保健食品葛根素提取物中葛根素的含量测定

杨静 陈茂邦

保健食品葛根素提取物中葛根素的含量测定

杨静 陈茂邦

目的保健品葛根素软胶囊产品的标准高效液相色谱法(HPLC)测葛根素时, 色谱图基线宽度大、对照品理论塔板数低, 峰形差, 欲对其色谱条件进行改进。方法流动相改为：甲醇-水 (25：75), 检测改为250 nm; 流速、进样量不变。结果色谱图基线宽度变小, 峰形好, 葛根素在4～50 μg范围内与峰面积呈良好线性关系, r=0.9999;平均回收率为99.8%, RSD为1.0%(n=5)。结论流动相改变后的方法能更准确测定其含量。

高效液相色谱法；葛根素

葛根素有扩张冠状动脉和脑血管、抗心率失常、改善微循环、抑制血小板凝集和降血糖等多方面的作用, 是处方中的主要活性成分, 故选择葛根素含量作为控制本品质量的指标成分。原标准参照有关文献, 建立HPLC测定本品中葛根素的含量, 但按该标准的试验方法进行操作, 对照品和样品的峰形较差, 出现叉峰, 对照品理论塔板较低等方面的问题。为此作者对其流动相进行了改进, 认为效果满意, 现报告如下。

1 仪器与药品

1.1实验仪器 电子分析天平(北京赛多利斯) , Agilent1200高效液相色谱仪(美国安捷伦),C18色谱柱(美国安捷伦)。

1.2实验试剂与药品 葛根素对照品(中检所研究院, 批号：110752-201313),葛根素提取物软胶囊(荣成百合生物技术有限公司),甲醇(色谱纯), 其他试剂均为分析纯, 水为超纯水。

2 实验：葛根素软胶囊中葛根素的含量测定

2.1.含量测定试验条件的选择 按文献［1］的试验方法进行操作, 在该试验条件下, 对照品和样品的峰形较差, 出现叉峰, 对照品理论塔板较低, 为不满意结果, 为找出更好的试验条件, 作者参照文献［2］的方法进行实验, 得到满意的结果。文献［1］的检测波长为247 nm, 流动相为甲醇-水-36%乙酸(25:72:3), 柱温25℃;柱子为安捷伦, 流速1.0 ml/min;文献［2］的检测波长为250 nm, 流动相为甲醇-水(25:75), 柱温30℃, 柱子C18柱, 流速1.0 ml/min。

2.2对照品溶液的制备 取葛根素对照品0.0100 g, 分别加70%甲醇(A法)和30%乙醇(B法)溶解至10 ml容量瓶中,超声萃取, 待溶解后用相应的溶解定容, 均制成每1 毫升含葛根素0.1 mg的标准溶液。

2.3供试液制备 取软胶囊10粒, 倾出内容物, 混匀。精密称取0.5 g, A法：加70%甲醇, 超声提取20 min后定容至10 ml；B法：精密加入30%乙醇50 ml, 称定重量, 回流30 min, 冷至室温, 再称定重量, 补足减失的重量, 摇匀, 再取2 ml, 加30%乙醇稀释至50 ml, 即得。

2.4两种方法测定结果 A法：按文献［1］的色谱条件,对对照品和样品进行试验, 结果对照品和供试品的峰形都较差。对照品理论塔板数较低, 方法不适用。B法：按文献［2］的色谱条件对对照品和样品进行试验, 结果, 该方法的出峰时间均在7 min左右, 葛根素能与其他成分很好地分开, 并且峰形较好, 故选择B方法为该保健品的检测方法。

2.5标准曲线和线性范围 分别吸取对照品溶液, 用30%乙醇稀释并定容的浓度分别为4、10、20、30、40、50 μg/ml的系列标准溶液。按上述色谱条件分别进样 10 μ, 以峰面积(A)为纵坐标(Y), 进样量(μl)为横坐标(X)绘制工作曲线, 得回归方程为Y=42.0138X+2.1010, r=0.9998, 线性范围为4～50 μg/ml,葛根素在此范围内与峰面积呈良好线性关系。见图1。

2.6方法学考察 精密度试验:精密吸取葛根素对照品(10 μg/ml)溶液在上述色谱条件下连续进样5次, 每次进样10 μl,结果葛根素色谱峰峰面积RSD为0.17%(n=5), 表明:本实验精密度较好。稳定性试验:精密吸取葛根素对照品溶液, 于0、2、4、6、8、12 h进样, 进样量10 μl, 考察葛根素色谱峰的相对保留时间及相对峰面积在12 h内的稳定性。结果葛根素色谱峰峰面积的RSD为1.42%(n=6), 表明对照品溶液在12 h内基本稳定。加样回收率试验精密称取已知含量同批样品(批号：20130526) 5份, 每份0.2000 g, 加30%乙醇溶液定量稀释成50 ml, 每份精密量取2 ml溶液和葛根素对照品溶液(200 μg)2 ml, 置同一50 ml容量配制, 用30%乙醇稀释至刻度, 测定葛根素含量, 平均回收率为99.80%, RSD为1.0%(n=5)。

图1 葛根素标准曲线

2.7供试品中葛根素含量测定 按上述色谱条件测定,以标准曲线计算供试品中葛根素含量, 测定结果：含量为5.30%(g/100 g), RSD为0.79%。

3 讨论

3.1测定波长的选择 取葛根素对照品溶液, 按照紫外分光光度法(《中国药典》2010年版(一部)附录Ⅴ), 在200～300 nm范围内绘制紫外吸收光谱, 葛根素在250 nm处有最大吸收,结合药典方法故选择250 nm为检测波长。

3.2提取方法的确定 分别采取A法和B法进行样品的提取, A法用超声方式提取,含量低, 峰形差, 采用B法用回流方式, 所得效果为满意, 故选择回流提取为供试品制备的条件。葛根提取物软胶囊中葛根素的含量, 采用改变色谱条件后的HPLC进行测定, 方法学研究表明, 方法精密度、重现性好, 分离度符合规定, 方法稳定；同时经对样品检测数据的考察, 确定该含量测定方法具有可应用性, 能够更有效地控制改保健品的质量。

［1］ 刘泰然, 赵珊, 张楠, 等.反相液相色谱法测定保健食品中葛根素.中国卫生检验杂志, 2005(2):147-148.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京：化学工业出版社, 2010:313.

2014-06-25］

678400 云南德宏州食品药品检验所