对从大洋洲进口牛的疱疹病毒Ⅰ型五种检疫方案的评估

陈国强，张 睿，陈 雷，姜 珊，李静静，周梅玲，王凯民，唐泰山

（1.江苏出入境检验检疫局，江苏南京 210001；2.南京农业大学，江苏南京 210095）

对从大洋洲进口牛的疱疹病毒Ⅰ型五种检疫方案的评估

陈国强1，张 睿1，陈 雷1，姜 珊1，李静静1，周梅玲2，王凯民1，唐泰山1

（1.江苏出入境检验检疫局，江苏南京 210001；2.南京农业大学，江苏南京 210095）

牛疱疹病毒Ⅰ型是引起牛传染性鼻气管炎和传染性脓疱性外阴阴道炎的病原，也是近十多年来我国从大洋洲大量进口奶牛以来，检出率最高的病原之一。为了更加有效地防范其传入，本文在分析其感染特点、防控措施、大洋洲流行特点、世界动物卫生组织和中国现行检疫要求的基础上，对中国从大洋洲进口牛时该病5种检疫方案进行了风险分析，提出了以接种能区分免疫和自然感染的基因缺失疫苗代替接种灭活疫苗为主要内容的检疫的新建议。

大洋洲；奶牛进口；BoHV-1；检疫要求；风险分析；公共卫生

牛传染性鼻气管炎/传染性脓疱性外阴阴道炎（IBR/IPV）是由牛疱疹病毒Ⅰ型（bovine herpesvirus type1，BoHV-1）引起的牛的一种急性、接触性传染病，主要有呼吸道和生殖道两种表现型，具体表现为鼻气管炎、传染性脓疱性外阴阴道炎、传染性龟头包皮炎、结膜炎、肠炎、流产、脑膜脑炎、乳房炎等多种病型。本病于1955年首先发生于美国，现已广泛分布于全世界，目前除南美外，世界各国都已分离到这种病毒。1980年，我国首次从新西兰进口奶牛中首次报道本病，并分离到该病毒；随后，我国许多地区均报道过该病。到目前为止只有奥地利、丹麦、芬兰、瑞典、瑞士、挪威根除了该病。另外一些国家，如德国和意大利开始实施控制和根除计划[1-3]。

该病是国际动物卫生组织（OIE）法定要求报告的动物疫病，是《中华人民共和国进境境动植物检疫法》规定的进境动物二类传染病，农业部发布的《一、二、三类动物疫病病种名录》将其列为二类动物疫病[4-5]。该病也是近十多年来，我国从大洋洲（澳大利亚和新西兰）大量进口奶牛以来，检

出率最高的疫病之一。

1 BoHV-1感染的主要特点

潜伏感染和间歇排毒是该病感染后的主要特点。该病毒初次感染牛后，潜伏在三叉神经节中。中和抗体对潜伏感染病毒无作用，使用疫苗也不能阻止潜伏感染。如果存在应激因素，如接受激素类药物、免疫注射、运输、气候条件和饲养条件的改变、过分拥挤、密切接触、分娩等，使潜伏病毒被激活，重新发生感染并排出病毒。这种潜伏感染病毒的再激活很少能引起临床症状，但这种状态的病毒复活将是最危险的传染源，感染牛会长期甚至终生带毒。任何进口牛假如存在潜伏感染，则意味着带进BoHV-1[2，5]。

2 BoHV-1的防控

防控BoHV-1的关键是通过严格执行农场动物卫生管理措施，包括动物卫生措施、免疫和剔除感染动物等。IBR/IPV疫苗可以减轻临床症状，但所有的IBR疫苗均不能预防感染和潜伏感染。免疫的目的是通过反复免疫防止再排毒。当病毒携带者的比率低时，将其剔除将更加安全。为了提高控制计划的效果，必须采取卫生措施防止引入IBR血清学阳性动物，甚至防止引入来自IBR血清学阳性牛群的动物。注射常规弱毒疫苗和灭活疫苗后，由于不能区分疫苗毒和野毒感染，会给消灭和控制该病带来不利条件。已根除BoHV-1或已决定实施根除计划的国家已禁止使用该病常规疫苗。随着疫苗技术的进步，能够将IBR自然感染和疫苗免疫动物区分开来的基因缺失疫苗（ differentiating infected from vaccinated animals，简称 DIVA 疫苗）及其配套检测技术已经成熟并商品化，如英特威公司生产的Bovilis® IBR marker 灭活疫苗和IDEXX公司生产的 HerdChek* IBR gE Antibody ELISA检测试剂盒。BoHV-1的基因缺失疫苗在欧洲国家控制和消灭BoHV-1的计划中发挥了重要作用。一些国家采取了检疫和扑杀政策，也有些国家用疫苗控制疾病，也有些国家没采取控制和根除计划[1-2]。

在有致病力BoHV-1亚型发生的欧洲已采取了控制和根除计划，因为互相接壤的欧洲国家国土面积相对较小，欧洲饲养体系特性决定了其实施根除计划是切实可行的。目前，丹麦和瑞士采取禁止接种、扑杀抗体阳性牛等措施已将本病消灭，但付出了巨大代价。采取扑杀阳性牛的方法耗资巨大，对拥有大量牛群或经济并不发达的国家是不现实的。因此，接种疫苗仍成为很多国家控制和预防本病的主要措施。商品化疫苗在欧洲和北美已用了许多年。美国使用的均为灭活苗[2，5-6]。

3 大洋洲BoHV-1流行特点

BoHV-1可分为1.1和1.2亚型，原先归为牛疱疹病毒1.3亚型近来被归为牛疱疹病毒5型。1.2亚型又分为1.2a和1.2b，牛疱疹病毒1.2亚型的毒力可能比牛疱疹病毒1.1亚型弱。澳大利亚和新西兰均存在广泛BoHV-1感染，但仅存在牛疱疹病毒1.2b亚型，很少出现严重临床症状和排毒情况，只表现出温和的鼻炎或温和的阴道炎。澳大利亚牛群IBR阳性率在不同的研究报道中从15%到96%都有。澳大利亚和新西兰均没有控制和消灭BoHV-1的计划。澳大利亚农林渔业部曾对IBR控制和消灭计划进行过评估，认为IBR消灭计划很难实现，而且也无必要，因为澳大利亚存在的是比较温和的BoHV-1的1.2b亚型，并且澳大利亚最重要的活畜贸易国都存在该病[6-8]。

澳大利亚有4种经注册可在澳大利亚使用的疫苗，一种是用牛疱疹病毒1.2b 亚型V155株制成的弱毒活疫苗，称为Rhinogard。V155株是澳大利亚最早于1964年分离的牛疱疹病毒1.2b 亚型。根据澳大利亚农业部2000年的资料，牛接种V155株制成的弱毒活疫苗已达两百万头份。另一种是称为IBEPUR的亚单位疫苗（糖蛋白灭活疫苗）。澳大利亚自2009年与中国签订议定书，当时唯一被批准使用的IBR灭活疫苗是美国FORT DOGE 公司生产的Triangle® 4+Type‖BVD疫苗，含有灭活的IBR病毒、BVDV、副流感3型病毒（Parainfuenza-3）和牛呼吸道合胞体病毒（respiratory syncytial virus），而且仅限于出口使用。第4种是近年来澳大利亚COOPER动物保健公司新推出了BOVILIS MH+IBR灭活苗，该疫苗是溶血性曼氏杆菌和IBR的双联灭活苗。上世纪九十年代初期，新西兰大约10%的牛群使用新西兰的弱毒株疫苗进行免疫。后

来，该疫苗不再生产，也不再允许使用弱毒苗免疫。两种灭活苗可以在新西兰使用，新西兰对出口中国的牛使用的是西班牙LABORATORIOS HIPRA公司生产的IBR/IPV、PI-3和BVD 三联灭活苗[7-8]。

4 OIE法典（2013版）对BoHV-1引起的IBR/ IPV的规定[4]

4.1 《OIE法典（2013版）》11.11.4中，推荐进口到无IBR/IPV牛群要求：

该国兽医行政管理部门应要求出具国际兽医证书，证明动物：

（1）装运之日无IBR/IPV临床症状；

（2）来自无IBR/IPV牛群；或

（3）装运前置隔离场隔离30天，进行两次IBR/IPV血液采样诊断试验，间隔不少于21天，结果阴性。

4.2 《OIE法典（2013版）》11.11.5中，推荐进口到IBR/IPV牛群要求：

该国兽医行政管理部门应要求出具国际兽医证书，证明动物：

（1）装运之日无IBR/IPV临床症状；

（2）装运前1～6个月间接种灭活疫苗。

5 中国进口牛对BoHV-1引起的IBR/IPV的检疫要求

首先要求出口国家官方确认输出牛的农场在过去1年内未发生传染性鼻气管炎临床病例，再对不同防控形势的国家采用不同的卫生管理措施。

5.1 对欧洲等一般不实行免疫接种的国家，按《OIE法典（第2013版）》进口到无BoHV-1 畜群的要求检疫。

5.2 对加拿大、美国等普遍实行免疫接种的国家，由于OIE 法典对从实行注苗国家进口动物如何进行检疫并没有规定，目前我们和这些国家签订的检疫议定书中要求：

5.2.1 从注苗农场选牛 做两次血清学试验（中和试验），比较抗体滴度不升高，两次试验采血间隔至少21天；对1 岁以上的种公牛做精液病毒分离试验，结果为阴性。

5.2.2. 从未注苗农场选牛 做两次血清学试验，结果为阴性，两次试验采血间隔至少21天。

5.3 对允许实行免疫接种的大洋洲国家，目前我国与这些国家商签的牛检疫议定书中对检疫要求如下：

在原产国兽医行政管理部门认可的隔离场所内隔离检疫至少30天，在进入隔离站前，对牛传染性鼻气管炎按 “ELISA或微量血清中和试验，血清稀释1：2为阴性，结果为阴性的牛在隔离场隔离检疫前接种灭活疫苗”。

如果来源农场阳性率超过50%，则全群淘汰。所有阴性牛在进入隔离场至少14天后，再次使用灭活疫苗进行免疫。

6 从大洋洲进口牛的BoHV-1检疫策略风险分析

为了更好地防范BoHV-1引起的IBR/IPV随进口牛传入国内，根据进口牛检疫的实践效果和BoHV-1疫苗技术和检测技术的进展对各个方案分析如下。（表1）

表1从大洋洲进口奶牛BoHV-1检疫方案和风险评价

方案1：我国从澳大利亚和新西兰进口奶牛的旧版议定书（分别是2002年10月17日和1997年12月3日签订）规定的检疫要求，是按照OIE法典进口到无BoHV-1 畜群的要求检疫，是非常严格的。但存在的问题是牛群到达国内后，仍然时常检出较高甚至很高的阳性率，不能顺利完成引种任务。方案风险高。

方案2：使用常规弱毒疫苗免疫，可以减轻临床症状和排毒，但疫苗本身存在风险，而且不能区

分自然感染和疫苗抗体，使得免疫后无法再检测。方案风险很高。

方案3：现行议定书（与澳大利亚是2009年6月20日签订，与新西兰是2009年6月16日签署）检疫要求，是在原有议定书的基础上，在出口农场检疫合格后增加了灭活苗免疫的程序。使用常规灭活疫苗免疫，疫苗本身无风险，可以减轻临床症状和排毒，可以降低病毒携带者的比率，但不能区分自然感染和疫苗抗体，使得免疫后无法再检测。从减少病毒携带者的数量和防止出现进口奶牛较高IBR阳性率的角度。方案风险低。

方案4：使用基因缺失弱毒疫苗免疫，可以减轻临床症状和排毒，但疫苗本身存在风险；能够区分自然感染和疫苗抗体，使得免疫后、出口前及到达国内后仍然可以检测，淘汰自然感染。方案风险高。

方案5：使用基因缺失灭活疫苗免疫，可以减轻临床症状和排毒，疫苗本身无风险；能够区分自然感染和疫苗抗体，使得免疫后、出口前及到达国内后仍然可以检测，淘汰自然感染，可降低风险。现已有成熟的商业化的基因缺失灭活疫苗及配套检测技术，经济成本可能略高。但为了国内畜牧业的安全，该方案至少是发展的方向，而且随着时间的推移和技术的发展，该方案一定越来越展现其优势。方案风险很低。

7 建议

经上述风险分析，建议优先考虑方案5，其次为方案3，再次为方案1，方案2和方案4为不可接受的方案。因此，建议的BoHV-1的检疫策略是：在进入出口隔离场前，对BoHV-1按 ELISA或微量血清中和试验，血清稀释1∶2为阴性，结果为阴性的牛在隔离场隔离检疫前接种基因缺失灭活疫苗；如果来源农场阳性率超过50%，则全群淘汰。在所有阴性牛在进入隔离场至少14天后，再次使用基因缺失灭活疫苗进行加强免疫；装船前十天进行针对BoHV-1自然感染的检测。在进口隔离场检疫时，进行针对BoHV-1自然感染的检测。

[1] Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals（2013）chapter 2.4.13. [EB/OL].（2014-01-19）[2014-05-16].http：//www.oie.int/en/international-standardsetting/terrestrial-manual/access-online/.

[2] Muylkensa B，Thirya J，Kirtena P. Bovine herpesvirus 1 infection and infectious bovine rhinotracheitis [J].Vet Res，2007，38：181-209.

[3] 宋德花，高明辉，刘晖. 牛传染性鼻气管炎研究进展[J].黑龙江畜牧兽医职业学院学报，2007（1）：33-35.

[4] Terrestrial animal health code（2013）chapter 11.11. [EB/ OL].（2014-02-03）[2014-05-16].http：//www.oie.int/en/ international-standard-setting/terrestrial-code/access-online/.

[5] 冯斌，秦贞奎，俞太尉.我国进口牛传染性鼻气管炎检疫政策回顾[J].中国动物检疫.1998（15）4：4-5.

[6] 周斌华，孔繁德，徐淑飞，等. 牛传染性鼻气管炎的危害和防检对策[J].中国动物检疫.2007（24）5：37-38.

[7]. Australian Government Department of Health and Ageing Office of the Gene Technology Regulator. The biology of bovine herpesvirus 1[R].2005.

[8] Pharo H J. Imported seropositive animals：assurance provided by serological tests[R]. Regulatory Authority，Ministry of Agriculture and Forestry，New Zealand 1999：73-75.

Study on the Quarantine Requirements of Bovine Herpesvirus Type 1 for Cattle Importation from Oceania into China

Chen Guoqiang1，Zhang Rui1，Chen Lei1，Jiang San1，Li Jingjing1，Zhou Meiling2，Wang Kaimin1，Tang Taishan1

（1.Jiangsu Entry/Exit Inspection and Quarantine Bureau，Nanjing，Jiangsu 21001；
2 Nanjing Agricultural University，Nanjing，Jiangsu 210095）

Bovine herpesvirus type 1（BoHV-1）can cause infectious bovine rhinotracheitis and infectious pustular vulvovaginitis（IBR/IPV），the most common disease found in the cattle imported from Oceania into China. To prevent it more effectively，on the basis of analyzing the characteristics of the infection，its prevention and control measures，the epidemiology and prevention and control in Oceania，the current quarantine requirements of OIE and China，the risk of five quarantine requirements for cattle importation from Oceania into China was analyzed and it was proposed that “All the negative animals shall be vaccinated with an inactivated vaccine” in the current protocol should be amended as “All the negative animals shall be vaccinated with an inactivated gene deleted vaccine which can differentiating infected from vaccinated cattle.”

Oceania；bovine herpesvirus type 1（BoHV-1）；cattle importation；quarantine requirement；risk analysis； public health

S851.34

：A

：1005-944X（2014）12-0061-04

质检总局2013IK034

陈国强