高效液相色谱法测定替硝唑片的溶出度

北京市大兴区药品检验所（102600）苗立红

本文采用高效液相色谱法，通过高效液相色谱色谱法与中国药典规定的检验方法比较，证明结果准确可靠，操作简便。

1 仪器与试药

岛津LC—20AT高效液相色谱仪；赛多利斯精密天平 CP225D;智能药物溶出仪（ D-800LS）.替硝唑对照品（中国食品药品检定研究院批号100336-200703）；替硝唑片（批号1211093）规格0.5g；甲醇为色谱纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂（4.6mm×150mm，50μm）；以0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值至3.5）—甲醇（80∶20）为流动相，检测波长310nm，柱温30℃，流速1.0ml/min。

2.2 溶液的配制

2.2.1 对照品溶液的配制 精密称取替硝唑对照品12.85mg，置100ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.2.2 供试品溶液的配制 按《中国药典》2010版二部(附录XC第一法)，以盐酸溶液（9→1000）（素片以水）900ml为溶出介质，（因本品为素片固采用水为溶出介质），转速为每分钟100转，依法操作，经30分钟时，取溶液滤过（0.45μm微孔滤膜），精密量取续滤液2ml置10ml容量瓶中，限度为标示量的80%。

2.3 线性关系考察 精密称取替硝唑对照品15.0mg，置25ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密量取1.0ml，1.5ml，2.0ml，2.5ml，3.0ml置10ml的容量瓶中，加流动项稀释至刻度，配成系列对照品溶液，按上述色谱条件进样测定峰面积。峰面积分别为2672544，3933403，5373301，6681360，7819256，以峰面积Y对浓度X绘制标准曲线，得回归方程Y=43471X-79420，R=0.9986.替硝唑浓度在60～180μg/ml范围内，线性良好。

2.4 精密度试验 取对照品溶液20μl，连续进样五针（n=5）记录色谱图，其峰面积为5364694，5365990，5370833，5365122，5364142，平均峰面积为5366156。RSD为0.05%。结果表明，此方法精密度良好。

2.5 稳定性试验 取对照品溶液分别于0,2,4，6,12,24h进样1次，测定其峰面积为5365069,5372318，5372648，5372197，5364427，5364442平均峰面积为5368517。RSD为0.1%（n=6）。结果表明，替硝唑在24h内稳定性良好。

2.6 加样回收试验 取已知含量的替硝唑片样品3份，加入不同量的替硝唑对照品分别加入900ml溶出介质，超声使其溶解，滤过（0.45μm微孔滤膜），取续滤液20μl，注入色谱仪，记录色谱峰图，按外标法计算回收率，得回收率99.28%；RSD为0.3%。结果表明本方法回收率良好。

2.7 高效液相色谱法与紫外分光光度法测定结果比较 取样品二批次(批号1206042，1211093)按供试品溶液制备方法进行操作，采用《中国药典》2010年版二部收载的紫外分光光度法，分别为89.0%,88.3%。

3 讨论

本文建立高效液相色谱法测定替硝唑片的溶出度，专属性好，准确度高。在310nm处无杂质干扰，主峰吸收也很强。与药典方法测定结果无明显差异，可用于替硝唑片的溶出度测定。