核分枝杆菌的阳性检出率为43.6%（34／78）；荧光定量PCR技术检测痰中结核分枝杆菌的阳性检出率为73.1%（57／78）。可见荧光定量PCR技术检测痰中结核分枝杆菌的阳性检出率明显高于其他两种方法，可以在临床放心使用。

3 讨论

目前临床常用检测结核杆菌的方法较多，如涂片染色镜检、结核杆菌培养和荧光定量PCR等方法，抗酸菌涂片染色因其检测方法简单，技术要求不高，但是不能够为治疗提供较准确信息，适合基层单位大规模的普查中使用［3］。结核杆菌培养法检测结核杆菌阳性率明显高于涂片染色镜检法，但是因其培养要求较高，需要时间较长，在实际应用中有－定的局限［4］。而应用荧光定量PCR技术检测痰结核分枝杆菌DNA操作简单、诊断快捷、灵敏度较高，结果真实可靠，可作为结核病的常规诊断方法。

笔者通过对比实验分析了三种方法对结核杆菌的检出能力，可以看出荧光定量PCR技术在痰结核分枝杆菌DNA检测中，痰结核分枝杆菌检出率明显高于抗酸菌涂片染色方法和改良罗氏培养检测方法，另外在痰结核分枝杆菌的阳性检出率比较结果看，荧光定量PCR技术检测痰中结核分枝杆菌的阳性检出率为73.1%，明显高于抗酸菌涂片染色法和改良罗氏培养两种方法。这说明荧光定量PCR方法对结核杆菌的快速检测有重要应用价值，对结核杆菌不仅能进行定性检测，也能够定量检测［5］，在抗结核治疗中，采用PCR方法定期检测，对于结核患者治疗过程中的结核杆菌感染数量的判断具有一定的意义，因此荧光定量PCR方法检测结核杆菌值得临床推广。

［1］辛茶香，刘珍琼，熊国亮 .分支杆菌DNA的应用价值〔J〕.国际检验医学杂志，2007，3：196－197.

［2］张东浩，李影.荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA的应用价值〔J〕.中国医药指南，2012，1：65－66.

［3］楼翔.痰液标本不同检测方法对结核杆菌检测比较〔J〕.检验与临床，2011，49（13）：48－49.

［4］邬艳.荧光定量PCR检测痰结核杆菌特异性DNA序列及其临床应用〔J〕.中外医学研究，2012，16：90－91.

［5］耿一博.荧光定量PCR技术在痰结核菌检测中的应用〔J／OL〕.医 学 论 坛 网，2013，Http：／／www.cmt.com.cn／detail／233345.html.