酶法乳糜定性试验的快速检测与临床应用

朱学涛

(连云港市第一人民医院检验科，江苏连云港222002)

酶法乳糜定性试验的快速检测与临床应用

朱学涛

(连云港市第一人民医院检验科，江苏连云港222002)

目的用酶法实现乳糜定性试验的快速检测和临床应用。方法以尿液、胸腔积液及腹腔积液作为标本，用临床生化酶法测三酰甘油，和样品在滤纸片上化学反应，并与阴性空白进行对照比较判别结果。同时用传统的乙醚抽提后经苏丹Ⅲ染色法进行乳糜定性试验。结果乳糜试验阳性标本在白色滤纸片上呈现出红色，与阴性空白比较判断对比结果。32例胸腔积液及22例腹腔积液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验阴阳性结果完全一致；624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验结果选用Kappa一致度系数κ评价，κ=0.9953，表明酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验结果间具有很高的一致性。结论酶法乳糜定性试验与传统的乙醚抽提后经苏丹Ⅲ染色法进行乳糜定性试验结果间具有很高的一致性，并且具有快速简便、特异性强等优点，适用于临床上的尿液、胸腔积液及腹腔积液等样本的检测，便于在社区基层医院和诊所开展应用。

酶法；乳糜定性试验；乙醚；三酰甘油

乳糜液是经肠道吸收的脂肪皂化后形成，是乳糜微粒与蛋白质混合而成的乳化状态的浑浊液体，临床上由于各种原因致淋巴引流不畅而未能进入血液循环，以至逆流至泌尿系淋巴管中时，可致淋巴管内压力升高，曲张破裂，乳糜液流入尿中使尿液形成不同程度的乳白色。另外我国的肝硬化发病率较高，临床上由于肝硬化合并的腹水多为单纯漏出液，乳糜腹水仅占0.5%～1.3%[1]，如何快速准确地从大量的样本中检测出乳糜阳性的样本，这就成为一个很现实的问题。淋巴管核素显像用于乳糜性胸腹水、乳糜性尿液定性诊断的价值虽然很大，但成本高，副作用大是其弊端。传统的乙醚抽提后经苏丹Ⅲ染色法进行乳糜定性试验过程乙醚易污染环境，整个试验操作繁琐，样本从送检到回报结果往往需要较长时间。为了满足临床的需要，使乳糜定性试验操作更简便，结果更准确，作者根据现在临床生化酶法测三酰甘油(TG)特异性强，样本用量少，试剂易得等优点，建立了酶法乳糜尿定性试验的快速检测的方法，在临床上取得了满意效果。

1 材料与方法

1.1 标本来源收集3年来本院住院及门诊的新鲜标本678例，包括尿液624例，胸腔积液32例，腹腔积液22例。

1.2 实验材料TG检测试剂盒(酶法)为宁波美康生物科技有限公司提供。滤纸片可用裁剪普通滤纸在玻片上使用。

1.3 方法TG测定参考中华医学会检验分会建议的常规方法[2]及TG测定的标准化程序进行检测[3]，检测过程中所用滤纸和玻片应防止甘油或氧化还原物质的污染，不能有油污。恒温水浴箱温度控制在37℃，10min后从水浴箱内取出观察结果,1h后不可进行结果的判读。TG检测试剂盒在有效期内使用，注意及时更换。具体操作：首先将两片滤纸片分开放在清洁干燥的玻片上，滴加3～5滴(150～250μl)三酰甘油试剂R1于滤纸片上，之后滴加两滴(100μl)尿液，30s后滴加三酰甘油R2两滴(100μl)，同时使用蒸馏水做阴性空白对照，37℃水浴箱内取出10min后观察结果，观察滤纸片是否变为红色，红色为阳性。传统的乙醚抽提乳糜尿定性试验按照全国临床检验操作规程操作[4]，取待测样本5～10ml，加乙醚2～3ml，充分混合振摇后，使脂肪溶于乙醚，静置数分钟后，2000r/min离心5min，吸取乙醚与尿液交界层涂片，加苏丹Ⅲ溶液染色，镜检观察是否有橘红色脂肪球。结果报告“阴性”或“阳性”。

2 结果

32例胸腔积液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验6例均为阳性，26例均为阴性；22例腹腔积液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验2例均为阳性，20例均为阴性；尿液624例，酶法乳糜定性试验122例阳性，乙醚抽提染色乳糜定性试验120例阳性，结果详见表1。624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验结果选用Kappa一致度系数κ评价，κ=0.9953，表明酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验结果间具有很高的一致性。

表1 624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验结果

3 讨论

传统的乳糜定性试验操作繁琐，脂肪抽提不易控制，特别是在测定脂肪含量较低的样本时，若抽提不彻底，苏丹Ⅲ染色后镜检很容易导致假阴性；而检测过程中所用容器受到其他油类污染时，可导致假阳性。32例胸腔积液及22例腹腔积液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验阴阳性结果完全一致；624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验结果选用Kappa一致度系数κ评价，κ= 0.9953，表明酶法和乙醚抽提染色乳糜定性试验结果间具有很高的一致性。624例尿液样本酶法乳糜定性试验122例阳性，乙醚抽提染色乳糜定性试验120例阳性，其中的2例主要由于输液等原因造成尿液稀释使尿液中脂肪含量降低，导致未能检测出。酶法检测TG特异性强，灵敏度高，对TG以外的其他油类杂质不发生反应，试剂易得，所用滤纸应防止甘油或氧化还原物质的污染，水浴箱内取出后应立即观察结果，生成的红色醌亚胺类化合物在数小时后才可被还原。酶法乳糜定性试验的快速检测方法解决了在生化反应试管中观察不明显，并且使用试剂量大等问题，阳性样本在白色滤纸片上呈现生成的红色醌亚胺类化合物，色差明显，结果易于判别。

由于医学模式和人们对健康理念的改变，自我保护意识的增强，人们对医疗、保健意识的了解及关心程度不断提高，需要经常了解身体及疾病进展情况，这些需求促使临床检验仪器、试剂向携带便捷，操作方便，结果即时的方向发展，实验技术向小型化、简单化、“床边”化发展[5]。POCT在临床上的大量应用，是当今医院在病人护理和成本管理方面的一种富有成效的方法，在各临床科室和中心实验室得到广泛的应用[6]。该方法为乳糜定性快速检测提供一种手段，还为床旁检验(POCT)的发展提供参考，被测成分直接与载体上的试剂进行呈色反应，实现即时即地检验，甚至自我检验。

文献报道制备不同乳糜指数标准管快速进行血浆乳糜程度的判定[7]。定量检测腹水只有TG＞1.25mmol/L时才能诊断为乳糜性腹水[8]。那么酶法乳糜定性试验的快速检测，可以根据滤纸片颜色的深浅判断TG的含量，TG含量又能反映乳糜微粒的多少，从而粗略判定疾病损伤程度。根据酶法检测不同的浓度TG呈现颜色深浅不同，制作成颜色深浅不一的色卡对照标准条，并在颜色深浅不一的色卡标注TG的浓度，这样就可以实现乳糜试验的定量，尚有待进一步研究。

酶法乳糜定性试验检测方法快速简便，高效率低成本，特异性强，试剂易得，样本用量少等优点，适用于临床上的尿液、胸腔积液及腹腔积液等样本的检测，便于在社区基层医院和诊所开展应用。

[1]王海滨,叶玲英,陈岳祥,等.肝硬化乳糜性腹水治疗[J].中华消化杂志,2008,28(2):431-432.

[2]鄢盛恺.关于临床血脂测定的建议[J].中华检验医学杂志,2003,26 (3):182-184.

[3]鄢盛恺.应更加关注三酰甘油的临床检测与应用[J].现代检验医学杂志,2011,26(3):1-4.

[4]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006：286.

[5]丛玉隆,朱士俊.检验医学面临的挑战与学科建设和管理[J].中华检验医学杂志,2002,25(2):116-118.

[6]万本愿,姜青龙.POCT的临床应用及存在问题[J].实验与检验医学,2011,29(4):387-390.

[7]詹泰然,周淑琴.血液成分制备时血浆乳糜程度判定[J].实验与检验医学,2008,26(1):67.

[8]徐凯峰,胡晓文,田欣伦,等.乳糜性胸腔积液123例临床分析[J].中华医学杂志,2011,91(7):466-468.

R446.12+2,R446.19

A

1674-1129(2014)05-0538-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.05.017

2014-06-17；

2014-07-14)

朱学涛，男，1976年生，本科学历，主管检验师，学士学位，主要从事临床检验，研究方向为血液体液学实验诊断。