大骨鸡血液生化指标与生产性能的相关性研究

陈 宁，郭 丹，门德才

（辽宁省畜牧科学研究院，辽宁 辽阳 111000）

大骨鸡血液生化指标与生产性能的相关性研究

陈 宁，郭 丹，门德才

（辽宁省畜牧科学研究院，辽宁 辽阳 111000）

本研究利用3个血液酶活性标记对庄河大骨鸡的血液生化指标多态性进行研究，并与大骨鸡的产肉性能和产蛋性能进行相关性分析，筛选出用于大骨鸡产肉性能的优势遗传标记2个，产蛋性能的优势遗传标记1个，产蛋产肉兼用的优势遗传标记1个。

大骨鸡；生化指标；生产性能

庄河大骨鸡又称庄河鸡，原产于辽宁省庄河市为中心的辽东半岛，是我国地方鸡种中被列入鸡标准品种中的两个品种之一[1]。2000年被列入国家重点保护地方畜禽品种资源名录，是我国具有极高价值的家禽育种素材之一[2]。大骨鸡是以蛋大为突出特点的兼用型地方鸡种，具体大墩实、觅食力强、产蛋多而大、且蛋壳厚而坚实、肉质鲜嫩等特性[3]。随着现代遗传学技术的发展，从分子生化水平上研究大骨鸡的遗传特性，并筛选优势分子标记对大骨鸡的保种与选育具有重要的意义。

1 试验材料

1.1 试验动物在大骨鸡保种场选择发育正常、体况良好、健康无病的大骨鸡50只。

1.2 主要仪器设备DYYⅢ-I型稳压电泳仪、DYCZ型垂直板电泳槽，北京六一仪器厂；TGL-16G台式高速离心机，上海医用分析仪器厂；京立LDS-ZA低速离心机，北京医用离心机厂；Sartiorus电子分析天平，精确到0.l mg；pHS-3型酸度计，上海；90-2型定时恒温磁力搅拌器，上海沪西分析仪器厂。

1.3 主要试剂丙烯酰胺、三轻甲基氨基甲烷、L-甘氨酸、过硫酸铵、考马斯亮蓝、EDTA、TEMED、甲叉双丙烯酰胺、溴酚蓝、固兰RR盐、盐酸、柠檬酸、硼酸、冰醋酸、硫酸镁、无水乙醇、甲醇、蔗糖、三氯乙酸、α乙酸萘酯、β乙酸萘酯、联苯胺、对苯二胺盐酸盐。

1.4 主要试剂的配制

1.4.1 凝胶贮液的配制（4℃保存） A液：1 N HCl 48 mL，加Tris 36.3 g，定容至100 mL，pH 8.9；B液：Acr 28.89 g，加Bis l.2 g，定容至100 mL，过滤后使用；C液：取TEMED 50μL加蒸馏水至5 mL；D液：1 N HCl 48 mL，加Tris 6.0 g，用蒸馏水定容至100 mL，pH 6.7；E液：Acr l 1.2 g，加Bsi 2.8 g，定容至100 mL，过滤后使用；F液：称取蔗糖40 g，加蒸馏水溶解，并定容至100 mL；G液：称取过硫酸钱0.07 g，加蒸馏水至5 mL，现用现配。

1.4.2 其他试剂的配置 1%澳酚蓝溶液：用电子天平称0.005 g澳酚蓝，溶于5 mL蒸馏水中；12.5%三氯乙酸：称取12.5 g三氯乙酸，定容至100 mL；7%乙酸溶液：量取7 mL冰乙酸于容量瓶中，定容至100 mL；0.496 M Tris-甘氨酸（pH 8.3）：称取Tris 6.0 g，甘氨酸28.8 g，先用适当的蒸馏水溶解，再定容至1 000 mL，用时稀释10倍。

2 试验方法

2.1 生产性能测定大骨鸡的生长性能测定：初生体重、6月龄体重、成年体重、年产蛋量、平均蛋重[4]。

2.2 血样采集90日龄时，对试验用大骨鸡从翅下静脉采集2 mL血样，以2 500 r/min离心15 min制备血清，置于-20℃冰箱中保存备用[5]。

2.3 凝胶板的制作本试验采用双垂直板凝胶电泳，凝胶体积140 mm×140 mm×0.5 mm，点样孔为20个，宽度为8 mm，每次可同时作2块板。

2.4 电泳测定本试验采用聚丙烯酞胺垂直板状凝胶电泳法对血清碱性磷酸酶（Akp）、血清淀粉酶（Amy）、血清脂酶（Es）等位点的多态性进行分析。采用浓度和pH均不连续的聚丙烯酞胺凝胶电泳测定，凝胶制备、缓冲系统的组成及有关电泳条件按常规方法进行，本研究稍加改进。

2.5 染色分型

2.5.1 血清酯酶（Es） 分离胶浓度7.5%，浓缩胶浓度3.5%，缓冲液为Tris-柠檬酸（pH 8.9），电极缓冲液为Tris-Gly（pH 8.7）。采用稳压，先在200 V、18 mA下电泳至溴酚蓝指示线移动到浓缩胶和分离胶分界线时，调电压250 V，20 mA，共电泳4.5～5 h。结束后，将凝胶浸入酯酶染色液中，37℃保温出现的褐色条带即为酯酶谱带。

2.5.2 血清淀粉酶（Amy） 分离胶浓度7.0%，缓冲液采用Tris-柠檬酸（pH 8.9）系统；浓缩胶浓度3.0%，缓冲液为Tris-柠檬酸（pH 6.8），电极缓冲液为Tris-Gly（pH 8.7）。采用稳压，在250 V、21 mA下电泳4 h左右。结束后，将凝胶浸入300 mL的0.15 mol/L醋酸缓冲液（pH 5.0）中，37℃下保温1.5 h，倒去醋酸缓冲液，加显色碘液，在蓝色背景下观察显带情况。

2.5.3 碱性磷酸酶（Akp） 分离胶浓度7.5%，缓冲液采用Tris-HCl（pH 8.9）系统；浓缩胶浓度3.5%，缓冲液为Tris-H3PO4（pH 6.7）。上槽电极缓冲液为Tris-硼酸（pH 9.5），下槽电极缓冲液为Tris-HCl（pH 8.07）。采用稳流，先在24 mA、150 V下电泳1 h后，调电流48 mA，300 V，继续电泳3.5～4 h，结束后，将凝胶置于染液中染色[6]。

2.6 判型标准不同样品的同一种蛋白质电泳都在完全一致的条件下进行，条带不清楚的进行重复试验。电泳区带的定型采用佐佐木清纲的电泳图谱来判定。对于遗传方式清楚的基因位点，基因型命名按照各组分在电场中向阳极方向迁移的快慢来确定。由2个等位基因控制的一般用AA、BB、AB来表示其基因型，AA代表迁移率较快的条带，BB代表迁移率较慢的条带，AB表示迁移率既有快带也有慢带的表型；由3个共显性等位基因控制一般用AA、BB、CC、AB、BC、AC来表示其基因型，AA型代表迁移率最快的带型，BB次之，CC表示迁移率最慢的带型[7]。

2.7 基因型频率和基因频率基因型频率是指一个群体中某一性状的各种基因型之间的比率。

基因型频率=该基因型个体数/被测量个体总数

基因频率是指一个群体中某一基因对其等位基因的相对比率。

式中，i表示纯合等位基因型个体，i j l、i j2、i jn表示与i共显性的第n个基因型个体，N为样本总数。

3 试验结果

3.1 电泳结果

3.1.1 血清碱性磷酸酶（AKP） 从垂直板状聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱可见（图1），大骨鸡的血清碱性磷酸酶同工酶绝大部分显示2条慢带（即慢1和慢2），试验中少数母鸡还有一条着色较浅的快带。将2条慢带的带型定为f型，2条慢带，1条快带的定位o型。

图1 血清碱性磷酸酶电泳图Fig.1 Electrophoresis of serum alkaline phosphatase

3.1.2 血清酯酶（Es） 从垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱可见（图2），大骨鸡的血清酯酶都显示2条谱带，并不存在多态性。

图2 血清酯酶电泳图Fig.2 Electrophoresis of serum esterase

3.1.3 血清淀粉酶（Amy） 从垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱可见（图3），大骨鸡的血清酯酶显示出不同的带型，存在多态性。经鉴定分析，存在3种带型，分别将这3种带型定位AA型、AB型、BB型。

图3 血清淀粉酶电泳图Fig.3 Electrophoresis of serum am ylase

3.2 等位基因频率计算结果 见表1。

表1 2个多态型座位的基因、基因型频率及X2值Table1 Frequency of two Polymorphic genes seats,genotype and X2values

由表1可知，Akp和Amy两个蛋白位点呈多态性，并且皆由两个等位基因控制，Akp o和AmyAB为优势基因型，Es位点呈现单态。Akp位点经X2检验，处于遗传平衡状态。

3.3 血液蛋白多态性与生产性能的相关性分析数据用SPSS 10.0软件进行统计,差异显著用ONE-WAY ANOVA方差分析，进行Duncan’s LSD检验。见表2。

表2 不同基因型与产蛋、产肉性能的关联分析Table 2 Correlation analysis of different genotypes associated w ith egg,meat production performance

由表2可知，在六月龄体重性状上，AmyAB型与其他位点存在显著差异，可作为六月龄体重性状的优势基因型；在成年体重性状上，AmyAB和AKPf f型位点可作为成年体重的优势基因型；在年产蛋量性状上，AmyAB型与其他位点存在差异，可作为年产蛋量性状的优势基因型；AmyAB基因型可同时作为六月龄体重和年产蛋量的优势基因型。

4 结论

庄河大骨鸡在Amy、AKP、Es 3个酶蛋白位点中，只有Amy和AKP呈多态性，其中Akp由2个等位基因控制，Amy由3个等位基因控制，且经卡方检验处于遗传平衡状态。表明，大骨鸡的选育虽遇到纯种减少等困境，但经科技人员的多年分家系选育，遗传基因仍处于较丰富状态[8]。通过进一步的相关研究筛选出产肉性能优势基因型2个（AmyAB型和AKPf f型）、产蛋性能优势基因型1个（AmyAB型）、产蛋产肉两性能的共同优势基因型1个（AmyAB型），为大骨鸡的系统选育、进一步的开发和利用提供理论依据。

[1]周孝峰.有效保护大骨鸡种质资源[J].中国牧业通讯，2010（19）：35-36.

[2]郭维春，崔健.辽宁省优良地方品种开发利用现状及改进措施[J].辽宁畜牧兽医，2002（4）：30-32.

[3]郭丹，门德才，姜怀志，等.庄河大骨鸡种质特性的研究[J].黑龙江畜牧兽医，2013，11：58-59.

[4]张雷雷，杜斌，梁雪，等.大骨鸡遗传多样性的研究进展[J].黑龙江畜牧兽医，2010（5）：33-34.

[5]孙震，边连全，赵中华，等.中草药饲料添加剂对肉仔鸡生产性能、血液生化指标及肉质改善机理研究[J].现代畜牧兽医，2006（7）：8-11.

[6]佐佐木清纲.家畜的血液型及其应用[M].李世安译，上海：上海科学技术出版社,1982.

[7]胡兰，胡锐，刘莹，等.大骨鸡血液生化遗传标记的测定[J].四川畜牧兽医，2004（2）：29-30.

[8]周孝峰，曹悦.庄河地区大骨鸡种质资源及养殖状况调研[J].现代畜牧兽医，2012（7）：64-65.

（编辑：郭雪峰）

The Correlation study on the production performance and blood biochem ical parameters of Big bone chicken

Chen Ning,Guo Dan,Men Decai
（Animal Husbandry Institute of Liaoning Province,Liaoning Liaoyang 111000）

In this study,the polymorphism of blood biochemical indexes was investigated by the activities of three blood enzyme in the Zhuanghe bone chicken,and the cor relation analysis between meat and egg production per formances were conducted in order to screen for two advantageous genetic markers of meat production and one advantageous genetic marker of egg production,one advantageous genetic marker of both meat and egg production marker.

Big bone chicken;Blood biochemical parameters;Production per formance

S831.8+9

：B

：1672-9692(2014)02-0017-04

2014-01-03

陈宁（1978-），女，高级畜牧师，硕士，研究方向为畜禽繁育。

辽宁省农业攻关计划项目（2011202007）