HPLC测定盐酸头孢甲肟含量的方法学验证

史瑞　　　李金花

摘 要：目的 对建立的HPLC法测定盐酸头孢甲肟含量方法，进行方法学验证。方法 仪器：Agilent 1260，色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料的色谱柱，流动相：乙腈-水-冰醋酸（15：45：1），检测波长：254nm，进样量：20μl。结果 线性和范围0.05522mg/ml～0.14678mg/ml，精密度RSD=0.03%，回收率98.4%～101.6%，耐用性对同一批次本品含量测定结果的RSD%为0.81%（n=13）。结论 建立的方法准确、可靠，能够满足实际生产要求。

关键词：盐酸头孢甲肟；HPLC；方法学验证

引言

盐酸头孢甲肟属于第三代头孢菌素，对革兰氏阴性和阳性的需氧菌和厌氧菌均有抗菌作用。生产工艺中常利用HPLC测定盐酸头孢甲肟含量的方法，目前已经建立的方法是：色谱柱十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料的色谱柱，流动相乙腈-水-冰醋酸（15：45：1），检测波长254nm，进样量20μl。

分析步骤：按外标法以峰面积计算供试品中头孢甲肟（C16H17N9O5S3）的含量。

计算公式：

式中：RU：供试品溶液中主峰响应值；RS：对照品溶液中主峰响应值；CS：对照品溶液浓度mg/ml；CU：供试品溶液浓度mg/ml。

对该方法进行方法学验证，证明方法是否准确、可靠，能够满足实际生产要求。

1 仪器与试剂

仪器：天平：Mettler XS205、高效液相色谱：Agilent1260。

试剂：冰醋酸（分析纯、上海市化学试剂一厂）、磷酸（分析纯、天津市科密欧）、乙腈（色谱纯、TEDIA）。

2 实验方法

2.1 进样精密度验证

取盐酸头孢甲肟对照品适量，按照含量测定项下的方法配制对照品溶液，精密量取10？滋l注入液相色谱仪，连续进样3次，计算其峰面积测量值的相对标准偏差。

2.2 回收率验证

取盐酸头孢甲肟对照品25.09mg，置25ml量瓶中，加磷酸盐缓冲液（pH6.6）10ml超声使溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别精密称取对照品20.44mg、20.58mg、20.53mg，置25ml量瓶中，同法操作，作为供试品溶液，分别精密量取对照品溶液和供试品溶液20μl进液相色谱仪，计算回收率。

2.3 线性验证

取盐酸头孢甲肟对照品适量，精密称定，加磷酸盐缓冲液（pH6.8）适量超声使溶解，用流动相稀释至每1ml约含2mg盐酸头孢甲肟的溶液，分别精密量取0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml、0.8ml，用流动相稀释成10ml，摇匀。分别取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标进行线性回归。

3 实验结果

3.1 进样精密度验证结果

主峰峰面积的相对标准偏差不大于2.0%，主峰保留时间的相对标准偏差不大于1.0%，主峰的理论板数符合质量标准规定（结果见表1）。

表1 含量测定系统适用性和进样精密度结果

3.2 回收率验证结果

试验结果表明RSD小于2.0%，且回收率在98.4%～101.6%之间，说明该方法测定样品中头孢甲肟含量回收率较好（结果见表2）。

3.3 线性验证结果

试验结果表明，盐酸头孢甲肟在浓度0.05522mg/ml～0.14678mg /ml范围内与峰面积线性相关性较好（结果见表3，图1）。

表3 盐酸头孢甲肟含量线性试验结果

图1 盐酸头孢甲肟含量线性试验

4 实验结论

综合以上数据，含量进样精密度RSD=0.03%；盐酸头孢甲肟浓度在0.05522mg/ml～0.14678mg/ml范围内，线性相关性较好；回收率试验结果RSD为0.55%小于2.0%，且回收率均在98.4%～101.6%之间，说明该方法测定样品中头孢甲肟含量回收率较好；得出如下结论：建立的方法准确、可靠，能够满足实际生产要求。

5 结束语

中国药典自2000版开始对药品质量标准分析方法验证提出了明确的要求和指导原则，参考国家食品药品监督管理局标准YBH12922006、YBH09262006、日本药典XVI版、《美国药典》35版盐酸头孢甲肟质量标准，其含量测定项下色谱条件基本一致，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水-冰醋酸（15：45：1）为流动相，检测波长254nm。经过方法学的验证证实本方法的可重复性高，线性范围较宽，能够满足日常生产的对产品含量测定的要求；回收率验证体现出了较高的回收效果，能够有效地提该产品投产后的生产效率和经济效益。

参考文献

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