花楸果实醇提物抑菌稳定性的实验研究

摘要：本实验主要以金黄色葡萄球菌为指示菌，研究花楸果实醇提物活性成分的稳定性，结果表明花楸果实醇提物分别经温度、酸碱度、紫外处理后只有在酸性条件下具有一定的抑菌活性，碱处理使其抑菌活性消失；温度、紫外照射对其稳定性几乎没有影响。

关键词：花楸；抑菌；稳定性

中图分类号：S574 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2014）-08-22-2

花楸又名臭山槐，为蔷薇科、花楸属乔本植物。小枝粗壮，树皮灰色，奇数羽状复叶，每叶5～8对，叶披针形，复伞房花序，花白色，果实近球形，径0.6～0.8厘米，分桔红色和红色两种。喜生湿润肥沃的酸性或微酸性土壤，散生于溪谷和天然林中，喜光、耐寒、耐阴。花楸一般分布在我国的东北、华北、内蒙古等地区。由于花楸树形美观，春季白花簇簇，多而稠密，秋叶变红艳，红果满树披挂，光彩夺目，经久不落，因此可作为城市、园林绿化的观赏苗木和绿化苗木树种进行培育，花楸果实具有一定的食用和药用价值，并且花楸果实的抑菌效果十分明显。本文对花楸果实的醇提物金黄色葡萄球菌的抑制作用进行研究。

由于传统的防腐剂一般都是化学制品，对人体有一定的伤害。目前，国际上的食品、药品防腐剂正在向天然、无毒的趋势发展。因此，筛选抑菌的天然物质已经越来越热门起来。根据有关报道，花楸果实具有极高的杀菌能力，特别对于金黄色葡萄球菌更加显著，因此利用花楸果实的醇提物制备的防腐剂应用在食品、药品或者各个领域中是可行的。

1 材料与方法

1.1 材料

试验材料采集于牡丹江师范学院，采样时间为 2012年 7～9月，经鉴定为花楸，植物标本保存于牡丹江师范学院生命科学与技术学院微生物实验室。材料用无菌水洗净阴干、粉碎过40目筛，密闭封存备用。

1.2 供试菌种

供试菌种，金黄色葡萄球菌（牡丹江师范学院生命科学学院微生物实验室提供）。菌种用牛肉膏蛋白胨培养基培养。

1.3 试验仪器

RXZ-500C型多段人工气候培养箱、SW-CJ-2FD进化工作台、电子万用炉、ES-215型高压蒸汽灭菌锅。

1.4 95%乙醇提取物的制备

称取 100克花楸果实粉末，加入 500毫升，95%的乙醇，冷浸24小时，55℃～65℃回流提取2次，每次1小时，合并溶剂，回收溶剂，制得浸膏，备用。

1.5 提取物的抑菌活性测定

1.5.1 菌种的活化及菌悬液的制备 从斜面培养基挑取金黄色葡萄球菌菌种，先于35℃～37℃活化 18小时，用玻璃珠打散加至装有 10 毫升的无菌水的试管内，振荡均匀，无菌生理盐水作为对照，调节菌悬液的浓度约为 1×104个。采用无菌移液枪吸取 100微升，上述菌悬液加入到营养琼脂培养基上，并用无菌涂布棒涂布均匀。

1.5.2 不同的温度对抑菌稳定性的影响 将 2克/毫升的花楸果实提取液分别置于40℃、60℃、80℃、100℃的恒温水浴锅中处理 20分钟后备用，另取部分花楸果实提取液于121℃高压蒸汽灭菌20 分钟后备用。用无菌镊子放置4个已灭菌的牛津杯。其中 3 个各加入100微升同一浓度的花楸果实醇提物，另外一个加入100微升无菌生理盐水作为阴性对照。上述操作完成后，将平板于超净工作台中静置20分钟后，置于37℃恒温培养箱内培养24小时，利用十字交叉方法测量抑菌圈直径，结果求平均值，比较抑菌效果。

1.5.3 不同pH对抑菌稳定性的影响 分别用2摩尔/升的 HCl和2摩尔/升NaOH 将花楸果实提取液的pH 调整为 3、5、7、9、11，并放于4℃条件下备用。利用无菌镊子将4个已灭菌的牛津杯放置培养基上。其中3 个各加入100微升相同 pH的花楸果实提取液，作为3 个平行。另外一个作为对照加入100微升未处理花楸果实原提取液。上述操作完成后，将平板于超净工作台中静置20分后，于37℃恒温培养箱中培养 24小时，利用十字交叉法测量抑菌圈直径。

1.5.4 不同紫外照射对抑菌稳定性的影响 将2克/毫升花楸果实提取液在15瓦、50厘米的紫外灯下分别照射10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟。并放于红灯条件下备用。利用无菌镊子将4 个已灭菌的牛津杯放置培养基上。其中3 个各加入100微升相同紫外照射时间的花楸果实提取液，作为3 个平行。另外一个作为对照加入100微升无菌生理盐水。上述操作完成后，将平板于超净工作台黑暗放置20分钟后，于37℃恒温培养箱中培养24小时，仍然利用十字交叉法测量抑菌圈直径。

2 结果与分析

参照NCCLS/CLIS2006标准和中国卫生部消毒规范判断不同诱变剂对花楸果实95%醇提取物的抑菌活性进行测定比较，结果发现经温度、pH、紫外等不同诱变剂的诱变作用不同，花楸果实95%醇提物的抑菌活性有一定的差异。

2.1 温度对花楸果实醇提物抑菌效果的影响

在温度分别为40℃、60℃、80℃、100℃、121℃的条件下处理花楸果实醇提物，以金黄色葡萄酒菌为例，花楸果实提取物的抑菌活性的热稳定性关系如图1所示。

由图1可以看出，花楸果实醇提物经不同温度处理后仍然保持原有的抑菌活性，即使在121℃处理30分钟后仍具有较高的活性，这表明花楸果实醇提物的抑菌活性具有较好的热稳定性。

2.2 pH对花楸果实醇提物抑菌效果的影响

在pH分别为3、5、7、9、11的条件下处理花楸果实醇提物，以金黄色葡萄酒菌为例，花楸果实提取物的抑菌活性的稳定性关系如图2所示。

由图2可以看出，随着pH值的不断升高，花楸果实醇提物对抑菌能力下降。酸性条件下抑菌活性强，且pH在5之后无抑菌活性，可能是提取物经碱处理后使某些抑菌成分与溶液中的碱发生反应，从而使该物质的抑菌性消失。缓冲液本身对供试菌无抑菌活性。

2.3 温度紫外对花楸果实醇提物抑菌效果的影响

在15瓦、50厘米的紫外灯下分别照射10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟。的条件下处理花楸果实醇提物，以金黄色葡萄酒菌为例，花楸果实提取物的抑菌活性的稳定性关系如图3所示

由图3可以看出，随紫外光处理时间的变化，提取物的抑菌活性基本保持不变，由此可见花楸果实醇提物对紫外光具有极高的稳定性。

3 结语

花楸果实来源十分丰富，特别是在黑龙江等地区。本实验对花楸果实醇提物抑菌稳定性进行了研究。结果表明，花楸果实醇提物的抑菌效果随着温度的升高抑菌圈增大，说明在高温的条件下，花楸果实的抑菌效果不受影响，pH对抑菌效果影响不明显，紫外线在30分钟ute到40分钟ute之间抑菌圈最大，效果最明显。

近几年，抗生素药物广泛使用，导致细菌的抗药性日益增强，药物的用量也越来越大，这样不仅在治疗的过程中加大了成本，还会使体内有一定的药物残留。由于中草药是一种天然的药剂，所以近几年人们热衷于对中草药的研究。中草药在现代预防和控制细菌性感染疾病中发挥了积极作用，从中草药筛选抗菌药物用于防治疾病已成为解决抗生素滥用问题的有效途径之一。花楸果实的醇提物含天然植物抗菌活性成分，根据研究表明花楸果实还具有一定的健胃补虚的作用，还可用于清肺止咳、治疗肺结核、哮喘等功效。因此可以通过正确的提取花楸果实的有效成分开发新的抗菌产品，还可以利用花楸果实的抑菌效果不受温度的限制，用于制作食品防腐剂。

本实验仅对花楸果实醇提物抑菌稳定性进行了研究，具体的抑菌机制并没有研究，但对花楸果实进一步的研究以及抑菌活性测定提供了一定的理论依据。

参考文献

[1] 乔君霞，索菲娅，黄罗冬，等. 新疆短星火绒草不同极性提取物抑菌作用研究[D].云南农业大学学报，2013，28 （1）： 83-87.

[2] 凌继华，黄永新.花楸育苗技术[B].安徽农业学报，2010.

[3] Hsieh P C， Mau J L，Huang S H. （2001） Antimicrobial effect of various combinations of plant extracts [J].Food Microbiology， 2001（18）： 35-43.

[4] National Committee For Clinical Laboratory Standards ， Performance Standards for Antimicrobial Susceptivity Testing：Sixteenth Informational Supplement [S].

[5] 中华人民共和国卫生部.消毒技术规范（2002版）[S].

[6] 李树明.50味中药对8种畜禽病原菌抑菌对比研究[J].中兽医学杂志，2000，（4）：5-8.

[7] PAN Y M，LIANG Y， WANG H S， et al. Antioxidant activities of several Chinese medicine herbs [J]. Food Chemistry，2004，88（3）：347-350.

作者简介：赵屹，辽宁师范大学，中级助理研究员，研究方向：生命科学。

2.3 温度紫外对花楸果实醇提物抑菌效果的影响

在15瓦、50厘米的紫外灯下分别照射10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟。的条件下处理花楸果实醇提物，以金黄色葡萄酒菌为例，花楸果实提取物的抑菌活性的稳定性关系如图3所示

由图3可以看出，随紫外光处理时间的变化，提取物的抑菌活性基本保持不变，由此可见花楸果实醇提物对紫外光具有极高的稳定性。

3 结语

花楸果实来源十分丰富，特别是在黑龙江等地区。本实验对花楸果实醇提物抑菌稳定性进行了研究。结果表明，花楸果实醇提物的抑菌效果随着温度的升高抑菌圈增大，说明在高温的条件下，花楸果实的抑菌效果不受影响，pH对抑菌效果影响不明显，紫外线在30分钟ute到40分钟ute之间抑菌圈最大，效果最明显。

近几年，抗生素药物广泛使用，导致细菌的抗药性日益增强，药物的用量也越来越大，这样不仅在治疗的过程中加大了成本，还会使体内有一定的药物残留。由于中草药是一种天然的药剂，所以近几年人们热衷于对中草药的研究。中草药在现代预防和控制细菌性感染疾病中发挥了积极作用，从中草药筛选抗菌药物用于防治疾病已成为解决抗生素滥用问题的有效途径之一。花楸果实的醇提物含天然植物抗菌活性成分，根据研究表明花楸果实还具有一定的健胃补虚的作用，还可用于清肺止咳、治疗肺结核、哮喘等功效。因此可以通过正确的提取花楸果实的有效成分开发新的抗菌产品，还可以利用花楸果实的抑菌效果不受温度的限制，用于制作食品防腐剂。

本实验仅对花楸果实醇提物抑菌稳定性进行了研究，具体的抑菌机制并没有研究，但对花楸果实进一步的研究以及抑菌活性测定提供了一定的理论依据。

参考文献

[1] 乔君霞，索菲娅，黄罗冬，等. 新疆短星火绒草不同极性提取物抑菌作用研究[D].云南农业大学学报，2013，28 （1）： 83-87.

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[6] 李树明.50味中药对8种畜禽病原菌抑菌对比研究[J].中兽医学杂志，2000，（4）：5-8.

[7] PAN Y M，LIANG Y， WANG H S， et al. Antioxidant activities of several Chinese medicine herbs [J]. Food Chemistry，2004，88（3）：347-350.

作者简介：赵屹，辽宁师范大学，中级助理研究员，研究方向：生命科学。

2.3 温度紫外对花楸果实醇提物抑菌效果的影响

在15瓦、50厘米的紫外灯下分别照射10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、50分钟、60分钟。的条件下处理花楸果实醇提物，以金黄色葡萄酒菌为例，花楸果实提取物的抑菌活性的稳定性关系如图3所示

由图3可以看出，随紫外光处理时间的变化，提取物的抑菌活性基本保持不变，由此可见花楸果实醇提物对紫外光具有极高的稳定性。

3 结语

花楸果实来源十分丰富，特别是在黑龙江等地区。本实验对花楸果实醇提物抑菌稳定性进行了研究。结果表明，花楸果实醇提物的抑菌效果随着温度的升高抑菌圈增大，说明在高温的条件下，花楸果实的抑菌效果不受影响，pH对抑菌效果影响不明显，紫外线在30分钟ute到40分钟ute之间抑菌圈最大，效果最明显。

近几年，抗生素药物广泛使用，导致细菌的抗药性日益增强，药物的用量也越来越大，这样不仅在治疗的过程中加大了成本，还会使体内有一定的药物残留。由于中草药是一种天然的药剂，所以近几年人们热衷于对中草药的研究。中草药在现代预防和控制细菌性感染疾病中发挥了积极作用，从中草药筛选抗菌药物用于防治疾病已成为解决抗生素滥用问题的有效途径之一。花楸果实的醇提物含天然植物抗菌活性成分，根据研究表明花楸果实还具有一定的健胃补虚的作用，还可用于清肺止咳、治疗肺结核、哮喘等功效。因此可以通过正确的提取花楸果实的有效成分开发新的抗菌产品，还可以利用花楸果实的抑菌效果不受温度的限制，用于制作食品防腐剂。

本实验仅对花楸果实醇提物抑菌稳定性进行了研究，具体的抑菌机制并没有研究，但对花楸果实进一步的研究以及抑菌活性测定提供了一定的理论依据。

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作者简介：赵屹，辽宁师范大学，中级助理研究员，研究方向：生命科学。