山东省某奶牛场布病与口蹄疫血清抗体检测及分析

岳瑞超 李 宁 刘立涛 程子龙 刘思当

（山东农业大学动物科技学院 山东 泰安 271000）

布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的以流产、睾丸炎、关节炎为主要特征的人兽共患病，我国将其列为二类动物疫病，近年来随着我国养牛业的迅速发展，发病率呈明显上升的趋势，对我国的人类健康和公共卫生构成了巨大威胁[1]。口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的多种动物(牛、羊、猪、骆驼、鹿等80多种动物)共患的、接触性传染病，该病毒血清型多，传染性强，除导致易感牛患病死亡或呈重症感染外，还导致整个国家畜产品进出口贸易受阻，造成巨大的经济损失和政治影响，我国将其列为一类动物疫病。我国主要存在O型、A型和亚洲I型[2]。因此，加强对山东省奶牛场布病感染状况和口蹄疫免疫效果的血清学监测，对奶牛场重大疫病的防控不可或缺。

1 材料与方法

1.1 材料

148份血清，2013年9月采自山东省某奶牛场全部存养奶牛；布氏杆菌虎红平板凝集抗原及试管凝集抗原均购自中国疾病预防控制中心，布氏杆菌抗体检测ELISA试剂盒购于IDEXX公司；口蹄疫A型、亚洲I型及0型液相阻断ELISA诊断试剂盒由内蒙古金宇集团提供。

1.2 方法

1.2.1 布病抗体检测 （1）虎红平板凝集试验：将玻璃板上各格标记受检血清号，然后加相应血清0.03ml，在受检血清旁滴加抗原0.03ml。用牙签类小棒搅动血清和抗原使之混合，在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(十)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(一)。（2）试管凝集试验：对平板凝集试验阳性或可疑的血清样品，按照《兽医微生物学实验指导》的方法进行试管凝集试验[3]，测定被检血清的凝集效价。根据中华人民共和国国家标准(GB/T18646-2002)，被检血清凝集效价达1:100以上的牛，判定为布氏杆菌病阳性;凝集效价达1:50者，判定为可疑反应。（3）ELISA检测：按照美国IDEXX牛布氏杆菌抗体检测试剂盒说明进行，检测结果判定方法如下：S/P=(样品OD-阴性对照OD)/(阳性对照OD-阴性对照OD)×100%。结果判定：S/P值大于等于1.2为阳性，在1.1～1.2之间为可疑，小于等于1.1时认为抗体不存在。

1.2.2 口蹄疫ELISA抗体检测 口蹄疫A型、亚洲I型、O型液相阻断ELISA检测方法按照试剂盒说明书进行，结果判定标准以抗原对照平均OD492值的50%为临界值，被检血清1:64稀释孔在大于临界值时为阴性，小于或等于临界值时为阳性。

2 结果

2.1 布氏杆菌检测结果

对148份奶牛血清进行布病抗体检测，结果见表1，虎红平板凝集试验18份阳性，阳性率为12.2%；对虎红平板凝集试验中的18份阳性样品进行试管凝集试验复诊，有16份阳性，与虎红平板凝集试验的符合率为88.9%，阳性率为10.8%；对148份样品进一步进行ELISA检测，结果有16份样品为阳性，阳性率为10.8%，阳性编号与试管凝集试验阳性编号完全一致。

表1 布氏杆菌检测结果

2.2 口蹄疫检测结果

148份血清口蹄疫抗体检测结果见表2，A型阳性74份，阳性率50%；亚洲I型阳性133份，阳性率90%；O型阳性133份，阳性率90%。

表2 口蹄疫检测结果

3 讨论

（1）目前国家法定的布病检测方法是虎红平板凝集试验进行初筛，通过试管凝集试验对阳性样品进行确认。虎红平板凝集试验具有操作简单、成本低廉、用时短等优点，适合于田间大规模检测，但是特异性和灵敏度都不高。试管凝集试验准确性高，但是操作繁琐，用时较长。ELISA方法敏感性高、特异性强，而且操作简便，用时短，可以作为布病确诊的辅助方法。本次调查结合三种方法对山东省某奶牛场进行检测，结果表明，该牛场布病抗体阳性率为10.8%，由于该牛场从未免疫过布氏杆菌疫苗，因此可以判断该牛群有较高比例的布氏杆菌感染。（2）比较3种布病抗体检测方法可以看出，虎红平板凝集试验与试管凝集试验的符合度为88.9%。试管凝集试验与IDEXX生产的ELISA试剂盒检测结果的阳性符合率一致，符合度100%，综合3种检测方法，确定该场的布病阳性率为10.8%。说明仅靠虎红平板凝集试验检测布病不够准确，还需要借助试管凝集试验或ELISA检测方法进行复诊。（3）农业部规定口蹄疫抗体的标准为阳性率大于等于70%，本次口蹄疫的血清学调查结果显示，该牛场口蹄疫亚洲I型与O型抗体阳性率均为90%，A型抗体阳性率为50%。亚洲I型与O型高于国家口蹄疫免疫的标准要求，说明该场在O型和亚洲I型口蹄疫的防疫上取得了比较理想的免疫效果，但A型口蹄疫明显低于国家规定的免疫合格率标准，这很可能跟疫苗的质量或者免疫程序有关，真正原因有待于调查研究。

4 防控措施

（1）布病是国家二类重大疫病，是一种人畜共患病，对公共卫生安全有重大威胁，根据国家相关规定，对实验室检出的布病阳性牛立即进行扑杀，并做无害化处理，对整个牛场进行3次彻底清扫消毒，严格采取生物安全措施。对阴性牛进行隔离观察，再经过2次检测之后，若未发现布病阳性牛，方可作为健康牛群进行饲养。（2）提倡牛场自繁自养，确需引进奶牛时，要严格把好检疫关，要从布氏杆菌病阴性场购买牛，查看检疫证明，严格执行检疫。牛购回后隔离饲养观察45d，同时，进行2次布氏杆菌病的检查，阴性时方可混入原奶牛群[4]。（3）鉴于该场A型口蹄疫抗体的阳性率只有50%，建议牛场尽快进行一次口蹄疫A型疫苗注射，注射疫苗2周后进行A型抗体阳性率检测，看是否达标，并建议牛场重新考查疫苗选购及免疫程序。（4）对奶牛场每年实施2次布病、口蹄疫定期的抗体监测，掌握奶牛重大疫病的免疫防控状况，做到未雨绸缪。牛场杜绝注射布氏杆菌病菌苗。（5）加强平时的卫生防疫消毒工作，健全生物安全措施以切断传播途径，如在养殖场或养殖小区门口设立消毒池或消毒间，每月进行一次全场消毒，包括饮水槽也要清洗干净，及时清理剩余的饲料。普通的消毒药如1%～3%的石炭酸溶液3 min就可杀死布氏杆菌，2%的福尔马林溶液15min可将其杀死。另外，使用3%的漂白粉溶液，20%的石灰乳、苛性钠溶液消毒效果都很好。对被病牛或阳性牛污染的场所、用具和物品要进行严格地消毒。饲养场的金属设施、设备可采取火焰、熏蒸等方式消毒；牛场场地，可采用20%石灰乳、10%漂白粉乳剂，圈舍可用3%来苏儿喷洒消毒。流产胎儿、胎衣应深埋或烧毁，被污染的圈舍、场地、用具等用以上药液进行彻底消毒，粪便经生物发酵消毒[5]。

[1]宫艳霞.奶牛养殖场布氏杆菌病的防治[J].中国畜禽种业, 2012, 8(4): 110.

[2]石惠, 王仲宾, 郑明学等.国内外口蹄疫的流行情况及防制[J].畜禽业, 2009, 242: 48-51.

[3]姚火春.兽医微生物学实验指导[M].北京: 中国农业出版社, 2003.46-49.

[4]杨仕标, 信爱国, 赵文华等.云南奶(水)牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学检测及防控措施[J].中国奶牛, 2011, 24: 42-44.

[5]刘红光.奶牛布氏杆菌病的防控措施[J].中国畜牧兽医文摘, 2012, 28(9): 91.