金樱子饮片HPCE指纹图谱研究

胡 莹

(江苏省中医院，江苏 南京 210019)



金樱子饮片HPCE指纹图谱研究

胡 莹

(江苏省中医院，江苏 南京 210019)

目的：初步建立金樱子饮片的HPCE指纹图谱分析方法，分析比较金樱子及金樱子炮制品的指纹图谱。方法：采用高效毛细管电泳法，以三萜类作为参照物，测定金樱子及金樱子炮制品的指纹图谱，并进行模糊聚类法分析并评价其相似度。结果：初步建立了以9个共有峰为特征指纹信息的金樱子饮片HPCE指纹图谱；少数金樱子饮片的指纹图谱有一定差异，生品与炮制品指纹图谱中的共有峰相对峰面积差异显著。结论：采用高效毛细管电泳法测定金樱子指纹图谱准确性高，具有较好的重复性，可作为金樱子饮片质量的评价依据。

金樱子；高效毛细管电泳检测法；指纹图谱

金樱子(RosaLaevigataMichx)系蔷薇科蔷薇属，一般为野生蔓性灌木植物，其分布较为广泛，通常生长在田边、山野以及溪畔灌丛等海拔不高于1 600m的地区。金樱子果实中含有三萜类、黄酮类、多糖类、维生素C、B1、B2以及胡萝卜素、矿物质、脂肪酸和氨基酸等活性成分[1-2]。《本草纲目》中记载金樱子性酸、涩、平、无毒，可脾泻下痢、止小便利、涩精气，久服令人耐寒轻身、补血益精。现代药理学研究表明，金樱子对烧烫伤、皮肤肿瘤、神经性头痛、神经衰弱等都具有很好的疗效[3-4]，其还具有抗肿瘤、抗氧化[5-6]、抗病毒、降糖降脂等药理学作用[7]。中药质量评估方法多种多样，毛细管电泳技术是新型分析技术，其特点是效率高、速度快且具有较高的灵敏度，适用范围较为广泛。因此，本研究采用高效毛细管电泳法测定金樱子及其炮制品指纹图谱，以期为规范金樱子饮片市场及确保其内在质量的均一性和稳定性提供参考依据。

1 仪器与试剂

旋转蒸发仪(RotavaporR-3型)购自瑞士BUCHI公司；高效毛细管电泳仪(G1600-AX型)购自美国Agilent公司，并配有自动进样器以及惠普化学工作站和二极管阵列检测器(DAD)等；超声波清洗器(KQ-500E型)购自昆山市超声仪器有限公司； pH计(pHS-3C型)购自上海康仪仪器有限公司。

磷酸二氢钠为分析纯，购自南京化学试剂一厂；硼砂、氢氧化钠为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；甲醇、盐酸、无水乙醇、乙酸均为分析纯，购自上海化学试剂有限公司；乙腈为HPLC级，购自德国Merck试剂公司；实验过程中缓冲溶液及供试品溶液配制所用水均为重蒸馏水。

三萜类对照品购自中国食品药品检定研究院(批号110873-201052)，生金樱子购自当地药店，金樱子提取物为自制。

梓醇(批号：110456-201007)、桃叶珊瑚苷(批号：112545-200942)、栀子苷(批号： 111358-200853)、肉桂酸(批号：112534-201037)购自中国食品药品检定研究院；毛蕊花糖苷购于上海永叶生物科技有限公司。

将不同批次的金樱子样品进行编号，分别为R1-R11。R1-R5为生金樱子，R6-R9为熟金樱子，R10、R11为金樱子的加工炮制品。所有样品均经鉴定教研室鉴定为金樱子新鲜或干燥的果实，或生金樱子的加工炮制品。

2 方法

在进行实验前用浓度为0.1mmol/L的氢氧化钠溶液清洗毛细管，然后在加压的情况下分别使用样品溶液、蒸馏水和运行缓冲液对毛细管进行冲洗5、10、5min。将样品溶液加入到样品管中，按照下述条件进行测定：样品管为未涂渍标准熔融石英毛细管(64.5cm×75μm，有效长度56cm，Agilent 科技有限公司)，运行缓冲液中为40mmol/L硼砂，pH8.6的10mmol/L磷酸二氢钠-10%甲醇，检测波长为254nm，分离电压为20kV，进样压力为5kPa×6s，毛细管温度为20℃。每测定一个样品后，都要使用0.1mmol/LNaOH、蒸馏水、缓冲液对毛细管进行冲洗并平衡3、5、5min。平衡和冲洗所用溶液在使用前均需经0.22μm 滤膜过滤，并超声脱气。测定所有供试品HPCE色谱，叠加后见图1。

图1 金樱子HPCE指纹图谱叠加

比较金樱子样品R1-R11的HPCE 色谱，分析各色谱峰的重叠率，以金樱子标准品标定的10个共有峰作为指纹图谱的特征峰，比较各样品共有峰相对峰面积大小。

3 结果

对各样品指纹图谱的重叠率进行分析，划定基准线后，结果显示，R1与R2～R11指纹图谱的重叠率分别为84.38%、85.63%、86.27%、87.37%、86.04%、85.16%、86.05%、85.96%、85.12%、85.78%。生金樱子与金樱子炮制品的指纹图谱重叠率为73.53%，以生金樱子为基准，炮制金樱子与其的相似度为0.749。

4 讨论

本研究初步建立了金樱子饮片HPCE指纹图谱，不同批次的金樱子饮片指纹图谱有一定差异，生品与炮制品指纹图谱中的共有峰相对峰面积亦不相同。综上所述，采用高效毛细管电泳法测定金樱子指纹图谱准确性高，具有较好的重复性，可作为金樱子饮片质量的评价依据。

[1] 何洪英.金樱子生理功能及其保健食品研究进展[J].饮料工业,2001,4(3):33-35.

[2] 肖凯军,刘晓红.金樱子果实的化学成分及其应用[J].现代食品与药品杂志,2006,16(4):1-3.

[3] 江苏新医学院.中药大字典[M].上册.上海:上海人民出版社,1977：1406-1408.

[4] 闵运江,刘文中,陈乃富.皖西大别山区金樱子野生资源储备量的调查研究[J].生物学杂志,2001,18(2):26-28.

[5] 彭梅,张振东,杨娟.14种多糖对小鼠S180肉瘤抑制活性筛选[J].山地农业生物学报,2011,30(1):56-59.

[6] 冯承恩,田素英.金樱根多糖的制备及其体内抗肿瘤作用初探[J].中国实验方剂学杂志,2011,17(6):209-212.

[7] 吴玉兰,曹运长.中药金樱子的化学成分及其药理作用研究进展[J].微量元素与健康研究,2012,29(1):53-56.

(责任编辑：尹晨茹)

2014-05-23

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1673-2197(2014)18-0022-01