生大黄致结肠黑变病豚鼠肠动力评估

羊燕群 吴之茵 马志杭 陈建永 浙江省中西医结合医院消化科 杭州 310003

结肠黑变病为临床高发病，如何在实验中建立与临床病因、病机相符的动物模型以协助临床研究是消化科难题。我们通过既往豚鼠结肠黑变病实验基础[1]与临床病因病机相结合，改进实验方法，采用生大黄液豚鼠灌胃拟建立结肠黑变病动物模型。

1 实验材料

1.1 动 物 5周龄普通级豚鼠36只，平均体质量（236±32.73）g，由浙江中医药大学动物实验中心提供，动物合格证号：SYXK（浙）2008-0116。室温 25℃，相对湿度50%～70%，每6只单笼饲养，造模前自由摄食、饮水。

1.2 药 物 生大黄（浙江中医药大学制剂厂，批号121101，产地：甘肃），70℃热水浸泡 30min，过滤成100%浓度生大黄液；聚乙二醇4000散（博福-益普生，批号C15563），配置成6.25%水溶液。

1.3 试 剂 二甲苯（成都市科龙化工试剂厂，批号20120718）；无水乙醇（成都市科龙化工试剂厂，批号20130130）；苏木精（SIGMA，批号 041M0014V）；伊红（上海迈坤化工有限公司，批号20120831）；盐酸溶液（杭州双林化工试剂厂，批号20120814）；中性树胶（上海标本模型厂）。

1.4 仪 器 轮转式切片机（RM2135型，LEICA公司）；摊片机（HI1210型，LEICA公司）；烘片机（HI1220型，LEICA公司）；显微镜（BH2型，OLYMPUS公司）；冰箱（BCD-216型，青岛海尔股份有限公司）；电热恒温培养箱（DRP-9082型，上海森信实验仪器有限公司）。

2 实验方法

2.1 造模及分组 36只豚鼠用随机数字表按完全随机方法分为正常对照组、大黄组、福松组，每组各12只。正常对照组予自由进食、进水，不给药；其余各组在自由进食、进水基础上，大黄组每日给100%浓度大黄液4mL，对照组每日给渗透性泻剂聚乙二醇4000散（商品名：福松）6.25%水溶液4mL。造模时间共42天。

2.2 观察项目 实验第43天即造模结束次日，各组豚鼠禁食不禁水12h灌服100%硫酸钡水溶液4mL，置于代谢笼中接取24h排出粪便，计算含钡剂大便颗粒数。统计排便情况后各组豚鼠开腹，每只豚鼠截取结肠上、中、下段结肠组织各1cm，置于中性甲醛固定，切片。通过HE染色检测结肠组织病理学变化，验证模型成立。

3 实验结果

3.1 一般情况比较 造模结束，三组存活豚鼠正常组8只，大黄组10只，福松组7只。正常组豚鼠大便圆润、颗粒状；大黄组豚鼠前3天大便稀烂量多，第4天开始大便量减少，便质变干；福松组豚鼠大便软，含水量增加，颗粒较服药前大及松散。三组豚鼠整体情况比较见表1。

表1 三组豚鼠一般情况比较

3.2 各组豚鼠24h排便颗粒数比较 大黄组平均大便颗粒数（34.2±8.9）粒，正常组平均（47.1±7.3）粒，福松组平均（42.7±4.3）粒，大黄组豚鼠排便颗粒数显著少于正常组与福松组豚鼠排便量（P＜0.05）。

3.3 各组豚鼠结肠目测外观改变 肉眼观察25个结肠组织样本中，正常组和福松组结肠黏膜形态、颜色正常，大黄组结肠黏膜颜色加深，并可见纵向褐色条索状色素沉积带，部分甚至呈黑色，从结肠近端向结肠远端逐渐变浅。见图1（封二）。

3.4 各组肠黏膜病理改变 显微镜下正常组肠组织主要由黏膜层、黏膜下层和肌层构成，黏膜上层完整，有少量炎性细胞，细胞类型主要为淋巴细胞和噬酸性细胞，黏膜下层和肌层结构完整，无炎细胞浸润。大黄组形态结构类型及黏膜上皮炎细胞类型与正常组相同，黏膜固有层大量吞噬细胞中含有棕黑色颗粒状物质，黏膜下层脂肪组织明显增多，肌层无明显病变。福松组形态结构类型及炎细胞类型与正常组相同，黏膜上皮无黄色颗粒状物质，黏膜上皮层杯状细胞明显增多，黏膜下层与肌层无明显病变。见图 2（封二）。

4 讨 论

便秘是临床常见病，蒽醌类泻药如大黄、芦荟、番泻叶、决明子等中药由于其作用强、起效快，在临床中药汤剂及中成药中均广泛应用。蒽醌类泻药主要成分为蒽醌类衍生物三羟甲基蒽醌，此类化合物主要作用于大肠，不受胃酸破坏，在小肠中被吸收入血，但对小肠无作用，在肝脏中水解为糖及蒽醌衍生物，再经血液从大肠分泌入肠腔中，或直接由小肠转运到大肠，在大肠中被水解，刺激大肠神经丛而加强蠕动，亦可抑制Na+-K+-ATP酶，减少大肠对水及Na+的回吸收，而起导泻作用[2]。蒽醌类药物随着服用时间的延长，其泻下效果逐渐降低，为维持通便效果，患者往往逐渐加大剂量，产生依赖性，长期滥用，便秘症状加重，患者甚至不能自行排便，部分长期使用蒽醌类药物患者可见结肠黑变病发生，并有研究认为其与结肠肿瘤的发生有一定相关性[3]。本实验证实，长期口服生大黄水溶液豚鼠目测结肠见典型的连续分布虎皮、网格状花纹，镜下HE染色可观察到结肠黏膜固有层大量棕黑色颗粒沉积，确认为黑变病结肠改变，而对照组豚鼠结肠未见该变化，含蒽醌苷的植物性泻药被认为是导致大肠黑变病的主要药物。

结肠动力的研究方法有钡条排出试验、球囊排出试验、闪烁扫描、化学染料标记等[4]。本实验采用钡剂标记排出大便，操作简便，容易观察，模型豚鼠有典型结肠黑变病改变，并初步证明黑变病豚鼠结肠排便功能下降，结肠动力障碍。

图1 大黄组豚鼠结肠黏膜表面大黄组结肠黏膜颜色加深，并可见纵向褐色条索状色素沉积带，部分甚至呈黑色，从结肠近端向结肠远端逐渐变浅。

图2 三组豚鼠结肠HE染色正常组：黏膜上层完整，有少量炎性细胞，细胞类型主要为淋巴细胞和噬酸性细胞，黏膜下层和肌层结构完整，无炎细胞浸润。大黄组：形态结构类型及黏膜上皮炎细胞类型与正常组相同，黏膜固有层大量吞噬细胞中含有棕黑色颗粒状物质，黏膜下层脂肪组织明显增多，肌层无明显病变。福松组：形态结构类型及炎细胞类型与正常组相同，黏膜上皮无黄色颗粒状物质，黏膜上皮层杯状细胞明显增多，黏膜下层与肌层无明显病变。

［1］陈建永，潘锋，张涛.结肠黑变病模型复制的实验研究［J］.中华中医药学刊，2009，27（3）：514-516.

［2］Kim BJ，Lee JH，Jun JY，et al.Vasoactive intestinal polypeptide inhibits pacemaker activity via the nitric oxide-cGMP-protein kinase G pathway in the interstitial cells of Cajal of themurine small intestine［J］.Molecules and Cells，2006，21（3）：337-342.

［3］陈建永，潘锋，张涛.大黄致结肠黑变病豚鼠肿瘤坏死因子-a水平变化及意义［J］.中国中西医结合杂志，2009，29（2）：140-142.

［4］杨海涛，蔡中其节译，周殿元校.结肠动力的研究［J］.国外医学（消化系疾病分册），1993，13（2）：78-81.