禽病的实验室检查方法及程序

王 君

(辽宁省海城市牌楼动物卫生监督所,辽宁海城 114207)

禽病的实验室检查方法及程序

王 君

(辽宁省海城市牌楼动物卫生监督所,辽宁海城 114207)

1 细菌培养

如果判定待检禽的大体病变有必要进行细菌检查，则可从内脏上那些未暴露的表面取样。如已发生污染，就用加热的刮刀或其他铁器烧烙器官表面，然后插入无菌接种环。注意不要把组织烧烙过度。比较好的做法是无菌采取大块组织样品，置于灭菌培养皿内送交微生物学实验室，在清洁的环境里进行初代培养。

2 呼吸道病毒分离

如怀疑有呼吸道疾病，最好进行病毒培养或禽体传代。可用消毒剪刀和镊子无菌采取有完整截面的气管下段、支气管和肺的上部，放入消毒乳钵磨碎，或装入平皿暂时贮存。可无菌采集其他组织（如气囊）加到上述样品里，或者放进其他无菌容器中分开检查。采集的气管此时便可剪开，如有渗出物，也可加到前面收集的材料里或存放在另外的小瓶中。各种实质器官初代病毒分离可以采用相似的程序。

3 沙门氏菌培养

应该检查其他所有内脏器官的异常，如小脓肿、颜色变化、肿胀和变脆等。如有异常，应在剪开肠道前采集病变组织样品，放到适当的固体或液体培养基中，一旦打开肠道，肠道内容物肯定会污染其他器官。如怀疑有沙门氏菌感染，可用消毒镊子和剪子选取一些肠段，直接放进消毒乳钵研磨或装入消毒平皿准备以后培养。常规检查时，只取包括回肠下段、盲肠近段和盲肠“扁桃体”及大肠近端的一节，并在无菌状态下研磨以制备接种物。肠道的其他区段或者其他内脏器官的组织可加到胃肠道收集物中，或者分开培养。另外，可用消毒棉拭子从露出的胃肠壁取样进行沙门氏菌培养。

4 大体剖检

在完成必要的培养之后，应对所有的组织进行全面的检查，检查肝脏、脾脏和肾脏是否有肿大。肿大肝的明显标志是边缘变圆。肠道主要检查炎症、渗出物、寄生虫、异物、功能异常、肿瘤和脓肿。此时，还可检查各种神经、骨结构、骨髓状况以及关节。对于坐骨神经的检查，可剪去大腿内侧的肌肉使之暴露。位于体腔内的坐骨神经丛被肾脏掩盖着，用解剖刀的钝端刮去肾组织可很好地暴露该神经丛。臂神经丛的神经很容易在胸腔入口的两侧找到，须查有无肿大。应对整个迷走神经进行检查，以防忽略了小段的肿胀。

用骨钳切断骨时的难易程度是判断骨骼状况的一个指征。应触诊肋骨软骨的交界处，检查有无肿胀（“串珠状”）。纵切长骨骨骺，检查有无异常的钙化过程。弯曲和对折测定胫跗骨或跖骨的竖硬度，可以检查有无营养缺乏症。健康的骨骼在折断时发出喀嚓的声响。缺乏维生素D或矿物质的鸡，其骨中矿物质严重减少，以至任凭弯曲到什么角度都不断裂。

关节如有渗出物，可在拔毛后用热烙铁烧烙局部皮肤，再用消毒解剖刀切开，然后用灭菌接种环或棉拭子采取关节渗出物。可用同样的方法采取并检查副鼻窦的渗出物。

5 脑的暴露和检查

由于各层脑膜在有些地方与骨骼黏附得很紧，不易把脑组织完整地取出来。在大多数情况下，可采取以下的操作方法快速取出和检查脑组织。在寰枕交界处分离头部和下颌。烧烙切面并去掉过多的疏松组织。剥离颅骨和上颌的皮肤并把它向前翻，在此位置上用一只手捏住，如果取出的脑组织的一部分要做动物接种、病毒分离或真菌或细菌培养，以下步骤必须使用灭菌器具。

捏住位于头两侧的通向颅腔的骨头，用无菌的有两个粗钳口的骨钳或大外科剪的端部，从枕骨大孔开始，向前从两侧向位于颅腔前缘的中点剪开。取下这片剪掉的颅骨，整个脑组织便暴露出来了。

如一部分脑组织要用于培养或动物接种（例如疑似有禽脑脊髓炎病毒），另一部分用于病理组织学检查（如维生素E缺乏），可用锋利的外科刀片沿中线将脑组织由前到后切开，然后小心地从一个脑半球上切断神经和联系，同时将头部翻过来，当与其他部分完全脱离时，将这一半脑组织浸入盛有福尔马林的容器中。另一半脑组织可用锋利的灭菌弯剪取下（不必考虑保持组织结构的问题），放入平皿或灭菌的器皿中或乳钵里。注意别用接触了福尔马林的器具污染要分离病毒的脑组织。这两个半脑也可按相反的顺序取出。如果要用整个脑组织来做切片或培养，操作要谨慎。如只用于切片，也可原位固定，然后取出。大块脑组织应进行纵切，以便固定液能很好地渗透进去。

6 镜检

对特定组织制成切片后，可以镜检以便进一步确定检查的线索。①球虫：在剪开肠道之前，先注意观察浆膜下层。用肠道各段黏膜刮取物和盲肠内容物制成湿封片，直接在显微镜下检查悬浮的卵囊和裂殖子以及上皮细胞内发育阶段（组织阶段）。对于其他原虫的检查，可采集感染组织制备湿封片，若有必要，可加少许温热生理盐水提供液体，在显微镜下检查六鞭虫、组织滴虫和毛滴虫等。②毛细线虫和蛔虫幼虫：采集黏膜渗出物和黏膜深部的刮取物，在2个厚玻片之间压成一薄层。在强光或低倍放大镜下检查有无寄生虫。放大后，寻找雌性毛细线虫里具有两极的柠檬形卵子。③真菌：取病变部刮取物制成湿封片，加20%氢氧化钠或氢氧化钾。不时加热消化，持续15min或更长时间，在高倍镜下镜检霉菌菌丝。④弯曲菌：在暗视野或相差显微镜下检查新鲜胆汁的湿封片，只有阳性结果才有意义。⑤菌血症和血液寄生虫：制备新鲜的湿封片，最好用柠檬酸处理过的禽血，在明视野和暗视野显微镜下检查活的微生物。制备新鲜血涂片，在空气中干燥，用姬姆萨染色、革兰氏染色、瑞氏染色或其他方法染色。⑥渗出液：如怀疑有传染性鼻炎，取清亮鼻涕或鼻窦渗出物制成薄涂片，用姬姆萨染色、革兰氏染色、美蓝染色或其他方法染色。接种适当培养基或易感雏鸡，以分离病原。

王君（1980-），女，兽医师，本科。