自制酸枣仁加锌合剂对睡眠剥夺小鼠学习记忆能力及其时效性的影响

张红石，崔 淼，闫 力

(长春中医药大学，长春130117)

睡眠剥夺是指由于各种原因使机体在一段时间内不能获得有效睡眠，出现精神、心理、行为等改变的病理状态［1］。长期睡眠剥夺可引起实验动物死亡［2］。睡眠剥夺存在明显的职业倾向，如军人、司机、飞行员、低年资医生、护士以及哺乳期妇女等，这种状态会导致机体的空间记忆学习能力下降［3］。笔者自制酸枣仁加锌合剂，在睡眠剥夺状态出现前对小鼠进行灌胃，观察其在不同时长睡眠剥夺状态时，干预效果是否发生变化，观察自制酸枣仁加锌合剂对小鼠睡眠剥夺学习记忆能力及其时效性的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康昆明种小鼠200只［长春生物制品研究所有限责任公司，CSXK-(吉)2011-0007］，经筛选后(通过各项学习测试获得学习能力者)，选出120只，雌雄各半，体质量18～22 g。

1.2 主要药品和仪器 二氧化钛(批号:20060220，天津福辰);葡萄糖酸锌(批号:12030212，哈药集团);酸枣仁汤液(按人鼠比例生药量1∶8进行煎煮，文火煎煮浓缩100 mL，北京同仁堂);酸枣仁加锌合剂(每100 mL酸枣仁汤剂加锌35.3 mg，即每100 mL酸枣仁汤剂加入100 mL葡萄糖酸锌)。BA-200避暗仪购自香港万科;DT-200小鼠跳台仪购自杭州雷琪;Morris水迷宫视频分析系统购自成都泰盟。

1.3 动物分组及酸枣仁加锌合剂的给予方法 120只小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、实验组4组，各30只，每组又分别分为12、24、36 h组，各10只。各组在分组结束后、睡眠剥夺前进行干预。空白组、模型组清水灌胃，阳性组葡萄糖酸锌灌胃，实验组酸枣仁加锌合剂灌胃，按0.1 mL/10 g给药，共5 d。模型组、阳性组、实验组采用改良多平台睡眠剥夺法［3］进行睡眠剥夺。睡眠剥夺时水温控制在22～23℃，每天持续日光灯照射，排除昼夜明暗交替。模型组、阳性组、实验组中的12、24、36 h组小鼠睡眠剥夺时间分别是12、24、36 h。

1.4 学习记忆能力检测 各组小鼠分别进行Morris水迷宫实验［4］、避暗实验［5］、跳台实验［6］。Morris水迷宫实验中记录小鼠找到平台的时间［上台时间(潜伏期)］和游泳距离(总距离);避暗实验中记录小鼠第1次从明室进入暗室的潜伏期;跳台实验中记录小鼠第1次跳下平台的潜伏期。观察学习记忆能力变化，观察自制酸枣仁加锌合剂对小鼠睡眠剥夺的干预效果及干预时效性。

1.5 统计学方法 采用SPSS16.0统计软件。计量资料以±s表示，数据需经正态分布检验，方差齐性检验用Levene法。多组间差异的显著性分析用单因素方差分析，方差齐时用LSD法。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

各组小鼠学习记忆能力检测结果见表1。

表1 各组小鼠学习记忆能力检测结果比较(±s)

表1 各组小鼠学习记忆能力检测结果比较(±s)

注:与模型组睡眠剥夺同时间比较，*P﹤0.05;与同组12 h及24 h组比较，#P﹤0.05

组别Morris水迷宫实验潜伏期(s)Morris水迷宫实验总距离(cm) 避暗实验潜伏期(s) 跳台实验潜伏期(s)空白组12 h组 83.61±25.61* 1 218.28±225.61* 277.0±436.5* 237.0±39.9*24 h组 84.70±20.47* 1 368.77±318.30* 281.0±46.5* 233.0±44.9*36 h组 85.07±16.86* 1 409.01±162.30* 260.2±44.9* 259.0±18.7*模型组12 h组 108.00±16.86 2 011.94±252.75 200.3±70.4 127.6±20.5 24 h组 112.32±6.48 2 113.16±200.16 202.3±78.4 121.6±18.5 36 h组 115.62±11.98 2 445.47±376.47# 208.0±40.0 132.0±50.2阳性组12 h组 70.56±16.90* 1 573.15±365.30* 245.2±50.6 168.3±51.7 24 h组 77.24±15.92* 1 665.73±518.60* 257.2±50.7* 158.3±50.7 36 h组 78.09±26.48* 1 536.29±412.08* 243.5±62.6* 208.5±47.6*#实验组12 h组 71.72±26.63* 1 446.87±285.01* 260.0±13.4* 192.0±57.2*24 h组 81.85±22.84* 1 502.53±318.21* 268.0±15.5* 182.0±66.2*36 h组 81.26±26.15* 1 407.71±502.23* 256.0±34.5* 179.3±48.7*

3 讨论

目前常用研究抗睡眠剥夺的指标包括:行为学观察［4］、脑电观察［5］、神经递质检测［6］、脑组织细胞学分析［7］、细胞相关因子［8］及蛋白检测等。其中行为学检查是判断睡眠剥夺损害最直接的观察方法［9］。本研究小鼠分别进行Morris水迷宫实验、避暗实验、跳台实验观察学习记忆能力变化。目前国内外常用的干预睡眠剥夺的方法包括:饮食调养［10］、药物治疗［11］、针刺治疗［12，13］。因睡眠剥夺早期，患者临床症状并不明显，所以采用药物治疗者少见，饮食调养是早期改善睡眠剥夺状态的首选方法。

本研究中酸枣仁有养心生津、宁心安神的功效，微量元素锌对睡眠剥夺造成小鼠学习记忆能力下降有保护作用［14］。本实验在中医饮食调养的基础上，自制酸枣仁加锌合剂。利用酸枣仁的食疗作用，在其煎煮后加入葡萄糖酸锌，配成可以代茶饮的汤剂，在中医治未病的指导原则下，在小鼠进行睡眠剥夺前给予药液灌胃，研究酸枣仁加锌合剂对疾病的预防保健作用。实验设计除考虑了酸枣仁加锌合剂对睡眠剥夺小鼠记忆学习能力的影响外，还按睡眠剥夺时间不同进行了对比分析，观察了合剂对睡眠剥夺后改善小鼠记忆学习能力时效的影响。结果表明，酸枣仁加锌合剂可有效地改善由于睡眠剥夺造成的小鼠学习记忆能力下降的状态，其时效性在睡眠剥夺12、24、36 h内存在。其干预效果维持了36 h，具有稳定的时效性。

可见，酸枣仁加锌合剂有效地改善了小鼠睡眠剥夺后的学习记忆能力，从时效学看，这种影响能力在一定时间范围内具有稳定性。但小鼠的快速遗忘周期是48 h［15］，本实验设计在此周期范围内，脱离此周期合剂是否仍会起效，还有待进一步研究。

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