山茱萸不同部位提取物对α—葡萄糖苷酶的抑制作用

摘要[目的]测定山茱萸果肉和果核提取物对α葡萄糖苷酶的抑制作用，为山茱萸资源的藥用开发提供参考。[方法]采用乙醇和水分别对山茱萸果肉和果核进行提取，并测定其对α葡萄糖苷酶的抑制作用。[结果]山茱萸果核提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制率分别为20倍醇提99.23%、30倍醇提98.96%、40倍醇提99.29%、20倍水提99.36%、30倍水提99.32%、40倍水提99.17%。山茱萸果肉提取物对α葡萄糖苷酶的抑制率分别为20倍醇提52.10%、30倍醇提60.77%、40倍醇提21.67%、20倍水提11.88%、30倍水提0.53%、40倍水提1.59%。[结论]山茱萸不同部位的水提取物和乙醇提取物对α葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，其中山茱萸果核部位对α葡萄糖苷酶的抑制作用最为显著，其抑制率可高达99%以上，可见山茱萸果核中含有丰富的抑制α葡萄糖苷酶活性的物质，可作为药用资源予以开发利用。

关键词山茱萸；α葡萄糖苷酶；抑制作用

中图分类号S567文献标识码A文章编号0517-6611（2014）23-07741-02

作者简介张夙夙（1993- ），女，山东营口人，本科生，专业：生物技术。

收稿日期20140703山茱萸（Cornus officinalis Sieb.et Zucc.）别名蜀枣、鼠矢、鸡足、山萸肉、实枣儿、枣皮、萸肉等，原植物为山茱木属落叶小乔木[1]。我国河南、浙江、陕西、山西、安徽、四川等地均有分布和种植[2-3]。其性味酸、涩，微温，归肝、肾经，是中医临床常用的名贵传统抗衰老药物之一[4]。已有研究表明，山茱萸主要具有免疫调节、降血糖、抗氧化及抗癌等作用[5]。山茱萸常出现在中药降血糖的组方中，目前的研究表明山茱萸的水提取物、乙醇提取物及其具体成分苷类、鞣质、糖蛋白、多糖、有机酸等均有降血糖的作用[6-7]。该试验采用乙醇和水分别对山茱萸果肉和果核进行提取，并测定其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用，进而反应山茱萸的降血糖作用。

1材料与方法

1.1试验材料试验所用的山茱萸来自陕西佛坪。将采摘的山茱萸果实洗净晾干，果肉和果核分离并分别粉碎备用。试验试剂主要包括乙醇、α葡萄糖苷酶、对硝基苯酚αD葡萄糖苷（PNPG）、K3HPO4、K3HPO4·3H2O等，主要仪器包括超声仪、抽滤泵、抽滤瓶、布氏漏斗、试管、滤纸、96孔板、玻璃棒、水浴锅、离心管、移液枪、酶标仪等。

1.2样品制备分别精密称取1 g山茱萸果核和果肉，加入20 ml 70%乙醇，于37 ℃下超声提取30 min，抽滤，定容至20 ml。用乙醇稀释为20、30和40倍的体系作为样品溶液。分别精密称取1 g山茱萸果核和果肉，加入20 ml蒸馏水，于37 ℃下超声提取30 min，抽滤，定容至20 ml。用水稀释为20、30和40倍的体系作为样品溶液。

以醇提山茱萸果肉为例说明稀释倍数，稀释20倍为50 μl醇提样品+950 μl 70%乙醇，稀释30倍为30 μl醇提样品+870 μl 70%乙醇，稀释40倍为25 μl醇提样品+975 μl 70%乙醇。

1.3测定酶抑制率

1.3.196孔板的加样。在96孔板中依次加样，其中样品对照组为样品溶液8 μl+磷酸钾缓冲液150 μl，样品测定组为样品溶液8 μl+3 U/ml α-葡萄糖苷酶15 μl+磷酸钾缓冲液150 μl，对照组为3 U/ml α-葡萄糖苷酶15 μl + 磷酸钾缓冲液150 μl，空白对照组为磷酸钾缓冲液150 μl。以果肉对α-葡萄糖苷酶抑制作用的测定为例，A1、A3和A5为果肉醇提取物的样品对照组，A2、A4和A6为果肉醇提物的样品测定组，其中A1和A2加的样品溶液为果肉的20倍醇提取物，A3和A4加的样品溶液为果肉的30倍醇提取物，A5和A6加的样品溶液为果肉的40倍醇提取物；A7、A9和A11为果肉水提取物的样品对照组，A8、A10和A12为果肉水提取物的样品测定组，其中A7和A8加的样品溶液为果肉的20倍水提取物，A9和A10加的样品溶液为果肉的30倍水提取物，A11和A12加的样品溶液为果肉的40倍水提取物；B和C两行分别是A的重复试验，E和F两行分别是D的重复试验（）。

1.3.2光密度的测定。37 ℃恒温水浴15 min后，对照组和样品测定组分别加入10 mmol/L的PNPG 30 μl，37 ℃恒温反应15 min后，样品对照组、样品测定组、对照组和空白对照组分别加入浓度为0.2 mol/L的Na2CO3溶液40 μl，利用酶标仪于405 nm波长下测定光密度（OD）。

1.3.3酶抑制率的计算。根据该试验方法按公式计算样品的抑制率，即样品的百分抑制率I（%）=[1-（c-d）/（a-b）]×100%，式中，a、b、c、d分别为对照组、空白对照组、样品测定组、样品对照组的OD值。

2结果与分析

从山茱萸不同部位提取物对葡萄糖苷酶的抑制率（）可以看出，山茱萸果核提取物对α葡萄糖苷酶的抑制率分别为20倍醇提99.23%、30倍醇提98.96%、40倍醇提9929%，20倍水提9936%、30倍水提99.32%、40倍水提9917%；山茱萸果肉提取物对α葡萄糖苷酶的抑制率分别为20倍醇提52.10%、30倍醇提60.77%、40倍醇提21.67%，20倍水提11.88%、30倍水提0.53%、40倍水提1.59%。可见，山茱萸果核提取物对α葡萄糖苷酶的抑制率明显高于山茱萸果肉提取物对α葡萄糖苷酶的抑制率；其中对于山茱萸果肉有效成分的提取，20倍醇提和30倍醇提的效果较好，水提的效果并不理想；而对于山茱萸果核有效成分的提取，水提和醇提的效率均很高，基本维持在99%以上。该研究结果表明，山茱萸不同部位的水提取物和乙醇提取物对α葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，其中山茱萸果核部位对α-葡萄糖苷酶的抑制作用最为显著，其抑制率可高达99%以上，可见山茱萸果核中含有丰富的抑制α葡萄糖苷酶活性的物质，可作为药用资源予以开发利用。

96孔板的加样顺序

山茱萸不同部位提取物对葡萄糖苷酶的抑制率%

提取物果肉20倍30倍40倍果核20倍30倍40倍乙醇提取物52.1060.7721.6799.2398.9699.29水提取物11.880.531.5999.3699.3299.17

3结论

采用乙醇和水分别对山茱萸果肉和果核进行提取，测定山茱萸果肉和果核提取物对α葡萄糖苷酶的抑制作用，进而反应山茱萸的降血糖作用。研究结果表明，山茱萸果核提取物对α葡萄糖苷酶的抑制率明显高于山茱萸果肉提取物对α葡萄糖苷酶的抑制率；其中对于山茱萸果肉有效成分的提取，20倍醇提和30倍醇提的效果较好，水提的效果并不理想；而对于山茱萸果核有效成分的提取，水提和醇提的效率均很高。可见，山茱萸不同部位的水提取物和乙醇提取物对α葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，其中山茱萸果核部位对α葡萄糖苷酶的抑制作用最为显著，其抑制率可高达99%以上，说明山茱萸果核中含有丰富的抑制α-葡萄糖苷酶活性的物质，可作为药用资源予以开发利用，为山茱萸资源的药用开发提供参考。

参考文献

[1] 周京华，李春生，李电东.山茱萸有效化学成分的研究进展[J].中国新药杂志，2001，10（11）：808-812.

[2] 叔小燕，侯大斌，阮期平.山茱萸的研究进展[J].中国药业，2007，16（10）：60-62.

[3] 张聪，金德庄.山茱萸的研究进展[J].上海医药，2008，29（10）：464-467.

[4] 袁菊丽，姜红波.山茱萸的主要化学成分及药理作用[J].化学与生物工程，2011，28（5）：7-9.

[5] 于淼，王晓先.山茱萸的药理作用研究进展[J].东南国防医药，2010，12（3）：240-243.

[6] 李慧敏，康杰芳.山茱萸降血糖作用研究进展[J].中药材，2012，35（9）：1527-1530.

[7] 李旭炯，郑天珍.中药及其有效成分降血糖机制的研究进展[J].兰州大学学报，2006，32（4）：81-84.