5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性研究

李俊华

河北省廊坊市妇幼保健中心妇产科，河北廊坊065000

5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性研究

李俊华

河北省廊坊市妇幼保健中心妇产科，河北廊坊065000

目的探究与分析5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因多态性与妊娠期高血压疾病的相关性。方法选取2013年6月～2014年6月河北省廊坊市妇幼保健中心收治的60例妊娠期高血压疾病患者作为试验组，另选择同期无妊娠期高血压疾病的孕妇60例作对照组。采用荧光定量PCR技术对两组患者MTHFR C677T及A1298C基因进行检测。结果试验组MTHFR C677T C/T基因型频率为38.33%，对照组MTHFR C677T C/T基因型频率为21.67%，试验组明显高于对照组，差异有统计学意义（χ2=4.03，P＜0.05）。试验组突变T等位基因频率为24%，对照组突变T等位基因频率为16%，试验组显著高于对照组，差异有统计学意义（χ2=4.26，P＜0.05）。试验组MTHFR A1298C A/A基因型频率为55.00%，对照组MTHFR A1298C A/A基因型频率为60.00%，组间比较差异无统计学意义（χ2=2.71，P＞0.05）。试验组MTHFR A1298C A/C基因型频率为33.33%，对照组MTHFR A1298C A/C基因型频率为26.67%，组间比较差异无统计学意义（χ2=2.66，P＞0.05）。试验组MTHFR A1298C C/C基因型频率为11.67%，对照组MTHFR A1298C C/C基因型频率为13.33%，组间比较差异无统计学意义（χ2=2.26，P＞0.05）。试验组突变A等位基因频率为76.1%，对照组突变A等位基因为79.0%，组间比较差异无统计学意义（χ2=2.09，P＞0.05）。试验组突变C等位基因频率为23.9%，对照组突变C等位基因频率为21.0%，组间比较差异无统计学意义（χ2=2.57，P＞0.05）。结论MTHFR基因A1298C多态性与妊娠期高血压疾病的发病无明显相关性，而MTHFR基因C677T多态性可作为诱发妊娠期高血压疾病的危险因素，同时可将其作为评价妊娠期高血压疾病预后情况的一项指标，应引起临床工作者的重视。

妊娠期高血压；亚甲基四氢叶酸还原酶；基因多态性

妊娠期高血压疾病作为妇产科临床上一类发病率较高的疾病，严重威胁了母婴的生命健康，但其病因尚未明确，随着分子生物学技术的不断发展，妊娠期高血压疾病病因的研究重点开始集中于与该病发病相关的基因上[1]。大量研究表明，高同型半胱胺酸血症与妊娠期高血压疾病的发生具有相关性，而5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）参与了同型半胱氨酸的代谢，其中编码基因若出现突变，则会改变相应酶的活性，造成血中同型半胱氨酸水平受到影响[2]。因此，本研究通过分析MTHFR基因的多态性，研究其与妊娠期高血压疾病的相关性，现将研究结果总结报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

将河北省廊坊市妇幼保健中心（以下简称“我院”）自2013年6月～2014年6月收治的60例妊娠期高血压疾病患者作为试验组，所有患者均在我院确诊，诊断标准参考《妇产科学》第8版，本研究经医院伦理委员会通过，并签署知情同意书。患者年龄24～32岁，平均（28.6±1.5）岁，平均孕龄为（37.4±1.6）周，其中妊娠期高血压34例，子痫前期26例。另选同时期我院无妊娠期高血压疾病的孕妇60例为对照组，年龄25～34岁，平均（27.9±2.4）岁，平均孕龄为（36.8± 1.8）周。所有孕妇均无遗传性疾病、血液性疾病或生殖器畸形，两组人员年龄及孕龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

在两组孕妇入院之后均进行处理前抽取空腹12 h的外周静脉血10 mL，分别置于两个试管中，并标明1号试管及2号试管，其中1号试管采用乙二胺四乙酸二钠抗凝后，采用过柱法对基因组DNA进行提取，2号食管则通过EDTA抗凝，进行充分摇匀后，送至离心机，3000 r/min离心10 min，将上层清液去除后，置于-80℃的超低温冰箱中保存，分批待测。对DNA进行提取时采用Set与Column set两部分试剂盒进行，均购自大连宝生物工程有限公司。严格按照试剂盒说明说进行操作，以得到纯化的高纯度基因组DNA。采用荧光定量PCR技术，检测MTHFR C677T、 A1298C的基因多态性。相关仪器、试剂均购自美国ABI公司。每个反应体系10 μL：1 μL DNA模板（20 ng/μL），5 μL Taqman Universal Master Mix，0.5 μL Taqman-MGB探针，3.5 μL去离子水。反应条件：95℃预变性10 min，92℃变性15 s，60℃延伸1 min，20个循环；89℃变性15 s，60℃延伸90 s，30个循环。反应完成后，在ABI7900型荧光定量PCR仪上读取样品孔中的终点荧光，利用分析软件确定各个样本的基因分型结果。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组MTHFR基因C677T多态性比较

试验组MTHFR C677T C/C、T/T基因型频率与对照组比较，差异均无统计学意义（χ2=2.58、2.97，均P＞0.05）。试验组MTHFR C677T C/T基因型频率明显高于对照组，差异有统计学意义（χ2=4.03，P＜0.05）。试验组突变C等位基因频率与对照组比较，差异无统计学意义（χ2=2.43，P＞0.05）。试验组突变T等位基因频率显著高于对照组，差异有统计学意义（χ2=4.26，P＜0.05）。见表1。

表1 两组MTHFR基因C677T多态性对比

2.2 两组MTHFR基因A1298C多态性比较

试验组MTHFR A1298C A/A、A/C、C/C基因型频率与对照组比较，差异均无统计学意义（χ2=2.71、2.66、2.26，均P＞0.05）。试验组突变A、C等位基因频率与对照组比较，差异均无统计学意义（χ2=2.09、2.57，均P＞0.05）。A1298C杂合子联合C667T杂合子基因型发生妊娠期高血压疾病的危险性无明显差异，提示A1298基因多态性与妊娠期高血压疾病发生无密切关系。见表2。

表2 两组MTHFR基因A1298C多态性比较

3 讨论

妊娠期高血压作为孕妇妊娠期一类特有的疾病，现在临床上与产后出血、感染、妊娠合并心脏病一同构成造成孕产妇死亡的四大原因，为一类多器官损伤性疾病，发病率高达7%～10%，极易导致产妇及围生儿的死亡。而对其病因及发病机制的研究一直作为产科相关专家及学者所研究的重点[3]。近年来，随着医疗科学技术的不断进步，已有大量研究证实，MTHF基因多态性与先兆子痫的发病具有密切的关系。而据临床研究资料显示，妊娠期高血压疾病发病过程中常伴随着不同程度上的同型半胱氨酸水平升高，而同型半胱氨酸作为半胱氨酸及蛋氨酸代谢过程中的中间产物，其本身与蛋白质的合成并无明显关系[4]。大量研究表明，同型半胱氨酸不仅可通过诱导细胞快速进入细胞分裂期达到促进细胞增殖的目的，同时还可通过加速低密度脂蛋白的氧化过程，以促进并激活血小板的黏附和聚集，从而对血管内皮细胞造成损伤，使其机体抵抗妊娠期高血压等疾病的能力明显下降[5-7]。同型半胱氨酸再甲基化途径中一类不可或缺的酶即为MTHFR基因所编码的产物。在同型半胱氨酸再甲基化的过程中，其与甲基供体合成所需的关键物质为5-甲基四氢叶酸，该物质能帮助二者进一步合成四氢叶酸与蛋氨酸。而5，10-甲基四氢叶酸作为5-甲基四氢叶酸的还原前物质，完成此过程则需要MTHFR的帮助，即同型半胱氨酸甲基化成为蛋氨酸所必需的叶酸衍生物则为MTHFR[8-9]。

有专家学者曾于1994年首次克隆出MTHFR基因，之后他们采用DNA测序技术及PCR技术发现MTHFR基因内存在二十余种多态[10]。另有专家学者在研究中发现MTHFR C677T突变的杂合子或纯合子与MTHFR酶热不稳定性增加或活性下降具有密切的联系，此两种情况可作为诱发血同型半胱氨酸水平升高的危险因素。因此，可推测妊娠期高血压疾病的发病与MTHFR基因多态性具有一定的关系[11]。MTHFR C677T点突变为一种临床上较为常见的错义突变，发生突变的基因为第677位上的胞嘧啶被胸腺嘧啶所取代，造成了缬氨酸取代丙氨酸，从而改变了MTHFR的氨基酸结构，影响了MTHFR酶的活性，最为显著的表现为MTHFR酶活性下降，这就使得同型半胱氨酸无法正常完成向蛋氨酸的转化，造成血同型半胱氨酸的含量明显升高[12]。而A1298C点突变作为MTHFR基因在临床上另一类较为常见的突变类型，是指位于MTHFR基因上的第7外显子C端调节区域上的腺苷酸被胞嘧啶所取代，造成了谷氨酸被丙氨酸所取代[13]。另外，由于该位置的突变对MboⅡ内切酶的识别位点造成破坏，这就使得酶的活性明显降低，因此，MTHFR基因A1298C突变也可作为导致血中同型半胱氨酸水平升高的危险因素[14]。

本次研究结果显示，试验组MTHFR C677T C/T基因型频率明显高于对照组，但A1298C杂合子联合C667T杂合子基因型发生妊娠期高血压疾病的危险性无明显差异。该结果说明，MTHFR基因是诱发出现妊娠期高血压疾病的常见因素，不同位置的点突变具有特异性，但并非都能引起疾病的发作[15]。通过本次试验研究可知，MTHFR基因C677T多态性可作为诱发妊娠期高血压疾病的危险因素，同时可将其作为评价妊娠期高血压疾病预后情况的一项指标，临床工作者应据此判断妊娠期高血压疾病的发病风险，并采取有效的治疗措施进行应对[16]。

[1]林其德，刘伟.妊娠高血压综合征发病相关基因的研究策略[J].中华围产医学杂志，2004，12（7）：195-196.

[2]Ueland PM，Refsum H，Beresford SA，et al.The controversy over homocysteine and cardiovas-cular risk[J].Am J Clin Nutr，2000，72（2）：324-332.

[3]王素敏，沈嵘，石小燕，等.MTHFR基因多态性与妊娠高血压综合征的相关性研究[J].生殖与避孕，2006，26（6）：1099-1100.

[4]Carr DB，McDonald GB，Brateng D，et al.The relationship bet ween hemodynam ics and inflammatory activation in women at risk for preeclampsia[J].Obstet Gyneco，2001，98（6）：1109-1116.

[5]Ueland PM，Hustad S，Schneede J，et al.Biological and clinical implications of the MTHFR C677T polymorphism[J]. Trends Pharmacol Sci，2001，22（4）：195-201.

[6]刘梅颜，姜荣环，郭成军，等.同型半胱氨酸水平与年龄因素在高血压合并焦虑状态中的作用探讨[J].中国医药，2013，8（8）：1055-1057.

[7]陈顺华，张冬花，郭芳，等.轻中度高同型半胱氨酸血症与冠心病的关系探讨[J].中国医药，2013，8（6）：733-735. [8]Geisel J，Zimbelmann I，Schorr H，et al.Genetic defects as important factors for moderate hyperhomocysteinemia[J]. Clin Chem Lab Med，2001，39（8）：698-704.

[9]张成森，刘翠薇，潘旭东，等.N5，N10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与青年脑梗死的关系[J].中国医药，2012，7（5）：570-572.

[10]Ling KH，Rosli R，Duraisamy G，et al.The prevalence of MTHFR 677 C-T missense mutation，total plasma homocysteine levels and associated risk factors in Malay subjects[J].Med J Malaysia，2003，58（2）：243-254.

[11]Wang J，Trudinger BJ，Duarte N，et al.Elevated circulating homocysteine levels in placental vascular disease and associated preeclampsia[J].BJOG，2000，107（7）：935-938.

[12]Perales D，Martinez de J，Villarreal LE，et al.Folic acid levels homocysteine and polymorphism of methylenetetra hydrofolate reductase enzyme（MTHFR）in patients with pre-eclampsia and eclampsia[J].Gineco Lobstet Mex，2001，23（69）：6-11.

[13]矫富燕，鲁衍强，李瑛，等.烟台市牟平区汉族女性亚甲基四氢叶酸还原酶和甲硫氨酸合成酶还原酶基因多态性分布研究[J].分子诊断与治疗杂志，2014，6（2）：909-910.

[14]尹骑，吕永刚.亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与自然流产的相关性分析[J].吉林医学，2012，33（21）：4250-4251.

[15]张艳丽，鲁衍强，李华锋，等.临沂市汉族女性MTHFR和MZRR基因多态性分布及其与同型半胱氨酸水平的相关性[J].中华医学遗传学杂志，2012，29（6）：705-706.

[16]韩红敬沈淀，王艳核，等.亚甲基四氢叶酸还原酶基因677位多态性、高同型半胱氨酸血症与复发性流产[J].生殖与避孕，2012，32（7）：477-478.

Correlation between MTHFR gene polymorphism and hypertensive disorders in pregnancy

LI Junhua
Department of Obstetrics and Gynecology,Maternal and Child Health Center of Langfang City,Hebei Province,Langfang065000,China

Objective To explore and analyze the correlation between 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase(MTHFR)gene polymorphism and hypertensive disorders in pregnancy.Methods 60 cases with gestational hypertension from June 2013 to June 2014 in Maternal and Child Health Center of Langfang City were as test group,while 60 cases of pregnant women with gestational hypertension in same period were as control group.MTHFR C677T polymorphism and A1298C gene of patients in two groups were tested by PCR-RFLP.Results In the test group MTHFR C677T C/T genotype frequencies was 38.33%,which in the control group was 21.67%;the test group was significantly higher than that in the control group,the difference was statistically significant(χ2=4.03,P＜0.05).T allele frequency of the mutation in the test group was 24%;T allele mutation in the control group was 16%,the test group was significantly higher than this in the control group,the difference was statistically significant(χ2=4.26,P＜0.05).MTHFR A1298C A/A genotype frequencies in the test group was 55.00%,and in the control group was 60.00%,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.71,P＞0.05).MTHFR A1298C A/C genotype frequency in the test group was 33.33%,and that in the control group was 26.67%,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.66,P＞0.05). MTHFR A1298C C/C genotype frequencies in the test group was 11.67%,and 13.33%in the control group,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.26,P＞0.05).Mutant allele frequency in the test group of was 76.1%,in the control group was 79.0%,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.09,P＞0.05).C mutant allele frequency in the test group was 23.9%,21.0%in the control group,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.57,P＞0.05).Conclusion There is significant correlation between gene A1298C MTHFR polymorphism and the incidence of gestational hypertension;and MTHFR gene C677T polymorphism can be a risk factor to pregnancy-induced hypertension,so it can be used as an indicator of evaluation gestational hypertension prognosis,which should be of great importance to clinicians.

Gestational hypertension;5,10-methylenetetrahydrofolate reductase;Gene polymorphism

R714.246

A

1673-7210（2014）10（b）-0011-04

2014-07-10本文编辑：任念）

河北省廊坊市科学技术研究与发展计划项目（编号2013013010C）。