HPLC测定参红补血颗粒中红景天苷的含量

初洪波，仇志凯，吴 迪，位 鸿，于秀华，段 青，黄晓巍*

（1.长春中医药大学，长春 130117;2.白城市医院，吉林白城 137000;3.中国中医科学院，北京 100700）

HPLC测定参红补血颗粒中红景天苷的含量

初洪波1，仇志凯1，吴 迪2，位 鸿1，于秀华1，段 青3，黄晓巍1*

（1.长春中医药大学，长春 130117;2.白城市医院，吉林白城 137000;3.中国中医科学院，北京 100700）

目的 利用高效液相色谱法测定参红补血颗粒中红景天苷的含量。方法 色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为甲醇∶水（15∶85），检测器为紫外检测器，检测波长为275 nm。结果 HPLC测定红景天苷在0.478～9.560 μg范围内呈良好的线性关系，回收率为97.74%，RSD为1.42%。结论 高效液相色谱法测定含量方法具有专属性强，重复性好，无明显干扰等特点，可作为参红补血颗粒的含量测定方法。

参红补血颗粒;红景天苷;高效液相色谱法;含量测定

中医血虚证是由失血过多、脾胃虚弱、血液生化之源不足或因瘀血阻滞新血不生等原因所致的血液不足或血液营养功能低下，脏腑组织器官失养的病理状态，临床以面色苍白或萎黄、唇甲色淡、头晕眼花、手足发麻等为主要表现的一组证候。见于现代医学中的再生障碍性贫血，肿瘤放化疗后的贫血以及慢性消耗性疾病等造血功能障碍性疾病［1-3］。参红补血颗粒由红景天、红参、黄精、白术、麦冬组成，有益气滋阴、补血活血的功效，是在中医理论指导下经多年临床实践总结的经方，对血虚证治疗有明显的疗效［4］。本研究采用高效液相法建立参红补血颗粒中红景天苷含量测定方法［5-6］，确定其质量标准，保证临床药效。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-2010A型高效液相色谱仪（日本岛津），CLASS-VP工作站;KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;CP225D型双量程电子分析天平（德国Sartoris公司）;Lambda 25型紫外可见分光光度计（美国PE公司）。

1.2 试药 红景天苷对照品（批号110774-200206），购自中国食品药品检定研究院;参红补血颗粒（批号:20130901，20130902，20130903，均由长春中医药大学附属医院中医药制剂中心生产提供）;甲醇为色谱纯;水为超纯水;其他试剂皆为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，岛津 Wondasil C18（150 mm ×4.6 mm，5 μm），以甲醇-水（15∶85）为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为275 nm，柱温为25℃，进样量为10 μL，理论塔板数按红景天苷峰计算应不低于2 000。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取红景天苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备 取参红补血颗粒适量，研细，取粉末（过三号筛）约0.5 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加甲醇10 mL，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除红景天外的其他药材按照制备工艺依法制得缺红景天的阴性对照样品。按“2.2.2”项下方法操作，制备红景天阴性对照溶液，按照“2.1”项下的色谱条件进行试验，所得阴性对照色谱图中，在与供试品色谱图中红景天苷峰相同保留时间处无任何色谱峰出现，表明处方中其他药材对红景天苷的含量测定无影响。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密吸取“2.2.1”项下红景天苷对照品溶液 1，2，5，10，15，20 μL，注入高效液相色谱仪，依法测定，以测得峰面积为纵坐标，以红景天苷对照品进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。得回归方程Y=317 490.98X+651 4.09（r=0.999 97），结果表明红景天苷在 0.478～9.560 μg范围内，呈良好的线性关系。

2.3.2 精密度考察 精密吸取“2.2.1”项下红景天苷对照品溶液10 μL，“2.2.2”项下供试品溶液10 μL，分别注入高效液相色谱仪，连续重复进样6次，依法测定，记录峰面值，结果表明:对照品溶液和供试品溶液测定的RSD分别为1.65%，2.24%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性考察 精密吸取“2.2.1”项下红景天苷对照品溶液10 μL，“2.2.2”项下供试品溶液10 μL，分别于 0，2，4，8，12，24 h，依法测定，记录峰面积值，结果表明:对照品溶液和供试品溶液在24 h内测定结果RSD分别为2.50%，2.35%（n=6），表明红景天苷的稳定性良好，24 h内测定结果可靠。

2.3.4 重现性考察 精密称取同一批次的样品（批号20130901）6分，分别按“2.2.2”项下方法制备，分别精密吸取10 μL，注入高效液相色谱仪，依法独立测定，计算样品含量，结果:平均含量为2.36 mg/g，RSD为1.85%（n=6），表明该方法的重现性良好。

2.3.5 加样回收率试验 取已知含量的供试品（批号20130901，含2.36 mg/g）6分，每分0.40 g，精密称定。分别精密加入红景天苷对照品溶液（浓度为0.478 mg/mL）2 mL，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定，计算回收率，结果表明，平均回收率为97.74%，RSD为1.42%（n=6），结果表明该方法的回收率较好，准确度高。

2.3.6 样品含量测定 按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，平行测定3批参红补血颗粒中红景天苷的含量。结果显示，3批样品中红景天苷含量分别为2.32，2.28，2.32 mg/g，平均含量为 2.30 mg/g。

3 结论

3.1 流动相的选择 《中国药典》［7］“红景天”项下收载的流动相为甲醇-水（15∶85），按此法操作，红景天苷出峰的保留时间为20 min，分离效果良好，故选为本法的流动相。

3.2 测定波长选择 取红景天苷对照品加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，经紫外可见分光光度计在200～400 nm间进行扫描，测得最大吸收波长为274.94 nm，结果与《中国药典》“红景天”项下收载的检测波长275 nm相符合，故选择检测波长为275 nm。

3.3 供试品溶液制备方法的选择 对超声提取［8］和回流提取工艺方法［9］进行了比较，分别选择超声提取30 min、回流提取1 h进行研究，以红景天苷含量作为考察指标，结果表明，超声提取30 min比回流提取1 h的含量高，故选择超声提取30 min作为供试品溶液制备方法。

3.4 制剂中红景天苷含量限度的规定 依据3批样品的平均含量，下浮20%，制定参红补血颗粒的含量限度，规定本品含有红景天苷不得低于1.84 mg/g。

4 结论

方中君药为红景天，故在对制剂提取工艺的研究基础上，建立了以高效液相色谱法测定参红补血颗粒中红景天苷含量的方法，该方法专属性好，在精密度、稳定性、重现性、回收率等方面均符合要求，适合测定红景天苷的含量，本标准可以作为参红补血颗粒质量控制方法。

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［4］黄晓巍，初洪波，位鸿，等.正交试验法优选参红补血颗粒提取工艺［J］.吉林中医药，2012，32（11）:1152-1153.

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［7］中华人民共和国药典委员会.中国药典［M］.北京:化学工业出版社，2009:144.

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［9］曾庆华，王竹君，李燕.响应面法优化热回流提取红景天苷工艺［J］.安徽农业科学，2013，41（1）:309-313.

Using HPLC to determine the content of salidroside in Shenhong Buxue Granule

CHU Hongbo1，QIU Zhikai1，WU Di2，WEI Hong1，YU Xiuhua1，DUAN Qing3，HUANG Xiaowei1*
（1.Changchun University of Chinese Traditional Medicine，Changchun 130117，China;2.Baicheng Hospital，Baicheng 137000，Jilin Province，China;3.China Academy of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100700，China）

ObjectiveUsing high performance liquid chromatography to determine the content of salidroside in Shenhong Buxue Granule.Method Octadecylsilane bonded silica is used as a filler of the chromatographic column with mobile phase as Methanol-water（15:85）and the UV detector with detect wavelength to be 275 nm is used.Result The sample quantity have good linear relationship in the range of 0.478 ～9.560 μg，and the average recovery was 97.74%，RSD=1.42%.ConclusionThe high performance liquid chromatography has strong specificity，good repeatability with no significant interference.So it can be used to determine the content of Shenhong Buxue Granule.

Shenhong Buxue Granule;salidroside;HPLC;content determination

R285.1

A

2095－6258（2014）05－0815－03

10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.020

吉林省科技发展计划项目（20110903）。

初洪波（1973－），男，硕士，助教。研究方向:中药化学。

黄晓巍，女，主任药师，硕士研究生导师，电话:0431-86142281，电子信箱:1594800074@163.com。

2014－06－01）