紫外分光光度法对催情助孕液中总黄酮含量的测定

王东升，张世栋（等）

摘要：采用紫外分光光度法测定催情助孕液中总黄酮的含量。以淫羊藿苷为对照品，甲醇作空白对照，在270 nm处测定其吸光度，计算总黄酮含量。结果表明，淫羊藿苷在1.68～10.08 ？滋g/mL内线性关系良好，相关系数为0.999 5，总黄酮平均回收率为99.29%，RSD为1.20%。催情助孕液中总黄酮含量为1.317 9%。采用紫外分光光度法测定催情助孕液中总黄酮的含量，操作快速、简便、准确，适用于催情助孕液中总黄酮含量的测定。

关键词：催情助孕液；总黄酮；含量；紫外分光光度法

中图分类号：O657.32；S853.73 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）07-1660-03

Determining the Content of Total Flavonoids in Cuiqingzhuyun Solution with Ultraviolet Spectrometry

WANG Dong-sheng， ZHANG Shi-dong， MIAO Xiao-lou， DONG Shu-wei，YAN Zuo-ting

（Key Laboratory of Veterinary Pharmaceutical Development， Ministry of Agriculture/Lanzhou Institute of Husbandry and Pharmaceutical Sciences of CAAS/ Engineering & Technology Research Center of Traditional Chinese Veterinary Medicine of Gansu Province/Key Laboratory of New Animal Drug Project of Gansu Province， Lanzhou 730050， China）

Abstract： To determine the content of total flavonoids in Cuiqingzhuyun solution，icariin was used as standard solution and methanol was used as blank solution to measure the absorbance of the sample solution at 270 nm with UV spectophotometry. The results showed that the linear range for the content of icariin was 1.68～10.08 ？滋g/mL with the correlation coefficient of 0.999 5. The average recovery of total flavonoids was 99.29% and RSD was 1.20%. The content of total flavonids of Cuiqingzhuyun solution was 1.317 9%. It is indicated that method of determining of total flavonoids in Cuiqingzhuyun solution with UV spectrophotometry was rapid， accurate， convenient and practical.

Key words： Cuiqingzhuyun liquid； total flavonoids； content； UV spectrophotometry

催情助孕液是由淫羊藿、阳起石、丹参等中药制成的纯中药子宫灌注剂，临床上主要用于治疗奶牛卵巢静止和持久黄体。据报道，催情助孕液治疗奶牛卵巢静止和持久黄体的总有效率达100%，治愈率达94%，治疗奶牛持久黄体、卵巢静止和卵巢囊肿后，平均发情率为99.4%，受孕率为81.5%[1，2]。有研究已对该制剂进行了工艺优化，并对淫羊藿苷含量测定等方面进行了报道，但方法较为复杂[3-4]。淫羊藿苷为催情助孕液的主药，总黄酮是淫羊藿苷的主要活性成分，对总黄酮进行含量测定可以更好地控制催情助孕液的质量。为此，本试验建立了催情助孕液中总黄酮含量的测定方法，并对制剂中的总黄酮含量进行了测定。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

UV-BlueStar Plus型紫外-可见分光光度计（北京莱伯泰科仪器有限公司）；AUW120D型分析天平（日本岛津公司）；LD550型多管架自动平衡离心机（湘仪离心机仪器有限公司）；Eppendorf移液器（德国Eppendorf公司）；KQ-250型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。甲醇（分析纯，天津市光复精细化工研究所）。淫羊藿苷对照品（批号：110737-200414，中国药品生物制品检定所）。催情助孕液（实验室配制）、去离子水。

1.2 方法

1.2.1 对照品溶液的制备 精密称取淫羊藿苷对照品0.42 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，即得16.8 ？滋g/mL淫羊藿苷对照品溶液。

1.2.2 供试品溶液的制备 精密吸取催情助孕液2 mL，置50 mL量瓶中，加60%乙醇至刻度，超声处理15 min，精密吸取0.5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 ？滋m微孔滤膜滤过，即得。

1.2.3 测定波长的选择 吸取淫羊藿苷对照品溶液，以甲醇作空白对照，在190～400 nm内进行扫描。

1.2.4 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1、2、3、4、5、6 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度。以吸光度A对淫羊藿苷浓度C（μg/mL）进行线性回归分析。

1.2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液3 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，连续测定5次，计算平均吸光度及相对标准偏差。

1.2.6 稳定性试验 精密吸取催情助孕液2 mL，按“1.2.2”方法制成供试品溶液，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，每小时测一次，连续测定9次，记录测定结果，计算平均吸光度及相对标准偏差。

1.2.7 重复性试验 精密吸取同批催情助孕液5份，每份2 mL，按“1.2.2”方法制成供试品溶液，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，计算样品的平均含量及相对标准偏差。

1.2.8 加样回收率试验 精密吸取5份总黄酮含量为1.319 0%的催情助孕液0.2 mL，各加入一定量的淫羊藿苷，置5 mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，超声处理15 min，精密吸取0.5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 ？滋m微孔滤膜滤过，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，计算回收率及相对标准偏差。

1.2.9 样品总黄酮含量测定 精密吸取不同批次的催情助孕液5份，每份2 mL，按“1.2.2”方法制备样品供试液，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，计算样品中总黄酮含量。

2 结果与分析

2.1 测定波长

淫羊藿苷波长扫描结果见图1，淫羊藿苷在270 nm处有最大吸收峰，从而确定测定波长为270 nm。

2.2 标准曲线的建立

以淫羊藿苷对照品溶液浓度C（μg/mL）为横坐标，吸光度A为纵坐标做标准曲线，进行线性回归分析，得回归方程为A = 0.036 5C -0.008 2，R2 = 0.999 5。说明淫羊藿苷在1.68～10.08 μg/mL内线性关系良好，结果见图2。

2.3 精密度试验结果

5次测定的吸光度平均值为0.175 04，RSD为0.24%，表明仪器精密度良好。

2.4 稳定性试验结果

9次测定的吸光度平均值为0.184 74，RSD为1.09%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.5 重复性试验结果

5份样品的平均含量为1.319 3%，RSD为0.16%，表明该方法重复性良好。

2.6 加样回收率试验结果

加样回收率试验结果见表1。由表1可见，平均回收率为99.29%，RSD为1.20%。表明该方法准确性良好。

2.7 样品总黄酮含量测定结果

催情助孕液中平均总黄酮含量为1.317 9%。结果见表2。

3 小结与讨论

总黄酮是淫羊藿苷的主要有效成分，对免疫系统、心血管系统、神经精神系统、骨骼系统和生殖系统等的疾病均有一定治疗作用[5]，常将淫羊霍苷中总黄酮含量作为评价其质量和提取分离工艺的指标[6]。总黄酮为淫羊藿苷的主要有效成分[7]，淫羊藿苷中总黄酮含量的测定方法多采用紫外分光光度法，以淫羊藿苷为指标测定总黄酮含量的方法操作简便、快速、结果准确，为2010版《中国药典》所载方法[8]。本试验将淫羊藿苷对照品的甲醇溶液在波长190～400 nm进行扫描，结果在270 nm处检测到有最大吸收峰。因此，选择以淫羊藿苷为指标性成分，在270 nm波长处进行了催情助孕液中总黄酮的含量测定。结果表明，淫羊藿苷在1.68～10.08 μg/mL内线性关系良好，试验建立的方法操作快速、简便、重复性和稳定性好，测定结果准确，适用于催情助孕液中总黄酮含量的测定。

参考文献：

[1] 王东才.中药催情助孕液治疗奶牛卵巢性不孕症[J].中兽医医药杂志，2004（3）：34-35.

[2] 李世宏，严作廷，王东升，等. 纯中药催情助孕液治疗奶牛卵巢性不孕症试验[J].中兽医医药杂志，2010（6）：52-53.

[3] 关宇强，杨国林，梁纪兰，等. HPLC法测定催情助孕液中淫羊藿苷含量的研究[J].黑龙江畜牧兽医（科技版），2009（6）：102-103.

[4] 王东升，张世栋，李世宏，等.正交试验法优化催情助孕液制备工艺[J].中国农学通报，2012，28（29）：75-78.

[5] 陆 乐，徐 洋，蔡 辉.淫羊藿总黄酮研究进展[J].山东中医药大学学报，2013，37（2）：167-170.

[6] 陈肖家，张庆文，季 晖，等.紫外分光光度法和高效液相色谱法测定淫羊藿总黄酮含量的比较研究[J].药物分析杂志，2007， 27（5）：625-630.

[7] 黄秀兰，周亚伟，王 伟. 淫羊藿黄酮类化合物药理研究进展[J].中成药，2005，27（6）：719-721.

[8] 王东升，张世栋，李世宏，等.淫羊藿总黄酮提取方法的比较研

究[J].黑龙江畜牧兽医（科技版），2012（7）：75-77.

1.2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液3 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，连续测定5次，计算平均吸光度及相对标准偏差。

1.2.6 稳定性试验 精密吸取催情助孕液2 mL，按“1.2.2”方法制成供试品溶液，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，每小时测一次，连续测定9次，记录测定结果，计算平均吸光度及相对标准偏差。

1.2.7 重复性试验 精密吸取同批催情助孕液5份，每份2 mL，按“1.2.2”方法制成供试品溶液，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，计算样品的平均含量及相对标准偏差。

1.2.8 加样回收率试验 精密吸取5份总黄酮含量为1.319 0%的催情助孕液0.2 mL，各加入一定量的淫羊藿苷，置5 mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，超声处理15 min，精密吸取0.5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 ？滋m微孔滤膜滤过，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，计算回收率及相对标准偏差。

1.2.9 样品总黄酮含量测定 精密吸取不同批次的催情助孕液5份，每份2 mL，按“1.2.2”方法制备样品供试液，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，计算样品中总黄酮含量。

2 结果与分析

2.1 测定波长

淫羊藿苷波长扫描结果见图1，淫羊藿苷在270 nm处有最大吸收峰，从而确定测定波长为270 nm。

2.2 标准曲线的建立

以淫羊藿苷对照品溶液浓度C（μg/mL）为横坐标，吸光度A为纵坐标做标准曲线，进行线性回归分析，得回归方程为A = 0.036 5C -0.008 2，R2 = 0.999 5。说明淫羊藿苷在1.68～10.08 μg/mL内线性关系良好，结果见图2。

2.3 精密度试验结果

5次测定的吸光度平均值为0.175 04，RSD为0.24%，表明仪器精密度良好。

2.4 稳定性试验结果

9次测定的吸光度平均值为0.184 74，RSD为1.09%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.5 重复性试验结果

5份样品的平均含量为1.319 3%，RSD为0.16%，表明该方法重复性良好。

2.6 加样回收率试验结果

加样回收率试验结果见表1。由表1可见，平均回收率为99.29%，RSD为1.20%。表明该方法准确性良好。

2.7 样品总黄酮含量测定结果

催情助孕液中平均总黄酮含量为1.317 9%。结果见表2。

3 小结与讨论

总黄酮是淫羊藿苷的主要有效成分，对免疫系统、心血管系统、神经精神系统、骨骼系统和生殖系统等的疾病均有一定治疗作用[5]，常将淫羊霍苷中总黄酮含量作为评价其质量和提取分离工艺的指标[6]。总黄酮为淫羊藿苷的主要有效成分[7]，淫羊藿苷中总黄酮含量的测定方法多采用紫外分光光度法，以淫羊藿苷为指标测定总黄酮含量的方法操作简便、快速、结果准确，为2010版《中国药典》所载方法[8]。本试验将淫羊藿苷对照品的甲醇溶液在波长190～400 nm进行扫描，结果在270 nm处检测到有最大吸收峰。因此，选择以淫羊藿苷为指标性成分，在270 nm波长处进行了催情助孕液中总黄酮的含量测定。结果表明，淫羊藿苷在1.68～10.08 μg/mL内线性关系良好，试验建立的方法操作快速、简便、重复性和稳定性好，测定结果准确，适用于催情助孕液中总黄酮含量的测定。

参考文献：

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[2] 李世宏，严作廷，王东升，等. 纯中药催情助孕液治疗奶牛卵巢性不孕症试验[J].中兽医医药杂志，2010（6）：52-53.

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[4] 王东升，张世栋，李世宏，等.正交试验法优化催情助孕液制备工艺[J].中国农学通报，2012，28（29）：75-78.

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[6] 陈肖家，张庆文，季 晖，等.紫外分光光度法和高效液相色谱法测定淫羊藿总黄酮含量的比较研究[J].药物分析杂志，2007， 27（5）：625-630.

[7] 黄秀兰，周亚伟，王 伟. 淫羊藿黄酮类化合物药理研究进展[J].中成药，2005，27（6）：719-721.

[8] 王东升，张世栋，李世宏，等.淫羊藿总黄酮提取方法的比较研

究[J].黑龙江畜牧兽医（科技版），2012（7）：75-77.

1.2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液3 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，连续测定5次，计算平均吸光度及相对标准偏差。

1.2.6 稳定性试验 精密吸取催情助孕液2 mL，按“1.2.2”方法制成供试品溶液，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，每小时测一次，连续测定9次，记录测定结果，计算平均吸光度及相对标准偏差。

1.2.7 重复性试验 精密吸取同批催情助孕液5份，每份2 mL，按“1.2.2”方法制成供试品溶液，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，计算样品的平均含量及相对标准偏差。

1.2.8 加样回收率试验 精密吸取5份总黄酮含量为1.319 0%的催情助孕液0.2 mL，各加入一定量的淫羊藿苷，置5 mL容量瓶中，加60%乙醇至刻度，超声处理15 min，精密吸取0.5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 ？滋m微孔滤膜滤过，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，计算回收率及相对标准偏差。

1.2.9 样品总黄酮含量测定 精密吸取不同批次的催情助孕液5份，每份2 mL，按“1.2.2”方法制备样品供试液，以甲醇作空白对照，在270 nm处测定吸光度，计算样品中总黄酮含量。

2 结果与分析

2.1 测定波长

淫羊藿苷波长扫描结果见图1，淫羊藿苷在270 nm处有最大吸收峰，从而确定测定波长为270 nm。

2.2 标准曲线的建立

以淫羊藿苷对照品溶液浓度C（μg/mL）为横坐标，吸光度A为纵坐标做标准曲线，进行线性回归分析，得回归方程为A = 0.036 5C -0.008 2，R2 = 0.999 5。说明淫羊藿苷在1.68～10.08 μg/mL内线性关系良好，结果见图2。

2.3 精密度试验结果

5次测定的吸光度平均值为0.175 04，RSD为0.24%，表明仪器精密度良好。

2.4 稳定性试验结果

9次测定的吸光度平均值为0.184 74，RSD为1.09%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

2.5 重复性试验结果

5份样品的平均含量为1.319 3%，RSD为0.16%，表明该方法重复性良好。

2.6 加样回收率试验结果

加样回收率试验结果见表1。由表1可见，平均回收率为99.29%，RSD为1.20%。表明该方法准确性良好。

2.7 样品总黄酮含量测定结果

催情助孕液中平均总黄酮含量为1.317 9%。结果见表2。

3 小结与讨论

总黄酮是淫羊藿苷的主要有效成分，对免疫系统、心血管系统、神经精神系统、骨骼系统和生殖系统等的疾病均有一定治疗作用[5]，常将淫羊霍苷中总黄酮含量作为评价其质量和提取分离工艺的指标[6]。总黄酮为淫羊藿苷的主要有效成分[7]，淫羊藿苷中总黄酮含量的测定方法多采用紫外分光光度法，以淫羊藿苷为指标测定总黄酮含量的方法操作简便、快速、结果准确，为2010版《中国药典》所载方法[8]。本试验将淫羊藿苷对照品的甲醇溶液在波长190～400 nm进行扫描，结果在270 nm处检测到有最大吸收峰。因此，选择以淫羊藿苷为指标性成分，在270 nm波长处进行了催情助孕液中总黄酮的含量测定。结果表明，淫羊藿苷在1.68～10.08 μg/mL内线性关系良好，试验建立的方法操作快速、简便、重复性和稳定性好，测定结果准确，适用于催情助孕液中总黄酮含量的测定。

参考文献：

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[4] 王东升，张世栋，李世宏，等.正交试验法优化催情助孕液制备工艺[J].中国农学通报，2012，28（29）：75-78.

[5] 陆 乐，徐 洋，蔡 辉.淫羊藿总黄酮研究进展[J].山东中医药大学学报，2013，37（2）：167-170.

[6] 陈肖家，张庆文，季 晖，等.紫外分光光度法和高效液相色谱法测定淫羊藿总黄酮含量的比较研究[J].药物分析杂志，2007， 27（5）：625-630.

[7] 黄秀兰，周亚伟，王 伟. 淫羊藿黄酮类化合物药理研究进展[J].中成药，2005，27（6）：719-721.

[8] 王东升，张世栋，李世宏，等.淫羊藿总黄酮提取方法的比较研

究[J].黑龙江畜牧兽医（科技版），2012（7）：75-77.