马兰中的五个酚性化合物

季 鹏，王国凯*，刘劲松，罗争辉，刘吉开，王 刚

1安徽中医药大学药学院，现代中药安徽省重点实验室，合肥 230031;2 中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室，昆明 650204

马兰为菊科马兰属植物马兰Kalimeris indica(L.)Sch-Bip 的带根全草，别名马菜、马兰头、泥鳅串、鸡儿肠、田边菊等。广泛分布于我国江苏、浙江、江西、福建、湖南、湖北、广东、海南、广西、四川、贵州等地，常见于田埂、草丛、林缘、溪边等潮湿处，具有非常丰富的研究资源［1］。马兰是多年生草本植物，其茎嫩叶肥、口味清香爽口、营养丰富，常作为野菜食用［2］。马兰常以全草或根入药，具清热解毒，散瘀止血，温肺止咳，散寒止痛，消积之功效。主治感冒发热，咳嗽，急性咽炎，扁桃体炎，流行性腮腺炎，传染性肝炎，胃、十二指肠溃疡等［3］。采用马兰治疗乙肝病的临床研究多有报道［4，5］，疗效显著。本研究组已经发表了一系列马兰的化学成分研究报道［6-9］，从马兰的乙醇提取物中分离到22 个化合物(包括三萜类、脂肪酸类、甾体类、蒽醌类等)，为了更加深入的探索马兰抗病毒活性的物质基础，本研究改进提取分离方法，采用热回流提取后，大孔树脂富集中小极性化合物，不同浓度乙醇洗脱分段后，再分别通过硅胶柱及凝胶柱等色谱分离，以期寻找到活性先导母体化合物，结果从马兰全草80 %乙醇提取物中分离鉴定了5 个酚性化合物，分别是汉黄芩素(1)、千层纸素A(2)、4-羟基苯乙酮(3)、7，4'-二羟基异黄酮(4)、芹菜素(5)，所有化合物均为首次从该属植物中分得。

1 仪器和材料

熔点由XRC-1 型显微熔点仪测定，四川大学科仪厂生产;EI-MS 由VG AutoSpec-3000 质谱仪测定;ESI-MS 由API Qstar Pulser 质谱仪测定;核磁共振由Bruker AVANCE Ⅲ-600、DRX-500、AV-400 核磁共振波谱仪(TMS 为内标);分析型和制备型HPLC 为Agilent 1100 HPLC，色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18和YMC 柱;柱层析硅胶(80～100 目和200～300目)以及GF254薄层硅胶板均为青岛海洋化工厂生产;Sephadex LH-20 为瑞典Amersham Biosciences 公司产品;AB-8 型大孔树脂为南开大学化工厂生产;显色方法为紫外灯下波长254 和365 nm 处观察荧光，10% 硫酸乙醇溶液和硫酸香草醛处理后加热显色及碘蒸气显色。

马兰药材2012 年4 月采自安徽合肥大蜀山，经安徽中医药大学方成武教授鉴定为菊科马兰属植物马兰Kalimeris indica (L.)Sch-Bip 的带根全草，凭证标本保存于安徽中医药大学天然药物化学教研室。

2 提取与分离

马兰干燥带根全草20 kg，80 %乙醇回流提取2次(300 L×2)，每次2 h，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，浓缩至无醇味后稀释至80 L(即每mL 提取液相当于原药材0.31 g)，通过AB-8 大孔树脂(干重30 kg)吸附，即树脂与药材重量比=1.2∶1，然后，分别用水、40 %、60 %、80 %乙醇依次洗脱，流速8 mL/min，每个部分各洗脱4 个柱体积(直径:柱高=20∶120 cm)，浓缩至浸膏后，得到4 个部分，80 %乙醇部分(120 g)上硅胶柱，石油醚-丙酮(100 ∶0 →0∶100)梯度洗脱得6 个组分(A、B、C、D、E、F、)。组分C(石油醚∶丙酮-50∶1)经硅胶柱，石油醚-丙酮(20∶1→0∶1)梯度洗脱得10 个亚组分，其中C2经sephadex LH-20 柱甲醇洗脱得到化合物1(22 mg)，组分D(石油醚∶丙酮-30∶1)经硅胶柱色谱，石油醚-丙酮(20∶1→0∶1)梯度洗脱得13 个亚组分，其中D3经sephadex LH-20 柱甲醇洗脱，得到化合物2(6 mg)。60%乙醇部分(200 g)上硅胶柱，二氯甲烷-甲醇(100∶0→0∶100)梯度洗脱得8 个组分(G、H、I、J、K、L、M、N)。组分I(二氯甲烷∶甲醇-50∶1)，上硅胶柱，氯仿-甲醇(50∶1→0∶1)梯度洗脱，得15 个亚组分，其中I3经sephadex LH-20 柱以三氯甲烷-甲醇(1∶1)洗脱，得到化合物3(7 mg)，I5经sephadex LH-20 柱，甲醇洗脱，再重结晶得到化合物4(10 mg)。I8经硅胶柱色谱以三氯甲烷-甲醇(30∶1)洗脱得到化合物5(12 mg)。

3 结构鉴定

化合物1 黄色针晶，mp.203～205 ℃，易溶于丙酮，盐酸镁粉反应阳性;ESI-MS m/z ［M-H］-为283，分子式为C16H12O5;1H NMR(CDCl3，600 MHz)δ:12.49(1H，s，5-OH)，7.52～7.56(3H，m，H-3'，4'，5')，7.89～7.90(2H，m，H-2'，6')，6.68(1H，s，H-3)，6.43(1H，s，H-6)，4.02(s，OCH3);13C NMR(CDCl3，150 MHz)δ:182.7(s，C-4)，163.7(s，C-2)，157.9(s，C-7)，155.5(s，C-5)，149.1(s，C-9)，132.2(d，C-4')，131.4 (s，C-1')，129.5 (d，C-3'，5')，127.0(s，C-8)，126.4(d，C-2'，6')，106.1(d，C-3)，105.5(s，C-10)，99.0(d，C-6)，62.3(q，OCH3)。以上数据与文献［10］报道一致，确定该化合物为汉黄芩素(wogonin)。

化合物2 淡黄色针状结晶，mp.202～204 ℃，易溶于丙酮，盐酸镁粉反应阳性，Molish 反应阴性;ESI-MS m/z［M-H］-为283，分子式为C16H12O5;1H NMR(acetone-d6，600 MHz)δ:12.59(1H，s，5-OH)，9.51(1H，s，7-OH)，8.11(2H，m，H-2'，6')，7.73～7.56(3H，m，H-3'，4'，5')，6.83(1H，s，H-3)，6.33(1H，s，H-8)，3.96(3H，s，OCH3);13C NMR(acetone-d6，150 MHz)δ:183.3(s，C-4)，164.4(s，C-2)，158.2(s，C-7)，153.9(s，C-5)，153.7(s，C-9)，132.8(d，C-4'，6)，132.3(s，C-1')，130.1(d，C-3'，5')，127.2(d，C-2'，6')，106.1(d，C-3)，105.4(s，C-10)，95.8(d，C-8)，61.9(q，OCH3)。以上数据与文献［11］报道一致，确定该化合物为千层纸素A(oroxylin A)。

化合物3 白色针晶，mp.108～111 ℃，ESI-MS m/z ［M+H］+137，［M+Na］+159，分 子 式C8H802;1H NMR(acetone-d6，600 MHz)δ:7.89(2H，d，J=8.8 Hz，H-2，6)，6.91(2H，d，J=8.8 Hz，H-3，5)，2.48(3H，s，CH3);13C NMR(acetone-d6，150 MHz)δ:199.2(s，C-7)，162.7(s，C-4)，131.5(d，C-2，6)，130.4(s，C-1)，116.0(d，C-3，5)，26.3(q，C-8)。以上数据与文献［12］报道一致，确定该化合物为4-羟基苯乙酮(4-hydroxyacetophenone)。

化合物4 白色粉末，mp.309～311 ℃，ESI-MS m/z［M+H］+为255，分子式C15H10O4;1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ:8.12(1H，s，H-2)，7.88(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，6.94(1H，d，J=8.5 Hz，H-6)，6.91(1H，s，H-8)，7.36(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，6')，6.84(2H，d，J=8.0 Hz，H-3'，5');13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ:178.3(s，C-4)，164.7(s，C-7)，158.8(s，C-4')，158.2(s，C-9)，154.8(d，C-2)，131.5(d，C-2'，6')，128.6(d，C-5)，126.0(s，C-1')，124.4(s，C-3)，118.2(s，C-10)，116.5(d，C-6)，116.3(d，C-3'，5')，103.3(d，C-8)。以上数据与文献［13］报道基本一致，确定该化合物为7，4'-二羟基异黄酮(7，4'-dihydroxyisoflavone)。

化合物5 淡黄色无定形粉末，mp.210～212℃，ESI-MS m/z［M-H］-为269，分子式C15H10O5;1H NMR(CD3OD，600 MHz)δ:7.37(2H，d，J=8.6 Hz，H-2'，6')，6.91(2H，d，J=8.6 Hz，H-3'，5')，6.58(1H，s，H-3)，6.42(1H，d，J=2.2 Hz，H-8)，6.18(1H，d，J=2.2 Hz，H-6);13C NMR(CD3OD，150 MHz)δ:183.9(s，C-4)，166.9(s，C-2)，166.3(s，C-7)，163.3(s，C-9)，162.9(s，C-4')，159.6(s，C-5)，129.6(d，C-2'，6')，123.3(s，C-1')，117.1(d，C-3'，5')，105.2(s，C-10)，103.8(d，C-3)，100.4(d，C-6)，95.3(d，C-8)。以上数据与文献［14］报道一致，确定该化合物为芹菜素(apigenin)。

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