新疆石河子地区猪场呼吸与繁殖障碍综合征免疫抗体水平检测与分析

王礼伟 夏小伟 屈勇刚* 王苇 杨亚东 杨一鸣 梁晏 杨蓓

（1石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003；2新疆生产建设兵团第八师石河子总场北泉镇兽医站，新疆石河子 832011；3新疆生产建设兵团第八师石河子疾病预防控制中心，新疆石河子 832000）

新疆石河子地区猪场呼吸与繁殖障碍综合征免疫抗体水平检测与分析

王礼伟1夏小伟2屈勇刚1*王苇1杨亚东1杨一鸣1梁晏3杨蓓1

（1石河子大学动物科技学院，新疆石河子 832003；2新疆生产建设兵团第八师石河子总场北泉镇兽医站，新疆石河子 832011；3新疆生产建设兵团第八师石河子疾病预防控制中心，新疆石河子 832000）

为了解新疆石河子地区猪呼吸与繁殖障碍综合征（PRRS）免疫抗体水平及其消长的规律，采集周边不同地区13个猪场共726份血清，采用间接ELISA方法检测PRRS免疫抗体水平并进行分析。结果显示，该地区PRRS免疫抗体阳性率平均为87.33%，免疫抗体阳性率超过80%的猪场占全部猪场的76.92%，同时，母猪、种公猪、育肥猪免疫抗体的整体水平均超过85%，而仔猪的免疫抗体水平较低，仅为71.11%。结果表明当地应用的PRRS疫苗的免疫原性较好，免疫效果确实；仔猪免疫抗体水平较低的具体原因尚不清楚。该结果可为进一步了解石河子周边地区猪场PRRS免疫抗体的现状，制定合理的治疗措施和免疫程序提供参考。

猪呼吸与繁殖障碍综合征；抗体水平；ELISA；阳性率

猪繁殖与呼吸障碍综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS），又称猪蓝耳病，是由PRRS病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV）所引起的一种高度接触性传染病，主要以母猪的繁殖障碍和各年龄段仔猪的呼吸道疾病为主要特征。1990年，该病相继在德国、荷兰、西班牙等地暴发流行。1992年国际兽医局（OIE）将其列为B类疫病，也是我国规定的二类动物疫病。1993年在我国部分地区暴发流行，随后中国农业科学院哈尔滨兽医研究所从病猪体内分离到该病毒，确定了猪繁殖与呼吸障碍综合征在我国的存在[1]。由于该病的传染性强、传播迅速、危害广泛，给我国的畜牧业造成了巨大的经济损失[2]。

宋刚华等[3]对新疆库车县部分猪场蓝耳病的血清抗体调查研究表明，库车县全县的蓝耳病血清抗体阳性合格率仅为74.4%，存在一定的隐患。为进一步了解石河子地区蓝耳病免疫抗体水平的现状，采集石河子周边不同地区猪场、不同类别猪群的血样，通过间接ELISA检测方法检测PRRS免疫抗体水平并进行分析，可为猪场制定合理有效的治疗措施及免疫程序提供参考。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品来源

2013年10月至2014年1月期间，采集石河子周边13个猪场（母猪存栏量在400头及以上的2个、100～400头的猪场7个、100头以下的4个）不同类别的猪血清共726份。其中，母猪血清254份、种公猪血清110份、仔猪血清135份、保育猪血清227份（根据猪场猪群的实际数量，按照接近10%的比例进行采集）。根据猪群的日龄不同，进行前腔或耳缘静脉采血，每头猪采集血液2～5 mL，室温静置30～60分钟。待血清析出以后，吸取1 mL血清于1.5 mL EP管中，如果血液凝固不良，可以4000转/分钟离心10分钟，收集上清液。收集的血清应清亮、无溶血现象。将盛有血清的EP管放置于-20℃冰箱保存备用。采集的样品编号要与猪的耳号对应，以便于后期有针对性地提供合理有效的治疗措施。

1.1.2 材料和仪器

猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒（武汉科前生物制品有限责任公司，批号：130911）、兽用一次性采血盛血器5 mL(浙江民生医药器材有限公司)、8道微量移液枪（美国GILSON公司）、自动酶标仪（美国BioTek公司）、恒温培养箱（天津东泥沽设备仪器厂）、平板震荡仪、1.5 mL EP管及一次性枪头若干。

1.2 试验方法

1.2.1 间接ELISA方法

根据试剂盒的操作步骤，对待检血清进行一定倍比稀释，同时洗涤抗原包被板。将稀释好的血清按照对应的量加入到洗涤好的抗原包被板中，同时设定阴阳对照组，均匀震荡后，置于37℃温浴30分钟。然后弃去抗原包被板中的液体，对抗原包被板进行洗涤。再在每孔中加入羊抗猪酶标二抗，置于37℃温浴30分钟，随后弃掉废液，再次洗涤。将洗涤好的抗原包被板每孔加入底物A、底物B，混匀，室温避光显色10分钟。最后，每孔加入终止液。在10分钟内，用酶标仪在630 nm波长下对样品的OD值进行测定，根据OD值的大小，判定样品血清抗体的水平。

1.2.2 结果判定

试验成立的条件是阳性对照孔OD值的均值≥0.7，阴性对照孔OD值的均值＜0.3。

根据酶标仪测定OD值的大小，利用office软件进行KQ值的计算。KQ值=样品OD值×100/阳性对照平均值。若KQ值≥20，判定为猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性；若KQ值＜20，判定为猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阴性。

1.2.3 统计分析

利用office软件对试验数据进行统计并分析。

2 试验结果

2.1 各个猪场PRRS免疫抗体水平ELISA检测结果

2.3 两组不良反应发生率比较 A组患儿中出现了腹泻8例，皮疹7例，不良反应发生率为30.00%，B组患儿中出现了皮疹、腹泻各1例，不良反应发生率为4.00%。B组患儿的不良反应发生率显著低于A组，差异有统计学意义(χ2=11.970，P<0.05)。

由表1可知，A～M这13个猪场之间的免疫抗体水平存在较大的差异，猪场免疫抗体阳性率最高的可达到100%，最低的为55.00%，免疫抗体阳性率达到80%以上的有10个猪场，占全部猪场的76.92%。初步统计，石河子周边地区猪场PRRS免疫抗体阳性率平均为87.33%，样品KQ值均值为56.64。由抗体水平的变异系数可知各个猪场PRRS免疫抗体水平的离散程度，13个猪场PRRS抗体水平的变异系数范围在0.15～0.84，数据整体比较平稳。

表1 13个猪场PRRS免疫抗体水平ELISA检测结果

2.2 各个类别猪群PRRS免疫抗体水平ELISA检测结果

由表2可知，不同猪群之间的免疫抗体水平也存在较大的差异，母猪的免疫抗体水平最高，达到94.88%，其次为种公猪的88.18%，育肥猪的88.11%，三者免疫抗体的整体水平均超过85%，而仔猪的免疫抗体水平最低，仅为71.11%。

3 分析与讨论

3.1 猪群免疫抗体阳性率整体较高

对石河子周边地区13个猪场血清中PRRS抗体水平的检测结果表明，PRRS免疫抗体阳性率整体较高，最高的猪场阳性率已达到100%，最低的猪场阳性率也达到了72.09%，说明目前应用的PRRS疫苗的免疫原性较好，免疫抗体产生迅速、高效，达到了猪场免疫预防的目的，抗体的平均水平均达到了农业部《2012年国家动物疫病强制免疫计划》规定的抗体合格率在70%以上的要求[4]。同时，与王伟丞等[5]对贵州部分猪场免疫猪群中PRRS血清抗体水平的检测结果相比，本研究结果中石河子地区PRRS血清抗体水平整体偏高，表明该地区PRRS的免疫程序整体良好。但是，也有部分猪场的抗体水平低于80%，应当引起高度重视。鉴于该病的高度传染性，从业人员应加强控制力度，制定治疗措施及调整免疫程序。

3.2 不同类别猪群抗体阳性率存在较大差异

表2 3类猪群PRRS免疫抗体水平ELISA检测结果

3.3 科学合理使用疫苗

疫苗免疫是猪场疾病防治的重要途径之一，目前，国内外已经研制出弱毒苗和灭活苗。弱毒苗的临床应用效果更佳，但是弱毒苗存在着一定的散毒和返祖现象，因此，从业人员应当根据自己猪场的实际情况选择疫苗，切忌盲目跟风[6]。通过对石河子周边地区猪场免疫抗体水平的分析，一些抗体水平较低的猪场，我们应当加强疫苗免疫；针对仔猪抗体水平低下的情况，我们可以通过提高母源抗体水平来保护刚出生的仔猪，在仔猪母源抗体消失前进行首免，母源抗体消失后进行二免；对种公猪和妊娠母猪，应慎重使用弱毒苗。

尽管该地区PRRS免疫抗体水平整体较好，但仍有一些规模猪场的抗体水平并不理想。因此需要提高猪场的管理水平和疾病的防范意识，做到防微杜渐，从源头上杜绝疫病的入侵。

[1] 谢英,单天锡.猪繁殖与呼吸综合征研究进展[J].中国兽医杂志,2001,37(1):29-32．

[2] 权中会,阴明亮,权凤英,等.我国猪繁殖障碍性疾病的流行状况和综合防制[J].畜禽业,2003(4):7-9．

[3] 宋刚华,陈创夫.新疆库车县猪繁殖障碍性疾病血清学调查与分析[J].当代畜牧,2013(8):83-86．

[4] 刘志勇,韩庆安,刘乃强,等.规模养猪场主要疫病免疫效果评估模型建立[J].中国兽医杂志,2011(7):88-90．

[5] 王伟丞,曾智勇,刘志杰.贵州省几种猪繁殖障碍性疫病抗体水平检测[J].贵州农业学报,2013,41(5):118-120．

[6] 马兴树,朱美霞,韩改英,等.冀南地区3种猪病毒血清抗体的检测与分析[J].中国畜牧兽医,2011,38(1):204-205．

S858.28

A

1673-4645(2014)06-0046-03

2014-04-24

王礼伟（1989-），男，江苏淮安人，硕士研究生，主要从事动物传染病诊断与防治工作

*通讯作者：屈勇刚（1971-），男，陕西人，副教授，主要从事重要人兽共患病致病机理研究，E-mail:quyonggang@shzu.edu.cn