鼻炎胶囊质量标准研究

王连芝　曹玲

[摘要] 目的 建立鼻炎胶囊的定性鉴别和含量测定的方法。 方法 用TLC法定性鉴别鼻炎胶囊中白芷、川芎；用HPLC法测定细辛中马兜铃酸A含量；Kromasil C18色谱柱；甲醇-1%冰乙酸（60∶40）流动相洗脱；检测波长250 nm。 结果 薄层鉴别荧光斑点清晰，分离度好，阴性对照无干扰；马兜铃酸A进样量在0.044～0.22 μg范围内峰面积线性关系良好（r=0.9999）；对两批细辛药材进行检测，其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g，并对3批样品进行检测，未检出马兜铃酸A。 结论 所建立的定性、限量测定分析方法可用于鼻炎胶囊的质量控制。

[关键词] 鼻炎胶囊；质量标准；马兜铃酸A；细辛；白芷；川芎

[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）01（b）-0008-03

鼻炎胶囊由苍耳子、白芷、川芎、菊花、细辛等九味药材组成，经提取制成的中药复方制剂，具有祛风宣肺、清热解毒等功效，用于治疗急慢性鼻炎。为了有效监测该制剂的产品质量，本实验采用TLC法对制剂中的川芎和白芷进行定性鉴别；另细辛为本方的主要成分之一，为了控制其毒副作用，本文采用HPLC法对制剂中马兜铃酸A的含量进行检查，为该制剂的质量控制提供理论依据。

1 仪器与试药

Waters2695-2998型高效液相色谱仪；马兜铃酸A对照品、川芎对照药材和白芷对照药材，均购自中国药品生物制品检定所，批号分别为110746-200305， 120918-200608和120945-200406，甲醇为色谱纯，水为重蒸水；硅胶G购自青岛海洋化工有限公司。

2 方法与结果

2.1 川芎的薄层鉴别

取本品适量，倾倒出内容物，称取约8 g，置烧瓶中，加入乙醚约50 ml，水浴加热回流提取，时间约为1 h，提取液滤过，回收滤液至干，残渣加乙醚2 ml使溶解，作为供试品溶液。另制备缺川芎阴性样品，取缺川芎阴性样品5 g，同法制成缺川芎阴性对照溶液。再取川芎对照药材1 g，同法制成川芎对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各6 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与川芎对照药材色谱相同的位置上，显相同颜色的荧光斑点，与缺川芎阴性样品相比较，阴性无干扰（图1）。

2.2 白芷的薄层鉴别

取本品适量，倾倒出内容物，称取约5 g，置三角烧瓶中，加入乙醚30 ml，密塞，轻轻振摇，放置1 h，提取液滤过，回收滤液至干，残渣加乙酸乙酯2 ml使之溶解，作为供试品溶液。另制备缺白芷阴性样品，取缺白芷阴性样品5 g，同法制成缺白芷阴性对照溶液。再取白芷对照药材0.5 g，同法制成白芷对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）-乙醚（3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与白芷对照药材色谱相同的位置上，显相同颜色的荧光斑点，与缺白芷阴性样品相比较，阴性无干扰（图2）。

2.3 马兜铃酸A含量检查

2.3.1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×200 mm，5 μm）；以甲醇-1%冰乙酸（60∶40）为流动相；流速为1.0 ml/min；检测波长250 nm；柱温30℃，理论塔板数按马兜铃酸A峰计算，不低于2000。

2.3.2 供试品溶液的制备 取本品适量，倾倒出内容物，精密称取5 g，置烧瓶中，加入甲醇80 ml，水浴加热回流提取，提取时间为2 h，提取液滤过，接取滤液，回收滤液至干，残渣加10%氨水20 ml溶解，用乙醚提取3次，每次20 ml，弃去乙醚层，水层滴加稀盐酸，至pH 3～4，再加入乙醚20 ml，分取乙醚层，共提取3次，合并乙醚液，回收乙醚至干，残渣加甲醇1 ml使之溶解，即为供试品溶液。

2.3.3 对照品溶液的制备 取马兜铃酸A对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 毫升中含马兜铃酸A 0.022 mg的溶液。

2.3.4 标准曲线的绘制及线性范围的考察 取上述马兜铃酸A对照品溶液，精密量取2、4、6、8、10 ml，分别置10 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为0.0044、0.0088、0.0132、0.0176、0.022 mg/ml的溶液，吸取上述系列浓度的对照品溶液10 μl，注入高效色谱仪，按上述色谱条件进行测定。以测得的色谱峰积分面积为纵坐标，以对照品的浓度含量为横坐标，绘制标准工作曲线，得线性回归方程Y=2.3183×104X+0.9281×103（r=0.9999），测得马兜铃酸A对照品线性范围为0.044～0.22 μg。

2.3.5 精密度试验 取上述马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml），精密吸取5 μl，注入高效色谱仪，按上述色谱条件进行测定，重复测定6次，以所得色谱峰峰面积计算RSD为0.23%，表明仪器的精密度良好。

2.3.6 稳定性试验 取上述马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml），精密吸取5 μl，分别于0、2、4、6、8、10、12 h注入高效色谱仪，进行测定，按上述色谱条件进行测定，以所得色谱峰峰面积计算RSD为1.52%，表明样品中的马兜铃酸A在12 h内测定，含量稳定。

2.3.7 最低检出限 取上述马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml），精密吸取1 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取20 μl，注入高效色谱仪，进行测定。从20 μl起依次递减进样量，并记录各色谱图，结果表明当进样量达2 μl时，色谱图信噪比为3∶1，确定最低检出量为2 μl，即含马兜铃酸A对照品为1.76 ng。

2.3.8 细辛药材及样品的马兜铃酸A含量测定 取3批样品按2.3.2项下的方法制备供试品溶液。细辛药材溶液的制备：取细辛药材，精密称取0.2 g，置烧瓶中，加入甲醇20 ml，水浴加热回流提取，提取时间为2 h，提取液滤过，接取滤液，回收滤液至干，残渣加10%氨水10 ml溶解，用乙醚提取3次，每次10 ml，弃去乙醚层，水层滴加稀盐酸，至pH 3～4，再加入乙醚15 ml，分取乙醚层，共提取3次，合并乙醚液，回收乙醚至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，即得。分别精密吸取马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml） 5 ml、细辛药材溶液和供试品溶液各10 ml，注入液相色谱仪，测定色谱图见图3～5。对两批细辛药材进行检测，其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g，并对三批样品进行检测，未检出马兜铃酸A（表1）。

3 讨论

本研究对鼻炎胶囊制剂中各味药进行了TLC定性鉴别，通过试验，确定了川芎、白芷的薄层鉴别方法。该方法专属性强，阴性对照无干扰，可以作为该制剂的鉴别方法。川芎鉴别实验参考药典[1]进行鉴别，实验过程中发现阴性对照有干扰。因此，参照文献[2-4]进行了反复实验，最后确定展开剂为石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9），展开效果最好。白芷薄层鉴别参照药典[1]进行实验，展开效果好，斑点清晰。

马兜铃酸是细辛、关木通等马兜铃科植物中的一类硝基菲羧酸类化合物，主要由马兜铃酸A、B、C、D、E及其衍生物组成[5-6]。临床关于马兜铃酸肾损害的报道不断出现，“马兜铃酸肾病”也得到医药界的广泛关注[7-8]。研究表明，马兜铃酸作用部位在肾小管上皮细胞和肾间质成纤维细胞，其毒性机制主要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死和凋亡， 加速肾间质纤维化进程，降低肾小球滤过率，引起肾衰竭等[9-11]。为有效控制马兜铃酸的肾毒性，有学者采用HPLC法对药材中马兜铃酸A进行了测定[12-14]，参照上述文献方法，本文采用HPLC法测定鼻炎胶囊中马兜铃酸A的含量，来控制制剂的安全性。测定结果表明，细辛药材中马兜铃酸A的含量甚微，约为34.29 μg/g，含细辛药材的三批鼻炎胶囊样品中均未检出马兜酸A。

[参考文献]

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2010：38，97.

[2] 张村，李丽，耿立冬，等.川芎药材有效成分鉴别及其含量标准研究[J].北京中医药大学学报，200，528（2）：66-69.

[3] 郭丽蓉，刘宏伟，周莉玲.跌打止痛微乳喷雾剂质量标准的研究[J].时珍国医国药，2011，22（5）：1045-1048.

[4] 冯树倩，李映辉.舒胸片中红花及川芎的薄层鉴别[J].中医药导报，2010，7（1）：60-61.

[5] 胡志祥，王永红，彭崇胜，等.近5年细辛及其制剂中马兜铃酸的研究进展[J].中草药，2010，41（2）：318-320.

[6] 黄永芬.关注马兜铃酸对人民健康的危害[J].中国药业，2002，11（8）：16.

[7] 关小彬.警惕含马兜铃酸的中药引起的肾损害[J].新医学，2004，35（5）：305-306.

[8] 史文慧，郭蓉，罗朝利，等.59例马兜铃酸肾病的报道[J].药物流行病学杂志，2008，17（2）：101-103.

[9] 熊静悦，谭正怀.马兜铃酸的主要毒性作用及其相关机制[J].四川中医，2011，29（9）：39-42.

[10] 崔晓红，张兰桐，杨秀岭.马兜铃酸毒性的研究新进展[J].中草药，2003，34（5）：附7-9.

[11] 王典仁，张中文，陆彦，等.马兜铃酸肾纤维化毒性研究进展[J].中国兽药杂志，2008，42（1）： 37-40.

[12] 李庆杰，刘永强，常艳茹，等.清脑止痛胶囊中马兜铃酸A限量测定[J].特产研究，2009，（4）：61-64.

[13] 刘新，林於.细辛中马兜铃酸的HPLC限量测定方法探讨[J].中成药，2008，30（6）：896-899.

[14] 苏健，王宝琴，马滕，等.含马兜铃酸中药材与制剂的含量测定方法研究概述[J]. 中国中医药信息杂志，2005， 12（11）：53-55.

（收稿日期：2013-11-15 本文编辑：魏玉坡）

2.3.8 细辛药材及样品的马兜铃酸A含量测定 取3批样品按2.3.2项下的方法制备供试品溶液。细辛药材溶液的制备：取细辛药材，精密称取0.2 g，置烧瓶中，加入甲醇20 ml，水浴加热回流提取，提取时间为2 h，提取液滤过，接取滤液，回收滤液至干，残渣加10%氨水10 ml溶解，用乙醚提取3次，每次10 ml，弃去乙醚层，水层滴加稀盐酸，至pH 3～4，再加入乙醚15 ml，分取乙醚层，共提取3次，合并乙醚液，回收乙醚至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，即得。分别精密吸取马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml） 5 ml、细辛药材溶液和供试品溶液各10 ml，注入液相色谱仪，测定色谱图见图3～5。对两批细辛药材进行检测，其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g，并对三批样品进行检测，未检出马兜铃酸A（表1）。

3 讨论

本研究对鼻炎胶囊制剂中各味药进行了TLC定性鉴别，通过试验，确定了川芎、白芷的薄层鉴别方法。该方法专属性强，阴性对照无干扰，可以作为该制剂的鉴别方法。川芎鉴别实验参考药典[1]进行鉴别，实验过程中发现阴性对照有干扰。因此，参照文献[2-4]进行了反复实验，最后确定展开剂为石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9），展开效果最好。白芷薄层鉴别参照药典[1]进行实验，展开效果好，斑点清晰。

马兜铃酸是细辛、关木通等马兜铃科植物中的一类硝基菲羧酸类化合物，主要由马兜铃酸A、B、C、D、E及其衍生物组成[5-6]。临床关于马兜铃酸肾损害的报道不断出现，“马兜铃酸肾病”也得到医药界的广泛关注[7-8]。研究表明，马兜铃酸作用部位在肾小管上皮细胞和肾间质成纤维细胞，其毒性机制主要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死和凋亡， 加速肾间质纤维化进程，降低肾小球滤过率，引起肾衰竭等[9-11]。为有效控制马兜铃酸的肾毒性，有学者采用HPLC法对药材中马兜铃酸A进行了测定[12-14]，参照上述文献方法，本文采用HPLC法测定鼻炎胶囊中马兜铃酸A的含量，来控制制剂的安全性。测定结果表明，细辛药材中马兜铃酸A的含量甚微，约为34.29 μg/g，含细辛药材的三批鼻炎胶囊样品中均未检出马兜酸A。

[参考文献]

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[2] 张村，李丽，耿立冬，等.川芎药材有效成分鉴别及其含量标准研究[J].北京中医药大学学报，200，528（2）：66-69.

[3] 郭丽蓉，刘宏伟，周莉玲.跌打止痛微乳喷雾剂质量标准的研究[J].时珍国医国药，2011，22（5）：1045-1048.

[4] 冯树倩，李映辉.舒胸片中红花及川芎的薄层鉴别[J].中医药导报，2010，7（1）：60-61.

[5] 胡志祥，王永红，彭崇胜，等.近5年细辛及其制剂中马兜铃酸的研究进展[J].中草药，2010，41（2）：318-320.

[6] 黄永芬.关注马兜铃酸对人民健康的危害[J].中国药业，2002，11（8）：16.

[7] 关小彬.警惕含马兜铃酸的中药引起的肾损害[J].新医学，2004，35（5）：305-306.

[8] 史文慧，郭蓉，罗朝利，等.59例马兜铃酸肾病的报道[J].药物流行病学杂志，2008，17（2）：101-103.

[9] 熊静悦，谭正怀.马兜铃酸的主要毒性作用及其相关机制[J].四川中医，2011，29（9）：39-42.

[10] 崔晓红，张兰桐，杨秀岭.马兜铃酸毒性的研究新进展[J].中草药，2003，34（5）：附7-9.

[11] 王典仁，张中文，陆彦，等.马兜铃酸肾纤维化毒性研究进展[J].中国兽药杂志，2008，42（1）： 37-40.

[12] 李庆杰，刘永强，常艳茹，等.清脑止痛胶囊中马兜铃酸A限量测定[J].特产研究，2009，（4）：61-64.

[13] 刘新，林於.细辛中马兜铃酸的HPLC限量测定方法探讨[J].中成药，2008，30（6）：896-899.

[14] 苏健，王宝琴，马滕，等.含马兜铃酸中药材与制剂的含量测定方法研究概述[J]. 中国中医药信息杂志，2005， 12（11）：53-55.

（收稿日期：2013-11-15 本文编辑：魏玉坡）

2.3.8 细辛药材及样品的马兜铃酸A含量测定 取3批样品按2.3.2项下的方法制备供试品溶液。细辛药材溶液的制备：取细辛药材，精密称取0.2 g，置烧瓶中，加入甲醇20 ml，水浴加热回流提取，提取时间为2 h，提取液滤过，接取滤液，回收滤液至干，残渣加10%氨水10 ml溶解，用乙醚提取3次，每次10 ml，弃去乙醚层，水层滴加稀盐酸，至pH 3～4，再加入乙醚15 ml，分取乙醚层，共提取3次，合并乙醚液，回收乙醚至干，残渣加甲醇1 ml使溶解，即得。分别精密吸取马兜铃酸A对照品溶液（浓度为0.022 mg/ml） 5 ml、细辛药材溶液和供试品溶液各10 ml，注入液相色谱仪，测定色谱图见图3～5。对两批细辛药材进行检测，其马兜铃酸A含量为34.3 μg/g，并对三批样品进行检测，未检出马兜铃酸A（表1）。

3 讨论

本研究对鼻炎胶囊制剂中各味药进行了TLC定性鉴别，通过试验，确定了川芎、白芷的薄层鉴别方法。该方法专属性强，阴性对照无干扰，可以作为该制剂的鉴别方法。川芎鉴别实验参考药典[1]进行鉴别，实验过程中发现阴性对照有干扰。因此，参照文献[2-4]进行了反复实验，最后确定展开剂为石油醚（30～60℃）-二氯甲烷（1∶9），展开效果最好。白芷薄层鉴别参照药典[1]进行实验，展开效果好，斑点清晰。

马兜铃酸是细辛、关木通等马兜铃科植物中的一类硝基菲羧酸类化合物，主要由马兜铃酸A、B、C、D、E及其衍生物组成[5-6]。临床关于马兜铃酸肾损害的报道不断出现，“马兜铃酸肾病”也得到医药界的广泛关注[7-8]。研究表明，马兜铃酸作用部位在肾小管上皮细胞和肾间质成纤维细胞，其毒性机制主要是导致肾小管上皮细胞的变性、坏死和凋亡， 加速肾间质纤维化进程，降低肾小球滤过率，引起肾衰竭等[9-11]。为有效控制马兜铃酸的肾毒性，有学者采用HPLC法对药材中马兜铃酸A进行了测定[12-14]，参照上述文献方法，本文采用HPLC法测定鼻炎胶囊中马兜铃酸A的含量，来控制制剂的安全性。测定结果表明，细辛药材中马兜铃酸A的含量甚微，约为34.29 μg/g，含细辛药材的三批鼻炎胶囊样品中均未检出马兜酸A。

[参考文献]

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[2] 张村，李丽，耿立冬，等.川芎药材有效成分鉴别及其含量标准研究[J].北京中医药大学学报，200，528（2）：66-69.

[3] 郭丽蓉，刘宏伟，周莉玲.跌打止痛微乳喷雾剂质量标准的研究[J].时珍国医国药，2011，22（5）：1045-1048.

[4] 冯树倩，李映辉.舒胸片中红花及川芎的薄层鉴别[J].中医药导报，2010，7（1）：60-61.

[5] 胡志祥，王永红，彭崇胜，等.近5年细辛及其制剂中马兜铃酸的研究进展[J].中草药，2010，41（2）：318-320.

[6] 黄永芬.关注马兜铃酸对人民健康的危害[J].中国药业，2002，11（8）：16.

[7] 关小彬.警惕含马兜铃酸的中药引起的肾损害[J].新医学，2004，35（5）：305-306.

[8] 史文慧，郭蓉，罗朝利，等.59例马兜铃酸肾病的报道[J].药物流行病学杂志，2008，17（2）：101-103.

[9] 熊静悦，谭正怀.马兜铃酸的主要毒性作用及其相关机制[J].四川中医，2011，29（9）：39-42.

[10] 崔晓红，张兰桐，杨秀岭.马兜铃酸毒性的研究新进展[J].中草药，2003，34（5）：附7-9.

[11] 王典仁，张中文，陆彦，等.马兜铃酸肾纤维化毒性研究进展[J].中国兽药杂志，2008，42（1）： 37-40.

[12] 李庆杰，刘永强，常艳茹，等.清脑止痛胶囊中马兜铃酸A限量测定[J].特产研究，2009，（4）：61-64.

[13] 刘新，林於.细辛中马兜铃酸的HPLC限量测定方法探讨[J].中成药，2008，30（6）：896-899.

[14] 苏健，王宝琴，马滕，等.含马兜铃酸中药材与制剂的含量测定方法研究概述[J]. 中国中医药信息杂志，2005， 12（11）：53-55.

（收稿日期：2013-11-15 本文编辑：魏玉坡）