鸭坦布苏病毒高免卵黄抗体的制备及免疫攻毒保护试验

王领兄 张婕

摘 要：用鸭坦布苏病毒灭活疫苗免疫高产蛋鸡，三次强化免疫后收集所产的高免鸡蛋，制备抗鸭坦布苏病毒卵黄抗体。琼脂扩散试验测定该卵黄抗体的效价达1：64，对鸭坦布苏病毒强毒的攻毒保护率达100 %，为鸭坦布苏病毒病的综合防治提供了一种有效的技术手段和实践参考。

关键词：鸭坦布苏病毒；卵黄抗体；攻毒保护

Yolk Antibody Preparation of Duck TMU Virus and Immunity Protective Test

Wang Lingxiong1，Zhang Jie2

（1. Chengguan Town Animal Husbandry and Veterinary Station，Datong， Qinghai， 810102；

2. Qiaotou Town Animal Husbandry and Veterinary Station， Datong， Qinghai， 810199）

Abstract： Using duck Tembusu virus inactivated vaccine immune laying hens， after many times of immunization collected the hyperimmune eggs and prepared to yolk antibody against duck Tembusu virus. Antibody titer of the egg yolk in agar diffusion test was up to 1：64， and the attack protection rate of duck Tembusu virus reached 100%. The determination provides an effective technical means and practical reference for the integrated control of duck Tembusu virus disease.

Keywords： duck Tembusu virus； yolk antibody； attack protection

鸭坦布苏病毒病（Duck Tembusu Virus Disease，DTVD）是由鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu Virus，DTV）引起的一种急性、烈性传染病，临床上主要以蛋、种鸭的产蛋量骤然大幅下降为主要特征[1]，该病于2010年春季在我国南方养鸭密集地区首次暴发[2，3]，现已呈全国性流行，已成为危害我国养鸭业的重要疾病之一，给国内养鸭业带来了巨大的经济损失[4-7]。该病传播速度快，发病急、发病率高，目前尚无商品化的疫苗和特效治疗药物，给临床预防和治疗带来很大困难，本研究用鸭坦布苏病毒灭活疫苗免疫高产蛋鸡，多次强化免疫后收集所产的高免鸡蛋，制备抗鸭坦布苏病毒卵黄抗体，并进行了卵黄抗体的免疫攻毒保护试验，旨在为鸭坦布苏病毒病的综合防治提供一种新的技术手段和实践参考。

1材料与方法

1.1毒株与试验动物 鸭坦布苏病毒由青海省动物疫控中心兽医实验室分离并保存；鸭胚、健康雏鸭均选自不含鸭坦布苏病毒病母源抗体的鸭群；健康蛋鸡30只，无疫病感染史。

1.2灭活疫苗的制备 将DTV用灭菌生理盐水100倍稀释后接种10日龄鸭胚，收集48～120 h死亡鸭胚的尿囊液，经甲醛溶液灭活后作为水相与白油以2∶3的比例进行乳化，获得油包水型灭活疫苗，4 ℃保存备用。

1.3蛋鸡的免疫 以制备的灭活疫苗免疫健康蛋鸡30只，首次免疫剂量为0.5 mL/只，间隔14 d后进行第二次免疫，免疫剂量为1.0 mL/只。间隔14 d后进行第三次免疫，免疫剂量为1.5 mL/只。3次免疫的免疫途径均为颈背部和胸部皮下多点注射。

1.4 卵黄抗体的制备 第三次免疫10 d后开始收集高免鸡蛋，无菌操作分离蛋清与蛋黄，将高免蛋黄与灭菌生理盐水以1∶2的比例搅拌均匀，加入青、链霉素至终含量为1 000 U/mL，置 4 ℃保存备用。

1.5 抗体效价测定 采用常规琼脂扩散试验方法测定卵黄抗体的抗体效价。

1.6安全检验 将制备的高免卵黄抗体皮下接种健康3日龄雏鸭10只，2.0 mL/只，观察14 d，记录试验雏鸭的食欲、精神状态以及发病死亡情况。

1.7免疫攻毒保护试验 将40只健康7日龄雏鸭随机分成2组，卵黄抗体免疫组20只，对照组20只，免疫组每只雏鸭皮下接种制备的卵黄抗体0.5 mL，24 h后，免疫组和对照组均肌肉注射DTV强毒，隔离饲养，观察14 d。

2结果

2.1 卵黄抗体效价测定结果 采用琼脂扩散试验方法测定卵黄抗体的琼扩抗体效价达1∶64。

2.2安全检验结果 10只雏鸭食欲、精神状态均良好，无任何临床不适表现。

2.3卵黄抗体免疫攻毒保护试验结果 如表1所示，卵黄抗体免疫组的20只鸭免疫卵黄抗体24 h后，攻鸭坦布苏病毒后第3 d有3只鸭出现减食、精神不振、腹泻症状，持续2 d后逐渐恢复正常，未出现死亡鸭只，保护率达100 %，观察期结束后随即挑取10只鸭剖检，均无肉眼可见的病理变化；对照组的20只雏鸭在攻毒后3 d开始出现减食、精神沉郁、腹泻症状，并部分鸭伴有转圈、运动失调等轻度的神经性症状，随后部分鸭陆续出现死亡，死亡鸭剖检可见肝脏肿大、淤血、坏死，脾脏肿大，心肌岀血等病理变化。

3讨论

卵黄抗体以其成本低、产量高、简单快速、安全高效等优点，在动物传染病综合防控中得到了广泛应用，尤其在预防和治疗鸡传染性法氏囊病、鸭病毒性肝炎等家禽急性传染病方面发挥极其重要的作用。鸭坦布苏病毒病是近年来在我国出现的以鸭产蛋骤然大幅下降为主要特征的一种急性、烈性传染病，该病传播速度快、发病急、发病率高，主要临床表现为感染鸭食欲下降直至禁食，同时蛋、种鸭产蛋数量迅速下降直至停产。正处于高产的种、蛋鸭一旦感染鸭坦布苏病毒，产蛋率在短时间内急剧下降，将给鸭场带来巨大的经济损失。由于缺乏特效治疗药物，多数养鸭场只能选用抗病毒药物来治疗鸭坦布苏病毒病，治疗效果并不理想。而采用鸭坦布苏病毒抗原免疫蛋鸡制成的鸭坦布苏病毒高免卵黄抗体，通过被动免疫可使鸭获得坚实的保护力，将是特异性地预防和治疗鸭坦布苏病毒病良好的生物制品。本研究制备的鸡源鸭坦布苏病毒卵黄抗体的琼扩抗体效价达1∶64，为鸭坦布苏病毒病的综合防治提供了一种经济、简易、安全、有效的技术和方法。王友令等[8]通过人工攻毒试验研究表明鸭坦布苏病毒对7日龄雏鸭也有较强的致病性，发病率达100 %，死亡率达80 %，故本研究选用7日龄雏鸭进行人工攻毒试验来观察卵黄抗体对鸭坦布苏病毒的免疫攻毒保护作用，试验结果亦表明鸭坦布苏病毒对未免疫卵黄抗体健康雏鸭的发病率达100 %（20/20），死亡率达85 %（17/20），与王友令等[8]的研究结果存在高度的一致性，但卵黄抗体免疫组的死亡率为0 %（0/20），保护率达100 %（20/20），说明卵黄抗体能够有效保护鸭坦布苏病毒的攻击。总之，本研究制备的鸭坦布苏病毒卵黄抗体可以有效预防和治疗鸭坦布苏病毒病， 为鸭坦布苏病毒病的综合防治提供了一种有效的技术手段和实践参考。 （编辑：何芳）

参考文献：

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