硫辛酸胶囊含量测定及其稳定性

马宏达，胡北，吴琼，崔英宇，史国兵

(沈阳军区总医院药剂科，沈阳 110016)

硫辛酸胶囊含量测定及其稳定性

马宏达，胡北，吴琼，崔英宇，史国兵

(沈阳军区总医院药剂科，沈阳 110016)

目的 建立测定硫辛酸胶囊中硫辛酸含量的反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,并考察其稳定性。方法采用RP-HPLC法测定硫辛酸的含量。采用Diamonsil C18色谱柱,流动相为乙腈-0.15%磷酸(38∶62),检测波长为220 nm。采用影响因素实验、加速实验和长期实验考察硫辛酸胶囊稳定性。结果硫辛酸浓度在5～500 μg·mL-1范围内线性关系良好;平均回收率99.23%,精密度、稳定性等均符合测定要求。硫辛酸对光照较敏感,在市售包装下,稳定性较好。结论RP-HPLC法操作简单,结果准确,重复性好,可用于硫辛酸的含量测定。硫辛酸在避光、室温条件下,能较长时间保存。

硫辛酸；含量测定；稳定性；色谱法,高效液相,反相

硫辛酸(alpha lipoic acid)的化学名为(±)[3-(1, 2-二硫杂环戊烷)]-戊酸(1,2-dithiolane-3-pentanoic acid.),其氧化性和还原性可以互相转化[1]。硫辛酸具备一般抗氧化剂所不能及的抗氧化性[2],它作为线粒体中丙酮酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶的辅酶,在细胞能量代谢中发挥重要作用[3-4]。硫辛酸能有效控制血糖,消除氧自由基,螯合金属离子,再生其他抗氧化药,是强效多功能氧化应激抑制药,在改善人的体质,抗氧化,以及糖代谢、糖尿病并发症和其他多种疾病治疗方面备受关注[5]。文献报道采用电化学检测法[6]、脉冲安培检测法[7]或荧光检测法[8]等方法进行测定。笔者在本研究中采用反相高效液相色谱法,建立了硫辛酸胶囊的含量测定方法,该方法操作简单,结果准确,重复性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters高效液相色谱系统(包括600泵, 2487检测器),KQ3200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司),AUW120D型分析天平(岛津公司)。稳定性实验箱(重庆市永生实验仪器厂)。

1.2 试药 硫辛酸对照品(Sigma公司,批号:100588-200501),乙腈(色谱纯,Fisher公司),水为双蒸水,其他试剂为化学纯。硫辛酸胶囊为沈阳军区总医院制剂研发室提供(批号:20110901,20110902,20110903)。

2 方法与结果

2.1 含量测定方法的建立

2.1.1 溶液的配制 对照品溶液的制备:取硫辛酸对照品5 mg精密称定,置于100 mL棕色量瓶,加入适量乙腈∶水(1∶1)溶液超声溶解,取出后放至室温,定容,滤过,得到50 μg·mL-1对照品溶液。

供试品溶液的制备:取硫辛酸胶囊20粒,倒出内容物混合均匀。取内容物适量(约相当于硫辛酸5 mg)精密称定,置于100 mL棕色量瓶,加入适量乙腈∶水(1∶1)溶液超声溶解,取出后放至室温,定容,滤过,取续滤液得到硫辛酸供试品溶液。

2.1.2 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18(5 μm,200× 4.6 mm,Dikma公司);流动相:乙腈∶0.15%磷酸= 38∶62;流速:1 mL·min-1;进样量:20 μL;柱温:25℃。

2.1.3 检测波长的选择 取硫辛酸对照品适量,溶于适量乙腈∶水(1∶1)溶液,稀释至适宜浓度后,在波长200～400 nm范围内扫描测定。根据扫描结果可知,硫辛酸无显著最大吸收波长,因此选用220 nm作为检测波长。

2.1.4 专属性实验 分别取硫辛酸对照品溶液、供试品溶液、不含硫辛酸的阴性溶液各20 μL,注入HPLC系统,色谱图见图1。由色谱图可知,硫辛酸在此色谱条件下峰形良好,保留时间约12.3 min,与其他色谱峰分离良好,表明处方中其他辅料成分对硫辛酸的测定无干扰,该色谱方法专属性较强。

图1 3种溶液高效液相色谱图A.空白辅料;B.对照品溶液;C.样品溶液;1.硫辛酸Fig.1 HPLC chromatogram of lipoic acidA.negative sample;B.reference substance;C.sample;1. 1ipoic acid

2.1.5 线性关系考察 取硫辛酸对照品适量精密称定,置于棕色量瓶,加入适量乙腈∶水(1∶1)溶液,超声5 min溶解,定容,配制硫辛酸对照品溶液,使其浓度为5,10,20,50,100,200和500 μg·mL-1。按上述色谱条件注入HPLC系统,记录色谱图。以峰面积(A)为纵坐标,硫辛酸浓度(C)为横坐标,进行线性回归,得到标准曲线方程为A=7 176.686C-5 053.425,r= 0.999 9。由此可知,硫辛酸在5～500 μg·mL-1范围内,其浓度与峰面积线性关系良好。

2.1.6 检测限 取硫辛酸对照品溶液作为母液,采用乙腈∶水(1∶1)溶液逐级倍比稀释,将稀释后的溶液注入高效液相色谱系统,记录色谱图,当信噪比为3时,计算该色谱条件下的检测限。经计算,检测限为16.6 ng。

2.1.7 精密度实验 取50 μg·mL-1硫辛酸对照品溶液,连续进样6次,记录峰面积,计算日内精密度,连续进样3 d,计算日间精密度。实验结果显示,硫辛酸日内精密度0.59%,日间精密度0.74%,说明该方法精密度良好。

2.1.8 稳定性实验 取同一供试品溶液,每隔2 h进样一次,分别于0,2,4,6,8,10,12 h进样,记录硫辛酸色谱峰面积。实验结果显示,稳定性RSD为0.59%,表明硫辛酸供试品溶液12 h内稳定性良好。

2.1.9 重复性实验 取同一批硫辛酸胶囊,制备供试品溶液,共6份,按上述色谱方法测定,外标法计算硫辛酸含量。实验结果显示,硫辛酸在样品平均含量为标示量的99.92%,重现性RSD为0.79%,表明该色谱方法重复性良好。

2.1.10 回收率实验 取已知含量的硫辛酸胶囊50粒,倒出内容物混合均匀。取内容物适量精密称定,共9份,再分别加入硫辛酸样品的80%、100%、120%的硫辛酸对照品,每样各3份,按“2.1.1”项方法制备成供试溶液。分别取20 μL,外标法测定硫辛酸含量,计算样品回收率,结果见表1。实验结果显示,方法平均回收率99.23%,RSD为1.64%,此方法回收率良好。

表1 加样回收率实验结果Tab.1 Results of recovery test mg,n=9

2.1.11 样品测定 取硫辛酸胶囊20粒,倒出内容物混合均匀。取内容物适量(相当于硫辛酸5 mg)精密称定,置于100 mL棕色量瓶,加入适量乙腈∶水(1∶1)溶液超声溶解,取出后放至室温,定容,滤过,取续滤液得到硫辛酸供试品溶液。取供试品溶液20 μL,注入高效液相色谱系统,记录峰面积,外标法计算硫辛酸含量。共测定了3批硫辛酸胶囊,硫辛酸含量分别为标示量的99.92%,99.17%和100.84%,均符合质量标准要求。

2.2 稳定性考察

2.2.1 影响因素实验 高温实验:取适量硫辛酸胶囊,置于培养皿,置于稳定性实验箱,在40℃下放置10 d,分别于放置后5,10 d取样,观察内容物性状变化,并测定硫辛酸含量变化。

高湿实验:取适量硫辛酸胶囊,置于培养皿,置于稳定性实验箱,分别在相对湿度92.5%环境中下放置10 d,分别于放置后5,10 d取样,观察内容物性状变化及吸湿增重,并测定硫辛酸含量变化。

强光实验:取适量硫辛酸胶囊放置于培养皿,置于稳定性实验箱,在相当于照度(4 000±500)Lx环境中下放置10 d,分别于放置后5,10 d取样,观察内容物性状变化,并测定硫辛酸含量变化。结果见表2。

表2 影响因素实验结果Tab.2 Results of test on influential factor

实验结果表明,高温(40℃)、高湿对硫辛酸的稳定性基本没有影响,强光照射对硫辛酸的性状及含量有较大影响。提示硫辛酸制剂应放置在阴凉处,避光保存。

2.2.2 加速实验 取市售包装硫辛酸胶囊3批,置于(40±2)℃、相对湿度(75±5)%恒温恒湿箱中,分别在0,1,2,3,6个月,取样测定有关质量指标。实验结果表明,本品经加速实验考察6个月,各项指标与实验前比较,内容物性状和硫辛酸含量均无变化,符合质量标准规定。

2.2.3 长期实验 取市售包装硫辛酸胶囊3批,置于(25±2)℃、相对湿度(60±10)%恒温恒湿箱中,分别在0,3,6个月,取样测定有关质量指标。实验结果表明,本品经室温留样观察法考察6个月,各项指标与实验前比较,内容物性状和硫辛酸含量均无变化,符合质量标准规定。

3 讨论

笔者本实验还考察了流动相种类,有机相分别考察了甲醇、乙腈、甲醇-乙腈,水相分别考察了磷酸、磷酸二氢钾溶液、磷酸二氢钠溶液等,对硫辛酸色谱峰的影响。结果表明,乙腈∶0.15%磷酸作为流动相,硫辛酸的分离效果较好,拖尾因子较小,峰型良好,柱效较高,同时液相系统配制较为简便。

本研究采用反相高效液相色谱法,建立的硫辛酸胶囊含量的测定方法。具有操作简单,重复性好的优点,具有较强的专属性和准确性,适合于硫辛酸的含量测定。

笔者也考察了60℃下硫辛酸的高温影响因素实验,但硫辛酸的熔点为60～61℃,硫辛酸在稳定性实验箱中融化,因此本研究高温实验选择在40℃下检测。高温(40℃)、高湿对硫辛酸基本没有影响。但在强光照射下含量明显下降并伴有颜色改变,说明硫辛酸对强光照射比较敏感,最好避光放置。并且经过加速实验及长期实验考察,结果表明硫辛酸胶囊稳定性良好。

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DOI 10.3870/yydb.2014.03.027

Content Determination of Alpha Lipoic Acid Capsule and Its Stability Study

MA Hong-da,HU Bei,WU Qiong,CUI Ying-yu,SHI Guo-bing
(Department of Pharmacy,General Hospital of Shenyang Military Area Command,Shenyang 110016,China)

Objective To establish RP-HPLC method for content determination of alpha lipoic acid tablets and investigate its stability.MethodsThe RP-HPLC method was performed on an iamonsil C18column with a mobile phase of acetonitrile-0.15%phosphoric acid(38∶62).The detection wavelenth was set at 220 nm.The stability was investigated by stressing testing,accelerated testing and long-term testing.ResultsThe linearity range of pidotimod was 5-500 μg·mL-1,and the average recovery was 99.23%.Alpha lipoic acid is light sensitive,but stable in the marketed packaging.The precision and stability conform to the requirements.ConclusionThe RP-HPLC method is simple,accurate and reproducible,and can be used to determine the content of alpha lipoic acid.Alpha lipoic acid can be stored under the room temperature by avoiding sunlight.

Alpha lipoic acid;Content determination;Stability;RP-HPLC

R977;R927.2

A

1004-0781(2014)03-0367-03

2013-06-06

2013-08-01

马宏达(1976-),男,辽宁新民人,主管药师,博士,研究方向:药剂学。电话:024-28851751,E-mail：mahongdamahongda@163.com。

史国兵(1966-),男,山东文登人,主任药师,博士,研究方向:临床药学。电话:024-28856262,E-mail：sysgb@126.com。