种子处理粉剂中吡虫啉、甲霜灵和福美双的HPLC法快速分析

于晓萍+姜业朝+拜钰

摘要：为了建立对种子处理粉剂中吡虫啉、甲霜灵和福美双含量的高效液相色谱快速分析方法，使用配备了瑞典Kromasil 100-5-C18不锈钢色谱柱的美国Angilent 1260高效液相色谱仪，利用高效液相色谱法测定种子处理粉剂中吡虫啉、甲霜灵和福美双的含量，以甲醇-水溶液为流动相，采用梯度洗脱；流速控制在1.0 mL/min；柱温：室温；213 nm 的检测波长；进样体积20 μL。结果表明，在10～500 mg/L的范围内，吡虫啉、甲霜灵和福美双线性关系良好，平均回收率为100.18%、99.97%和99.94%，吡虫啉的相对标准偏差为0.0613%，甲霜灵的相对标准偏差为0.045 1%，福美双的相对标准偏差为0.051 5%。此方法可快速测定种子处理粉剂中吡虫啉、甲霜灵和福美双的含量，具有方法新颖、快速、简便、准确、精密度好等优点。

关键词：种子处理粉剂；吡虫啉；甲霜灵；福美双；高效液相色谱法；快速

中图分类号： O657.7+2文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）02-0255-03

收稿日期：2013-09-25

基金项目：2013年江苏省高等职业院校国内高级访问学者计划（编号：FX001）；江苏省大学生创新创业训练计划（编号：201313754002Y）。

作者简介：于晓萍（1970—），女，江苏扬州人，副教授，研究方向为有机合成、仪器分析。E-mail：jsyzyuxp@163.com。吡虫啉（imidacloprid，CAS：105827-78-9；138261-41-3），是烟碱类超高效杀虫剂，由德国拜耳公司和日本特殊农药株式会社共同开发。甲霜灵（英文名称：metalaxyl，CAS：57837-19-1）是瑞士汽巴-嘉基公司1977年开发出的一种防治藻菌纲病害的新型、高效、低毒、内吸性酰胺类杀菌剂[1]。福美双（英文名称：thiram，CAS：137-26-8）是一种广谱、低毒、保护性有机硫杀菌剂[2]，20世纪60年代初天津市农药研究所开始生产、推广使用福美双，现已成为我国杀菌剂主要品种之一[3]。含有吡虫啉、甲霜灵和福美双的种子处理粉剂是农药公司新开发的集防病治虫抗旱等功能于一体的新型种子处理粉剂。新型种子处理粉剂的推广使用，带来对其含量分析的要求，这关系到控制杀菌杀虫效果、质量、生产成本等方面的问题[4-5]。吡虫啉目前的测定方法是以乙腈-水（体积比1 ∶3）为流动相的高效液相色谱法[6-7]和以甲醇-02%磷酸水溶液（体积比40 ∶60） 为流动相的高效液相色谱法[8-9]；甲霜灵目前的测定方法有气相色谱法和高效液相色谱法[10-11]；福美双有高效液相色谱分析方法的报道[12-13]。由于含有吡虫啉、甲霜灵和福美双的种子处理粉剂是新型种子处理粉剂，未有测定方法的报道。本方法以甲醇-水为流动相，在分离过程中设计合理的梯度洗脱过程，实现了高效液相色谱分析法同时测定种子处理粉剂中吡虫啉、甲霜灵和福美双的含量，具有方法新颖、快速、简便、准确、精密度好等优点。

1材料与方法

1.1仪器

采用配备了瑞典AKZO NOBEL公司Kromasil 100-5-C18不锈钢色谱柱，150 mm×4.6 mm，具有可变波长紫外检测器的Angilent 1260高效液相色谱仪；美国Angilent液相色谱工作站；20 μL的自动进样器；孔径为0.45 μm的过滤器；赛多利斯cp225D型十万分之一电子分析天平。

1.2试剂

吡虫啉标准对照品（98.6%，上海市农药研究所检测中心）；甲霜灵标准对照品（99.2%，上海市农药研究所检测中心）；福美双标准对照品（98.3%，上海市农药研究所检测中心）；甲醇：色谱纯；新制二次蒸馏水；其余试剂均为分析纯。

种子处理粉剂样品（有效成分：含吡虫啉、甲霜灵和福美双均在10%左右）由江苏粮满仓农化有限公司提供。

1.3色谱条件

流动相：甲醇-水溶液在不同时间的体积比为40 ∶60（0 min）、40 ∶60（5 min）、80 ∶20（15 min）、80 ∶20（25 min）、40 ∶60（平衡5 min）；流速控制在1.0 mL/min；柱温：室温（要求试验过程中温差变化小于2 ℃）；检测波长：213 nm；进样体积20 μL。在此条件下样品与干扰物质完全分离，吡虫啉保留时间约为2.5 min，甲霜灵保留时间约为10.3 min，福美双保留时间约为4.3 min，色谱图见图1、2、3。种子处理粉剂中吡虫啉、甲霜灵和福美双在此色谱条件下能够完全分离，色谱图见图4。

1.4溶液的配制

1.4.1吡虫啉、甲霜灵和福美双标准混合溶液的制备称取吡虫啉、甲霜灵、福美双各0.05 g（精确至0.000 02 g），依次放入 50 mL 容量瓶中，加入约40 mL流动相，用超声波振荡10 min使其溶解，取出冷却至室温后，加入流动相定容至刻度，摇匀备用，其中含吡虫啉、甲霜灵和福美双质量浓度均为1 000.0 mg/L。

1.4.2试样溶液的制备称取相当于0.025 g吡虫啉，或0025 g甲霜灵，或0.025 g福美双（精确至0.000 02 g），放入25 mL容量瓶中，加入约20 mL流动相，用超声波振荡10 min使其溶解，取出冷却至室温后，加入流动相定容至刻度，摇匀备用。

2结果与分析

2.1检测波长的确定

由于吡虫啉、甲霜灵和福美双在213 nm处均有较好的吸收，且杂质干扰较少，经过试验可以得知，在此波长下同时检测吡虫啉、甲霜灵和福美双3个样品，3个样品的检测线性范围、检测精密度及回收率都可满足要求，故选择此波长处进行检测。

2.2线性关系考察endprint

利用1 000.0 mg/L的吡虫啉、甲霜灵和福美双标准混合溶液，配制含吡虫啉、甲霜灵和福美双的质量浓度由低到高依次均为10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各质量浓度溶液进样，记录色谱图。以吡虫啉、甲霜灵和福美双标准品溶液的质量浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标作出对应的关系曲线，吡虫啉的线性回归方程为y=36 030x-21198，相关系数r=0.999 99；甲霜灵的线性回归方程为y=34 501x+40.576，相关系数r=0.999 96；福美双的线性回归方程为y=59 879x+14.923，相关系数r=1.000 00。由此可见：该方法对于吡虫啉、甲霜灵和福美双的含量在10～500 mg/L范围内线性关系良好。

2.3方法精密度、重现性试验

在前述色谱操作条件下，分别对吡虫啉、甲霜灵和福美双的3批试样进行5次平行测定，结果吡虫啉含量的RSD为0061 3%，甲霜灵含量的RSD为0.045 1%，福美双含量的RSD为0.051 5%（表1）。结果表明：在此条件下进行分析，标准偏差小，精密度高，而且重现性良好。

2.4方法的准确度试验

精密称取5份已知含量的样品，分别精密加入吡虫啉、甲霜灵和福美双标准品，制成供试品溶液，进行测定，计算回收率，结果见表2。

3结论

参考文献：

[1]Urrea K，Rupe J C，Rothrock C S. Effect of fungicide seed treatments，cultivars，and soils on soybean stand establishment[J]. Plant Disease，2013，97（6）：807-812.

[2]Srivastava R K，Singh B K，Mani D. Effect of organic matter on adsorption and persistence of thiram fungicide in different soils[J]. Asian Journal of Chemistry，2013，25（1）：292-296.

[3]Morales M，Moratinos H，Gonzalez T. Effect of fungicides on physiology and health characteristics of rice seeds during storage[J]. Revista de la Facultad de Agronomia de la Universidad del Zulia，2012，29（4）：505-524.

[4]Jovanov P，Guzsvány V，Franko M，et al. Multi-residue method for determination of selected neonicotinoid insecticides in honey using optimized dispersive liquid-liquid microextraction combined with liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Talanta，2013，111：125-133.

[5]Watanabe E，Kobara Y，Baba K，et al. Reduction of hazardous organic solvent in sample preparation for hydrophilic pesticide residues in agricultural products with conventional liquid chromatography[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2013，61（20）：4792-4798.

[6]GB/T 23379—2009水果、蔬菜及茶叶中吡虫啉残留的测定[S]. 北京：中国标准出版社，2009.

[7]罗湘仁，马超，严寒，等. 10.8%戊唑·吡虫啉悬浮种衣剂的高效液相色谱分析[J]. 现代农药，2012，11（2）：35-37.

[8]王丹丹，丁明祥.吡虫啉母药的高效液相色谱分析[J]. 农药，2010，49（8）：576-577，584.

[9]丑靖宇，李超，鞠光秀，等. 29%吡虫啉·多菌灵·烯肟菌胺悬浮种衣剂的高效液相色谱分析[J]. 农药，2012，51（4）：275-277.

[10]谭维. 烯酰·甲霜灵30%可湿性粉剂的高效液相色谱分析方法[J]. 农药科学与管理，2010，31（1）：41-44.

[11]吴学宏，刘鹏飞，韦福金，等. 15%·霜·福悬浮种衣剂的高效液相色谱分析[J]. 农药，2007，46（2）：112-113.

[12]黄永忠，魏东，杨彩玲.15%福美双·吡虫啉·烯唑醇悬浮种衣剂的RP-HPLC分析[J]. 农药，2008，47（2）：114-115.

[13]董广新，周良佳，杜薇. 40%啶菌唑·福美双悬乳剂高效液相色谱分析[J]. 农药，2005，44（12）：551-552.endprint

利用1 000.0 mg/L的吡虫啉、甲霜灵和福美双标准混合溶液，配制含吡虫啉、甲霜灵和福美双的质量浓度由低到高依次均为10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各质量浓度溶液进样，记录色谱图。以吡虫啉、甲霜灵和福美双标准品溶液的质量浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标作出对应的关系曲线，吡虫啉的线性回归方程为y=36 030x-21198，相关系数r=0.999 99；甲霜灵的线性回归方程为y=34 501x+40.576，相关系数r=0.999 96；福美双的线性回归方程为y=59 879x+14.923，相关系数r=1.000 00。由此可见：该方法对于吡虫啉、甲霜灵和福美双的含量在10～500 mg/L范围内线性关系良好。

2.3方法精密度、重现性试验

在前述色谱操作条件下，分别对吡虫啉、甲霜灵和福美双的3批试样进行5次平行测定，结果吡虫啉含量的RSD为0061 3%，甲霜灵含量的RSD为0.045 1%，福美双含量的RSD为0.051 5%（表1）。结果表明：在此条件下进行分析，标准偏差小，精密度高，而且重现性良好。

2.4方法的准确度试验

精密称取5份已知含量的样品，分别精密加入吡虫啉、甲霜灵和福美双标准品，制成供试品溶液，进行测定，计算回收率，结果见表2。

3结论

参考文献：

[1]Urrea K，Rupe J C，Rothrock C S. Effect of fungicide seed treatments，cultivars，and soils on soybean stand establishment[J]. Plant Disease，2013，97（6）：807-812.

[2]Srivastava R K，Singh B K，Mani D. Effect of organic matter on adsorption and persistence of thiram fungicide in different soils[J]. Asian Journal of Chemistry，2013，25（1）：292-296.

[3]Morales M，Moratinos H，Gonzalez T. Effect of fungicides on physiology and health characteristics of rice seeds during storage[J]. Revista de la Facultad de Agronomia de la Universidad del Zulia，2012，29（4）：505-524.

[4]Jovanov P，Guzsvány V，Franko M，et al. Multi-residue method for determination of selected neonicotinoid insecticides in honey using optimized dispersive liquid-liquid microextraction combined with liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Talanta，2013，111：125-133.

[5]Watanabe E，Kobara Y，Baba K，et al. Reduction of hazardous organic solvent in sample preparation for hydrophilic pesticide residues in agricultural products with conventional liquid chromatography[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2013，61（20）：4792-4798.

[6]GB/T 23379—2009水果、蔬菜及茶叶中吡虫啉残留的测定[S]. 北京：中国标准出版社，2009.

[7]罗湘仁，马超，严寒，等. 10.8%戊唑·吡虫啉悬浮种衣剂的高效液相色谱分析[J]. 现代农药，2012，11（2）：35-37.

[8]王丹丹，丁明祥.吡虫啉母药的高效液相色谱分析[J]. 农药，2010，49（8）：576-577，584.

[9]丑靖宇，李超，鞠光秀，等. 29%吡虫啉·多菌灵·烯肟菌胺悬浮种衣剂的高效液相色谱分析[J]. 农药，2012，51（4）：275-277.

[10]谭维. 烯酰·甲霜灵30%可湿性粉剂的高效液相色谱分析方法[J]. 农药科学与管理，2010，31（1）：41-44.

[11]吴学宏，刘鹏飞，韦福金，等. 15%·霜·福悬浮种衣剂的高效液相色谱分析[J]. 农药，2007，46（2）：112-113.

[12]黄永忠，魏东，杨彩玲.15%福美双·吡虫啉·烯唑醇悬浮种衣剂的RP-HPLC分析[J]. 农药，2008，47（2）：114-115.

[13]董广新，周良佳，杜薇. 40%啶菌唑·福美双悬乳剂高效液相色谱分析[J]. 农药，2005，44（12）：551-552.endprint

利用1 000.0 mg/L的吡虫啉、甲霜灵和福美双标准混合溶液，配制含吡虫啉、甲霜灵和福美双的质量浓度由低到高依次均为10.0、20.0、50.0、100.0、200.0、500.0 mg/L，依次吸取各质量浓度溶液进样，记录色谱图。以吡虫啉、甲霜灵和福美双标准品溶液的质量浓度为横坐标，色谱峰面积为纵坐标作出对应的关系曲线，吡虫啉的线性回归方程为y=36 030x-21198，相关系数r=0.999 99；甲霜灵的线性回归方程为y=34 501x+40.576，相关系数r=0.999 96；福美双的线性回归方程为y=59 879x+14.923，相关系数r=1.000 00。由此可见：该方法对于吡虫啉、甲霜灵和福美双的含量在10～500 mg/L范围内线性关系良好。

2.3方法精密度、重现性试验

在前述色谱操作条件下，分别对吡虫啉、甲霜灵和福美双的3批试样进行5次平行测定，结果吡虫啉含量的RSD为0061 3%，甲霜灵含量的RSD为0.045 1%，福美双含量的RSD为0.051 5%（表1）。结果表明：在此条件下进行分析，标准偏差小，精密度高，而且重现性良好。

2.4方法的准确度试验

精密称取5份已知含量的样品，分别精密加入吡虫啉、甲霜灵和福美双标准品，制成供试品溶液，进行测定，计算回收率，结果见表2。

3结论

参考文献：

[1]Urrea K，Rupe J C，Rothrock C S. Effect of fungicide seed treatments，cultivars，and soils on soybean stand establishment[J]. Plant Disease，2013，97（6）：807-812.

[2]Srivastava R K，Singh B K，Mani D. Effect of organic matter on adsorption and persistence of thiram fungicide in different soils[J]. Asian Journal of Chemistry，2013，25（1）：292-296.

[3]Morales M，Moratinos H，Gonzalez T. Effect of fungicides on physiology and health characteristics of rice seeds during storage[J]. Revista de la Facultad de Agronomia de la Universidad del Zulia，2012，29（4）：505-524.

[4]Jovanov P，Guzsvány V，Franko M，et al. Multi-residue method for determination of selected neonicotinoid insecticides in honey using optimized dispersive liquid-liquid microextraction combined with liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Talanta，2013，111：125-133.

[5]Watanabe E，Kobara Y，Baba K，et al. Reduction of hazardous organic solvent in sample preparation for hydrophilic pesticide residues in agricultural products with conventional liquid chromatography[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry，2013，61（20）：4792-4798.

[6]GB/T 23379—2009水果、蔬菜及茶叶中吡虫啉残留的测定[S]. 北京：中国标准出版社，2009.

[7]罗湘仁，马超，严寒，等. 10.8%戊唑·吡虫啉悬浮种衣剂的高效液相色谱分析[J]. 现代农药，2012，11（2）：35-37.

[8]王丹丹，丁明祥.吡虫啉母药的高效液相色谱分析[J]. 农药，2010，49（8）：576-577，584.

[9]丑靖宇，李超，鞠光秀，等. 29%吡虫啉·多菌灵·烯肟菌胺悬浮种衣剂的高效液相色谱分析[J]. 农药，2012，51（4）：275-277.

[10]谭维. 烯酰·甲霜灵30%可湿性粉剂的高效液相色谱分析方法[J]. 农药科学与管理，2010，31（1）：41-44.

[11]吴学宏，刘鹏飞，韦福金，等. 15%·霜·福悬浮种衣剂的高效液相色谱分析[J]. 农药，2007，46（2）：112-113.

[12]黄永忠，魏东，杨彩玲.15%福美双·吡虫啉·烯唑醇悬浮种衣剂的RP-HPLC分析[J]. 农药，2008，47（2）：114-115.

[13]董广新，周良佳，杜薇. 40%啶菌唑·福美双悬乳剂高效液相色谱分析[J]. 农药，2005，44（12）：551-552.endprint