复方参花搽剂的制备工艺及体外抑菌作用研究*

高 云 张典瑞 邵春月

(1.山东大学药学院，山东 济南 250012； 2.泰山医学院附属泰山医院，山东 泰安 271000)

渗出性皮炎、湿疹及手足癣是临床上常见的变态反应性皮肤病，此类疾病病程较长、容易反复，单纯的西医治疗效果不甚满意[1]，属中医辩证“湿热”、“热毒”类型的皮肤疾患，近年发病率呈上升趋势[2]。

复方参花搽剂为我院自制制剂，主要有苦参、金银花、黄柏、白鲜皮、蛇床子、白芷、地肤子、龙胆草等组成，有清热燥湿、抗菌止痒之功效，临床上可用于治疗荨麻疹、湿疹、渗出性皮炎、皮肤瘙痒症、皮癣等多种皮肤病。苦参碱为处方中主要的有效成分之一，本研究采取正交试验法，以苦参碱的含量为指标，优化复方参花搽剂的制备工艺，同时采取K-B纸片扩散法研究其体外抑菌作用，以期为制剂配制的规范化及临床应用的合理性提供科学依据。

1 仪器及试剂

高效液相色谱仪(日产岛津LC20AT)，BP211D型电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，药材(均购自山东省药材公司)，苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号110805-200508)，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

标准菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853各6株，山东省临床检验中心提供。试验菌株变形杆菌6株由本院临床标本分离，鉴定按照NCCLS文件方法进行。游标卡尺，规格(0-150 mm)×0.02 mm，安徽桐城量具厂生产。恒温培养箱，规格GI6-2，美国SHELLAB。

2 方法与结果

2.1 苦参碱含量测定

精密称取苦参碱标准品用流动相配成浓度为10 mg/ml的对照品贮备液。精密量取对照品贮备液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0定容至10 ml。

以含量(X)对峰面积(Y)作回归计算，其相关系数r=0.9997,得到回归方程为Y=2.0007X-0.0007，表明在0.2 ～1 mg/ml范围内线性关系良好。

色谱条件：Econobase C18(5 μm，4.6 mm×150 mm)色谱柱；柱温：28℃；流动相：乙腈-0.1%磷酸(1∶99)；流速：1.0 ml/min；进样量：20 μl；紫外检测波长：210 nm。理论板数按苦参碱峰计不低于5000，主色谱峰与相邻其它色谱峰的分离度不小于2。

精密度实验：对同一样品溶液连续3次进样，以峰面积计算苦参碱的精密度，其RSD分别为2.06%、2.03%及1.94%，RSD均小于3%，说明仪器的精密度良好。

重现性实验：从同一批提取方法平行取样5份，制备得待测溶液，每样品溶液进样3次，取平均值，所得结果RSD(%)为1.98%，表明重现性较好。

稳定性实验：对同一样品溶液每隔2 h进样，连续测定5次，以峰面积计算苦参碱的精密度，其RSD为1.18，结果表明样品在10 h内稳定。

样品测定：以苦参碱为标准品对不同提取方法所得样品液进行了测定。在上述HPLC条件下，样品峰能达到很好分离，保留时间为15.6min左右。见图1～3。

图1 样品HPLC图

图3 空白溶剂图

2.2 提取工艺优选

采用回流法，称取处方中药材共200 g，按实验设计，以提取溶剂用量(A)、煎煮次数(B)、煎煮时间(C)三个因素为考察指标，每个因素选取3个水平进行正交试验，按照L9(34)正交试验设计[3]，采用HPLC法测定提取液中苦参碱的含量，以有效成分含量高低为评价指标优化提取工艺。试验设计因素水平表见表1，正交试验结果见表2，方差分析结果见表3。

表1 各因素水平表

表2 正交试验结果

表3 方差分析

注：F1-0.01(2,4)= 18.0，F1-0.05(2,4)=6.94，F1-0.10(2,4)=4.32

从正交分析结果可以看出：3个因素对苦参碱含量的影响次序为A (加水倍量) > C(煎煮时间) > B (煎煮次数)。其中加水倍量与苦参碱含量提取极显著相关，9种方法平均提取率最高达52.92%，可以确定苦参碱最佳提取方法为A2B3C2，即加8倍量水、煎煮3次、每次煎煮1.5 h。

2.3 复方参花搽剂的制备

处方中8味药加8倍量水，煎煮3次，每次1.5 h，过滤，合并3次滤液，浓缩至相对密度为1.01～1.10、pH值为2.5～5.5的药液，冷沉48 h，过滤，滤液灌装成每瓶250 ml的成品，100℃流通蒸汽灭菌30 min备用。本品为红褐色液体。

2.4 抑菌作用研究

将金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌分别用取菌环致密接种到普通培养基表面，以无菌操作将含复方参花搽剂药液的滤纸片(直径0.4 cm)贴到培养基上，37℃培养48 h观察并测量环直径。同法进行空白对照试验。

由表4结果可见，复方参花搽剂对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌有明显的抑制作用。金黄色葡萄球菌对复方参花搽剂有较强的敏感性，抑菌圈大于19 mm,变形杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌对复方参花搽剂中度敏感。

表4 复方参花搽剂抑菌作用结果

注：-表示无抑菌作用

3 讨 论

复方参花搽剂处方主要药物为苦参，苦参属豆科植物，为中草药植物苦参的根，味苦，性寒，含有苦参碱、氧化苦参碱、槐定碱等多种生物碱[4]，其中苦参碱含量较高。苦参碱的化学结构式为C15H24N20，属四环的噻嗪啶类，分子骨架为2个噻嗪啶的杂体[5]。其药理作用很广，具有清热燥湿、杀虫、抗炎、抗病毒等作用。因此本研究采取以苦参中有效成份苦参碱的含量为考察指标，采取L9(34)正交试验优选提取工艺。最佳工艺为加8倍量水、煎煮3次、每次煎煮1.5 h。

复方参花搽剂对金黄色葡萄球菌、变形杆菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌有明显的抑制作用。临床实践表明，苦参具有清热燥湿、祛风杀虫止痒，用于湿疹、湿疮、皮肤瘙痒等症[6]。金银花清热解毒[7]，为疮疡要药；黄柏、蛇床子、地肤子、龙胆草、白芷等可以加强主药清热燥湿、祛风杀虫之功，共为辅药；全方为伍可用于荨麻疹、湿疹、渗出性皮炎、湿疹、手足癣的治疗。

试验结果表明，该制剂提取工艺合理可行，体外抑菌作用明显，为规范配制制剂及临床应用提供了科学依据。

[1] 朱艳华，郭欣，阎雪莹．清热药在治疗皮肤病方面的应用[J]．中国民族民间医药，2012，21(2): 39-40.

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[6] 战渤玉，李东霞，高明.苦参的现代研进展[J].中医药信息，2009，26(1): 23-25.

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