番茄茎基腐病致病菌的鉴定

吴丽敏 安心

摘 要：番茄是农业生产中的主要蔬菜品种之一。20世纪80年代以来，随着保护地番茄种植面积的扩大，番茄茎基腐病的发生有加重趋势，影响保护地番茄种植业的持续发展。本文通过对番茄茎基腐病病害致病菌的分离鉴定，为以后了解研究该致病菌的更详尽的特性及病害的防治奠定基础。通过柯赫氏法则可以证明番茄茎基腐病的致病菌为茄丝核菌。

关键词：番茄茎基腐，病原菌，茄丝核菌

近年来，随着辽宁省保护地番茄种植面积的增加，同时由于保护地集约化，湿度大、轮作等特定的栽培条件，导致番茄茎基腐病有逐年加重趋势，严重影响番茄的产量和品质。如若疏于防治，番茄茎基腐病将会成为影响辽宁保护地番茄生产的重要病害之一。番茄茎基腐病在幼苗期及成株期均可产生危害，但主要危害即将定植的大苗和定植后番茄的茎基部或地下部位、侧根。通过使用柯赫氏法则的四步来证明鉴定出番茄茎基腐病致病菌，了解熟悉其特性，来进行更好的防治。

1 病害的检视

将采集来的病害标本用刀片轻轻刮取病害部位的菌丝体，置于滴有浮载剂的载玻片上，加盖玻片在显微镜下检视，观察到立枯丝核菌，初步认定为其为番茄茎基腐病的致病菌。

2 病菌的分离纯化

2.1 常规组织分离

取番茄茎基部感病组织，用无菌水将病部表面清洗干净，然后从病健交界处切取0.5cm×0.5cm的病组织，在75%酒精中浸1～3s后，再在0.1%升汞溶液中处理30s，而后用灭菌水换洗3次，将其移置PDA平板上25℃培养。待PDA平板上分离的病菌生长出菌落后，切取菌落前缘的菌丝移入PDA斜面上25℃恒温培养，获得病菌纯培养。

2.2 病原菌观察

采取病原菌直接挑取法，在光学显微镜下直接检视，进行病原菌形态描述。

人工培养条件下，约15天左右，菌丝彼此交织纠集形成褐色或黑褐色的菌核，球形、长粒状或不规则形，大小2.3mm×1.5mm；菌核表面粗糙，内外层颜色较一致，结构疏松。菌丝初期无色，老熟后渐为褐色，平均直径为9.6μm；菌丝分支多呈直角，近分支处形成隔膜，分支基部呈缢缩状，染色结果表明该菌菌丝细胞为多核。

由病原菌在PDA培养基上形成的菌落观察，前期生长呈无色纤细菌丝群，后逐渐变成褐色，并形成菌核。病原菌在PDA培养基上生长较快，3天菌落直径可达80μm，菌落初期无色，后逐渐变成褐色；菌落平整，无气生菌丝，边缘长满菌丝；后期可形成比较繁茂的气生菌丝；约经15天后，菌丝逐渐纠结形成褐色菌核。

3 病害接种

将分离纯化后的病原菌接种于番茄植株上，保湿培养，观察植株受害症状。

番茄茎基部经室内接种，25℃保湿培养6～8天后，茎基部开始产生淡褐色病斑，证明在25℃条件下，病原菌侵染叶片的潜育期一般为6～8天；由此也表明病原菌对寄主的致病力较强，侵染速度较快。此为病害防治适期的确定提供了一定理论依据。番茄茎基腐病病菌在相对湿度100%、温度为25℃的条件下，4～5天可侵入寄主植物，6～8天表现症状。直接涂抹接种和针刺接种2种方法均可使番茄茎基部发病，说明该菌有直接侵染的能力，伤口对病原菌侵入更为有利。

番茄茎基腐病主要危害植株较大幼苗及定植后番茄植株的茎基部，有时可延及地下主、侧根。发病部位初呈暗褐色，继之环绕茎基部或根茎处扩展，引起皮层腐烂，影响水分和营养输导；导致地上部叶片变黄。果实膨大后，严重发病植株因养分供不应求逐渐萎蔫枯死。发病后期植株病部表面常形成深褐色、大小不一的菌核；有时感病植株干腐的髓腔内可形成黑褐色、颗粒状菌核。

经人工接种证病结果表明，番茄茎基部表现出相似的症状，接种5天后开始表现症状，初为暗黄色，后绕茎基或根茎扩展，最后呈腐烂状态。

从发病部位经组织分离后再次获得病原菌，经镜检形态特征鉴定，并与原接种体菌丝融合测定，结果与原接种体形成融合，确定为相同的病原菌，因此证实所分离的原接种菌株为番茄茎基腐病的致病菌。

4 病害再分离

采用常规组织分离法对发病组织进行病菌分离，培养后于显微镜下观察，鉴定病原菌的分类归属。

经参考资料和鉴定，本试验采集分离的番茄茎基腐病的病原菌最后确认为茄丝核菌（Rhizoctonia solani），其分类归属为真菌界，无性型真菌，丝孢纲，无孢目，丝核菌属。

该菌在PDA、PSA、理查琼脂培养基、番茄煎汁琼脂培养基、燕麦片琼脂培养基、番茄燕麦琼脂培养基、2%水琼脂培养基上均能生长，最适培养基是燕麦片琼脂培养基；理查培养基利于菌核形成，且产生菌核数量最多。

该菌在以PDA基础培养基，将PDA中的葡萄糖换成蔗糖、果糖、甘露糖、木糖、半乳糖、麦芽糖、乳糖、淀粉、糊精制成的培养基上均能生长，在淀粉和糊精培养基上，菌丝生长速度显著较快，以淀粉和麦芽糖制成的培养基产生菌核数量最多，菌核萌发，以麦芽糖最适宜；不同碳源对菌核萌发的影响差异显著，以麦芽糖中菌核的萌发率最高，葡萄糖，蔗糖与甘露糖次之，而山梨糖的利用率最低。

该菌在氮源硝酸钾、硝酸钠、磷酸二氢铵、蛋白胨培养基上生长较快，最适为硝酸钠，在氮源脲的条件下5天菌落未见扩展，从菌核产生数量来看，最适氮源为蛋白胨，而在硝酸钾、磷酸二氢铵、氯化铵、脲、精氨酸培养基上，20天后均未产生菌核；不同氮源对菌核萌发的影响差异显著，以蛋白胨中菌核的萌发率最高，硝酸钠和硝酸钾次之，而脲的利用率最低。

该菌在2～32℃温度范围内均可生长，适宜范围为20～25℃，最适为20℃；考察菌核产生数量，以15℃产生量最多，5～30℃温度范围内菌核均能萌发，20℃最适菌核萌发。

该菌在pH值3～10的范围内均可生长，最适宜菌丝生长的pH值5～7，在pH7条件下，菌核产生数量最多，pH6最适合菌核萌发。

无论是黑暗条件还是光照条件，在菌丝生长方面和菌核产生数量方面，均无明显差异。

菌丝高致死温度为51℃、10分钟；菌核高致死温度为60℃、10分钟。

研究表明立枯丝核菌对不同碳、氮源的利用效率差异很大，说明该菌尽管是腐生性很强的菌，但是其营养利用的选择性还是相当明显的。该菌生长适温在20～25℃之间，在一定程度上反应了该病辽宁地区发生的原因。

参考文献

[1] 陈京元，霍宪起，蔡三山，等.湿地松猝倒病病原鉴定及其生物学特性的观察.华中农业大学学报.2006，25（2）：128-131.

[2] 徐志刚编.普通植物病理学（第三版）.中国农业出版社，2002.

[3] 刘志恒，杨红，薛春生编.植物真菌病害研究技术，2009.

[4] 刘志恒，杨红编著.植物真菌病害研究技术实验指导书，2009.

[5] 农业植物病理学（北方本），2007.北京：中国农业出版社.

[6] 方中达.植病研究方法，1998.北京：北京农业出版社.

[7] 陆家云编.植物病原真菌学.中国农业出版社，2002，60-63.

[8] 番茄茎基腐病的发生及防治.山东农药信息，2005，（9）：32.

[9] 宋晓彤.番茄茎基腐病的识别与防治.植物保护，2003，（7）：19.

[10] 孙广宁，宗兆锋，编.植物病理学实验技术.中国农业出版社，2002，206-210.

[11] 王振学，刘计刚.番茄茎基腐病的诊断与防治.西北园艺，2009，（4）：35-36.

[12] 徐作廷，李林，李长松，等.番茄茎腐病病原鉴定及防治研究.植物病理学报，2004，34（3）：286-288.

[13] 张万，庞启勇.番茄茎基腐病的发生与防治.西北园艺，2007，（9）：31

[14] 张天晓，张志光.立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kühn的研究. 湖南师范大学自然科学学报，1986，9（1）：76-82.

[15] 周晓燕，冯小燕，朱训永，等. 2009. 番茄主要病害的识别与防治. 现代农业科技，（14）：164.

[16] Anderson NA.1982.The genetics and Pathology of Rhizoctonia solani. Ann Rve Phytopathol，20：329-374.

[17] Baek J M，Howell C R，Kenerley C M.Curr.Genet，1999，35（1）：41-50.

番茄红素的奇特功效

前列腺癌症是导致男性死亡的第二大杀手。除了年龄因素、遗传因素、环境因素外，饮食因素也是前列腺癌症发展的一项很重要的因素。研究发现，那些大量食用番茄制品的人，前列腺癌的发病几率较低；食用番茄及番茄制品也可降低前列腺癌症加重的风险。番茄红素是类胡萝卜素之一，是在人体血浆中发现的主要的类胡萝卜素之一。番茄红素使西红柿和其他食品变成红色的，使人体易于吸收，同时是一种天然色素，由植物和微生物合成，动物无法合成这种物质。它是最强有效的抗氧化剂之一，抗氧化能力是β-胡萝卜素的2倍，是维生素E的10倍。

在哈佛医学院进行的一项研究，用调查问卷评估他们日常摄入各种类胡萝卜素。在统计中只有番茄红素的大消耗量降低风险效果显著，高达21%。在含有类胡萝卜素的46种食物中，能与降低患前列腺癌风险有关的食品3/4都含有番茄红素——番茄酱、番茄。每周食用10个以上番茄及番茄制品，按照摄入82%的番茄红素计算，比那些每周食用少于1.5个的人，能够降低患前列腺癌的风险35%。

（摘自《生活时报》）