HPLC法测定复方樟脑软膏中樟脑的含量

白 林，范金钊，徐风华，王欢欢（.解放军总医院药品保障中心，北京 00853；.蚌埠医学院，安徽 蚌埠 33000）

HPLC法测定复方樟脑软膏中樟脑的含量

白 林1，范金钊2，徐风华1，王欢欢1（1.解放军总医院药品保障中心，北京 100853；2.蚌埠医学院，安徽 蚌埠 233000）

目的：建立HPLC法测定复方樟脑软膏中樟脑的含量。方法：采用色谱柱Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-乙腈-水（15∶45∶40）；检测波长：289 nm；柱温：35 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。结果：樟脑与其他杂质峰分离良好，樟脑在250.00 ～ 2 000.00 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系（r = 1.000 0），平均回收率为99.68%，RSD为1.21%（n = 9）。结论：本方法简便易行、准确，可作为复方樟脑软膏中樟脑的质量控制方法。

高效液相色谱法；复方樟脑软膏；樟脑；含量测定

复方樟脑软膏收载于《中国人民解放军医疗机构制剂规范》[1]，用于消毒、收敛，轻度冻疮、手足皲裂等症。该制剂在临床应用多年，是疗效显著的医院制剂。处方中樟脑具有促渗作用，原质量标准中无樟脑含量测定方法。本实验采用HPLC法测定复方樟脑软膏中主要有效成分樟脑的含量，以期为有效控制该制剂的质量提供参考。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪（含四元梯度泵、自动脱气机、VWD检测器和化学工作站，美国安捷伦科技有限公司）；UV-2550型紫外分光光度仪（日本岛津公司）。

樟脑对照品（中国食品药品检定研究院，批号110747-201008）；甲醇、乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；复方樟脑软膏（本院自制，每盒20 g，批号20131212、20131213、20131216）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-乙腈-水（15∶45∶40）；检测波长：289 nm；柱温：35 ℃；流速：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。

2.2 溶液的制备

1）对照品溶液：取樟脑对照品约0.05 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（含樟脑500 μg·mL-1）。2）供试品溶液：取本品约5 g（含樟脑约0.25 g），精密称定，置100 mL量瓶中，加入80 ℃的无水乙醇约30 mL，置80 ℃水浴加热振摇使溶化，放冷，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，冰浴中冷却1 h，滤过。精密量取2 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，经0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。3）阴性对照溶液：按处方比例取除樟脑以外的其余成分，按复方樟脑软膏的制备工艺制成阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。

2.3 系统适用性实验

取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”项下色谱条件测定，樟脑色谱峰的保留时间约为12 min，分离度大于2.0，理论塔板数以樟脑峰计算大于3000。详见图1。

图1 复方樟脑软膏中樟脑的HPLC色谱图A – 对照品，B – 供试品，C – 阴性对照；1 – 樟脑Fig 1 HPLC chromatograms of camphor in compound camphor ointmentA – reference, B – sample, C – negative reference; 1 – camphor

2.4 线性关系考察

精密吸取含樟脑分别为250.00、375.00、500.00、750.00、1 000.00、1 250.00、1 500.00、2 000.00 μg·mL-1的对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积值为纵坐标（Y），进样量（μg·mL-1）为横坐标（X）绘制标准曲线，得回归方程Y = 0.132 2 X + 0.251 9，r = 1.000 0。实验表明樟脑在250.00 ～ 2 000.00 μg·mL-1的范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验

精密吸取对照品溶液10 μL，按“2.1”项下色谱条件测定，连续重复进样6次，记录峰面积值，RSD为0.15%，表明仪器的精密度良好。

2.6 重复性实验

取复方樟脑软膏约5 g（批号20131216），共6份，精密称定，分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，樟脑含量（标示量%）平均值为98.96%，RSD为0.62%（n = 6），表明方法重复性良好。

2.7 稳定性考察

取复方樟脑软膏（批号20131216），按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行测定，分别在0、1、4、6、12、24 h进样，计算樟脑的峰面积值，RSD为0.19%。结果表明供试品溶液中樟脑在24 h内稳定。

2.8 加样回收率实验

取樟脑约0.20、0.25、0.30 g各3份（处方量的80%、100%、120%），分别精密称定，按处方比例分别加入复方樟脑软膏基质，按复方樟脑软膏的制备工艺制成样品，按供试品溶液制备方法制成样品溶液。依照“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图及峰面积，计算回收率。结果表明本方法回收率良好。樟脑的平均回收率为99.68%，RSD为1.21%，详见表1。

表1 加样回收率实验测定结果. n = 9Tab 1 Results of recovery test. n = 9

2.9 样品含量测定

取3批复方樟脑软膏（批号20131212、20131213、20131216），樟脑平均含量分别为标示量的99.62%、98.77%、97.89%。

3 讨论

樟脑的含量测定方法主要有气相色谱法[2-5]、气相色谱-质谱法[6]、毛细管- GC法[7-8]、HPLC法[9]、系数倍率法[10]等。其中，气相色谱法居多，主要因为樟脑具有挥发性，易溶于有机溶剂，对仪器设备条件要求较高。

樟脑紫外最大吸收峰位为289 nm，由于软膏基质中羊毛脂有紫外吸收，直接采用紫外分光光度法测定樟脑会造成干扰。系数倍率法[10]为计算分光光度法，误差较大。

本研究中供试品溶液的制备采用流动相进行稀释并滤过，有效避免软膏基质遇流动相析出，对色谱柱及液相色谱系统均具有较好的保护作用。

樟脑虽有挥发性，但本样品溶液稳定，以甲醇-乙腈-水（15∶45∶40）为流动相，在柱温35 ℃[11]，检测波长为289 nm情况下，峰形较好，保留时间适中，杂质峰无干扰。本方法简便，结果准确，对于半固体制剂中樟脑的含量测定具有较好的参考意义。

[1]中国人民解放军总后勤部卫生部.中国人民解放军医疗机构制剂规范[S].北京：人民军医出版社，2003：163-164.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：1107-1108.

[3]陈海霞，陈祥胜.GC法测定冻伤搽剂中樟脑的含量[J].湖北中医学院学报，2010，12（2）：35-36.

[4]陈煜，冯军，黄艳，等.气相色谱法测定复方薄荷乳膏中樟脑和薄荷脑的含量[J].广西中医学院学报，2010，13（2）：45-47.

[5]牛洪辉，周黎明，刘杰.气相色谱法测定红花樟脑酒中樟脑的含量[J].中医研究，2010，23（8）：19-21.

[6]颜敏，刘圆圆，易必新.贴敷类医疗器械中樟脑薄荷脑与冰片的含量测定[J].医药导报，2012，31（5）：637-639.

[7]王怀玉，彭锐，王征帆，等.毛细管GC法测定不同产地青蒿中樟脑和冰片的含量[J].中国药房，2012，23（15）：1395-1396.

[8]霍永昌，黄婉锋，高卫东.毛细管气相色谱法同时测定狮子油中两种成分的含量[J].中药材，2010，33（2）：296-298.

[9]谢友亮.高效液相色谱法测定樟脑的含量[J].中国药品标准，2010，11（3）：231-233.

[10]周晓虹.系数倍率法测定樟脑乳膏中樟脑的含量[J].中国当代医药，2010，17（24）：147-148.

[11]白林，李程程.HPLC法同时测定脊痛宁胶囊中葛根素和芍药苷的含量[J].中国药物应用与监测，2013，10（4）：196-198.

Content determination of camphor in compound camphor ointment by HPLC

BAI Lin1, FAN Jin-zhao2, XU Feng-hua1, WANG Huan-huan1(1. Department of Pharmaceutical Care, PLA General Hospital, Beijing 100853, China; 2. Bengbu Medical College, Bengbu 233000, China)

Objective:To establish the HPLC method for determining the content of camphor in compound camphor ointment.Methods:The analysis was carried out on a column of Diamonsil C18(250 mm × 4.6 mm, 5 μm) with the mobile phase consisting of methanol-acetonitrile-water (15∶45∶40), the flow rate was 1.0 mL·min-1, the detection wavelength was 289 nm, column temperature was 35 ℃, the sample injection was 10 μL.Results:The samples were separated well from other substances. The calibration curve of camphor was linear in the range of 250.00 – 2 000.00 μg·mL-1(r = 1.000 0). The average recovery of camphor in the compound camphor ointment was 99.68% with RSD of 1.21% (n = 9).Conclusion:This method is accurate and feasible, which can be applied as the quality control of camphor in the compound camphor ointment.

HPLC; Compound camphor ointment; Camphor; Content determination

R917

A

1672 – 8157(2014)04 – 0212 – 03

2014-01-07

2014-03-06）

半固体制剂标准提高系列研究课题（13ZJZ05）

徐风华，女，研究员，主要从事药物新剂型与新型递药系统研究。E-mail：xufh@yahoo.com

白林，女，主任药师，主要从事药物分析与药品质量控制工作。E-mail：bailin301@126.com