健脾化湿颗粒对IBS-D模型大鼠血清P物质及ET表达的影响＊

赵立波，王迎寒，刘玉玲，张晓峰，董岫岩，郭洪杰△

（1.承德护理职业学院涉外护理系，河北承德 067000；2.河北省中药研究与开发重点实验室，河北承德 067000；3.承德医学院附属肛肠医院中医内科，河北承德 067000）

健脾化湿颗粒对IBS-D模型大鼠血清P物质及ET表达的影响＊

赵立波1，王迎寒2，刘玉玲2，张晓峰2，董岫岩3，郭洪杰3△

（1.承德护理职业学院涉外护理系，河北承德 067000；2.河北省中药研究与开发重点实验室，河北承德 067000；3.承德医学院附属肛肠医院中医内科，河北承德 067000）

目的观察健脾化湿颗粒对腹泻型肠易激综合征（IBS-D）大鼠血清P物质（SP）及内皮素（ET）表达的影响，探讨其治疗机制。方法取清洁级Wistar大鼠60只，平均分为对照组、模型组及健脾化湿颗粒低、中、高剂量组和阳性对照的匹维溴铵组。除对照组外各组大鼠束缚应激配合番泻叶煎剂溶液灌胃复制模型。造模成功后，予以相应药物治疗。实验过程中观察各组大鼠大便性状及大便次数。实验结束后酶联免疫吸附测定（ELISA）观察血清中ET、SP水平变化。结果与模型组比较，各治疗组大鼠腹泻症状明显改善；健脾化湿高剂量组与匹维溴铵组大鼠症状改善更为明显，组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。高剂量组、中剂量组、匹维溴铵组与模型组比较，血清SP水平下降明显，差异有统计学意义（P＜0.05）；高、中剂量组与匹维溴铵组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。高剂量组、中剂量组、匹维溴铵组与模型组比较，血清ET水平升高明显，差异有统计学意义（P＜0.05），其中健脾化湿中、高剂量组组间比较，差异有统计学意义（P＜0.05），表明有一定剂量依赖关系。结论健脾化湿颗粒可明显改善IBS-D模型大鼠胃肠功能，其作用机制可能与降低血清SP水平，提高血清ET水平有关。

肠易激综合征；腹泻；P物质；内皮素；健脾化湿；中草药

肠易激综合征（irritable bowel syndrome，IBS）是常见的一种胃肠功能紊乱性疾病，是以腹痛、腹部不适、伴有大便性状改变和排便行为改变为特征的症候群［1］。临床分为腹泻型（IBSD）、便秘型（IBS-C）、腹泻便秘交替型（IBS-A）和未定型（IBSU）4个亚型，其中以IBS-D最为常见［2］。其发病机制尚不明确，目前公认为脑－肠轴障碍［3］及胃肠肽激素表达异常在IBS-D的发生、发展中起着重要作用［4］。西医治疗本病主要采用对症治疗，以个体化为前提的综合治疗方法［5］。在合理饮食，避免生冷刺激等前提下配合药物治疗。虽见效迅速，便远期效果不佳，复发率高。而中医药治疗IBS-D已取得了良好效果，长期用药不良反应小，远期效果好［6］。本实验从实验大鼠血清胃肠肽激素P物质（SP）、内皮素（ET）水平的变化，探讨健脾化湿颗粒治疗IBS-D可能的作用机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 清洁级6周龄 Wistar大鼠60只，雌雄各半，体质量（170±20）g，合格证编号：Scxk（冀）2009-0004，由河北省实验动物中心提供；番泻叶加水浸泡煎煮浓缩至生药0.6g／mL备用；健脾化湿颗粒：由炙黄芪、益智仁、炒白术、砂仁、防风、炒白芍、陈皮、炙甘草、茯苓、乌药组成，由承德医学院中药研究所分析室制备完成；匹维溴铵片（批号：624065），法国苏威制药公司生产，用蒸馏水配成3mg／mL溶液。酶联免疫吸附测定（ELISA）ET、SP试剂盒（批号：20120423），购自德国博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1 实验动物分组及造模 适应性饲养1周后，平均分为对照组、模型组、健脾化湿颗粒低剂量组（低剂量组）、健脾化湿颗粒中剂量组（中剂量组）、健脾化湿颗粒高剂量组（高剂量组）和阳性对照（匹维溴铵组），每组各10只。IBS-D动物模型采用乔氏法造模［7］。除对照组外，其余各组大鼠实验前10h禁食，自由饮水。模型组、匹维溴组及低、中、高剂量组大鼠分别给予番泻叶煎剂（0.6g／mL）灌胃（每只按10mL／kg），每日1次，在灌服完番泻叶煎剂1h后即用粗制棉绳束缚大鼠的两后肢，使之行动不便，烦躁不安，造成一定的应激刺激，束缚2h，持续2周；而对照组全程只予以生理盐水灌胃（每只10mL／kg）。每天观察大鼠毛色、大便、饮食等情况。对照组大鼠便次少、大便成型、进食稳定、毛色光亮、活跃。而模型组大鼠皮毛松弛、无光泽、便质稀、便次多、进食量下降、饮水量增多、臭秽味明显。上述模型鼠变化情况与文献记载及临床IBS-D患者症状相一致，且上述症状持续存在，提示IBS-D动物模型成功。

1.2.2 治疗方法 健脾化湿颗粒低、中、高剂量组给药浓度分别为生药1.5g／mL、2.5g／mL、4.0g／mL，匹维溴铵组给药浓度为3mg／mL，均以每只10mL／kg剂量灌胃给药。对照组和模型组给予等容量生理盐水。每天1次，连续2周。

1.2.3 一般情况观察 每天观察各组大鼠饮食、饮水、排泄、活动、精神状态、毛色等情况。

1.2.4 血清中SP、ET水平测定方法 实验结束后，各组大鼠乙醚麻醉，自腹主动脉取血5mL，采血时不加抗凝剂，室温，静置1～2h，1 000×g离心15min，取上清液－20℃冰箱中分装保存备用。ELISA检测血清中SP、ET水平，操作步骤严格按照剂盒说明进行。

1.3 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件进行分析，所有测定结果用±s表示，各组间计量数据的差异比较采用单因素方差分析。取α＝0.05为检验标准，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

本结果显示，IBS-D模型大鼠血清SP水平显著高于对照组（P＜0.01），匹维溴铵组、高剂量组、中剂量组、低剂量组与模型组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。高、中剂量组与匹维溴铵组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。提示健脾化湿颗粒可明显改善IBS-D模型大鼠血清SP水平，且有一定的剂量依赖关系。IBS-D模型大鼠血清ET水平较对照组明显降低（P＜0.01），各治疗组大鼠血清ET水平较模型组均增高，其中中、高剂量组差异有统计学意义（P＜0.01）。与匹维溴铵组比较，中、高剂量组效果明显，但差异无统计学意义（P＞0.05）。而低剂量组效果较差（P＜0.01），见表1。

表1 各组大鼠胃肠肽激素SP、ET表达比较（±s，pg／mL）

表1 各组大鼠胃肠肽激素SP、ET表达比较（±s，pg／mL）

a：P＜0.01，b：P＜0.05，与对照组比较；c：P＜0.01，d：P＜0.05，与模型组比较。

组别 n SP ET对照组 10 46.56±9.67c 258.63±15.01c模型组 10 78.62±8.98a 212.67±15.38a匹维溴铵组 10 58.88±7.34ad 251.92±16.87c低剂量组 10 67.71±7.29a 228.58±16.51a中剂量组 10 60.91±10.21ad 242.58±16.31bd高剂量组 10 54.59±7.05c 247.72±15.54c

3 讨 论

近年来大量实验研究表明，IBS-D的发病与胃肠肽激素水平异常密切相关［8］。胃肠激素种类繁多，其与神经系统一起调节消化器官的运动、分泌和吸收功能［9］。SP、ET是两种重要的胃肠激肽。SP是第1个被确认的、双重分布的由11个氨基酸组成的多肽［10］，在肠道主要分布于近端小肠和结肠，它既可以激素的形式，亦可以神经递质形式参与胃肠道运动的调控。可促进胃肠平滑肌和括约肌收缩、胃肠蠕动，参与内脏痛觉反射及扩张内脏血管等功能。谢建群等［11］实验研究发现，IBS-D模型大鼠血浆SP水平明显升高，治疗后血清SP水平明显下降；而有的学者临床研究发现IBS患者血浆SP未发现显著变化［12］。ET是由21个氨基酸组成的活性多肽［13］，是一种神经递质和调节肽，在胃、空肠、回肠和结肠均有ET和ET的受体存在，其可使平滑肌收缩，参与胃肠节律运动调节。王丽华等［14］研究结果显示，脾气虚IBS组患者较对照组血清ET明显降低（P＜0.01），致胃肠运动失调。但也有学者研究发现，IBSD（湿热证）患者血清ET明显高于对照组，治疗后血清ET水平明显低于治疗前。

本实验研究发现，IBS-D模型大鼠胃肠功能紊乱，便次多、便质稀同时血清SP、ET水平均有明显改变。其中IBS-D模型大鼠血清中SP水平明显升高，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。治疗后，健脾化湿各剂量组、匹维溴铵组大鼠血清中SP水平显著低于模型组，差异有统计学意义（P＜0.05）。IBS-D模型大鼠血清中ET水平较对照组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。各组治疗后血清ET水平较模型组均有增高。其中、高剂量组与匹维溴铵组ET水平升高最为明显。提示IBS-D模型大鼠发病机制可能与血清SP、ET水平表达异常有关。

IBS-D属中医“泄泻”“痛泄”“久泄”等的范畴［15］。本病病位在肠，基本病机为肝郁脾虚、脾虚湿盛。健脾化湿颗粒在经验方健脾化湿汤基础上，通过现代工艺手段改变剂型，既保存了原有的疗效，又适应现代社会的用药理念。方中重用炙黄芪、益智仁，辅以炒白术、砂仁补气健脾和芳香化湿；防风辛能散肝，香能舒脾，风能胜湿止泻，为理脾引经之要药；陈皮、茯苓行气健脾，燥湿和胃；白芍养血敛阴，柔肝缓急，白芍配伍甘草又可缓急止痛。乌药行气止痛，全方紧紧抓住脾虚湿盛和肝气郁结环节，诸药配合紧密，健脾化湿，疏肝解郁，从而使肝气条达，脾胃升降功能恢复正常而腹痛、便溏症状消除。

综上所述，在改善IBS-D模型大鼠腹痛、便次增多等方面，健脾化湿颗粒对IBS-D大鼠具有很好的治疗效果，其作用机制可能是通过降低血清中SP水平，提高血清中ET水平，减弱神经介导的胃肠道运动与分泌，提高内脏痛阈，消除肠道过敏症状，改善腹痛或腹部不适、排便异常等症状而完成。

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Effect of Jianpihuashi Granules on expression of serum substance P and ET of diarrhea-predominant irritable bowel syndrome rats＊

ZhaoLibo1，WangYinghan2，LiuYuling2，ZhangXiaofeng2，DongYouyan3，GuoHongjie3△
（1.DepartmentofForeign-RelatedNursing，ChengdeNursingVocationalCollege，Chengde，Hebei067000，China；
2.HebeiProvincialKeyLaboratoryofResearchandDevelopmentofChineseHerbs，Chengde，Hebei067000，China；
3.DepartmentofChineseInternalMedicine，AffiliatedAnorectalHospital，ChengdeMedicalCollege，Chengde，Hebei067000，China）

ObjectiveTo observe the effect of Jianpihuashi（JPHS）Granules on the expression of substance P（SP）and endothelin（ET）in diarrhea-predominant irritable bowel syndrome（IBS-D）rats and to explore its therapeutic mechanism.MethodsSixty clean-level Wistar rats were randomly divided into the control group，model group，low-dose，middle-dose and high-dose JPHS Granules groups and the positive control group（Dicetel group）.Except the control group，the other groups were performed the restraint stress combined with folium sennae decoction by gavage to establish D-IBS rat model.After the success of the model construction，the corresponding medication was given.The stool property and times were observed during the experiment.After the end of the experiment，ELISA was applied to detect the change of ET and SP levels.ResultsCompared with the model group，the diarrhea symptoms in the various medication groups were obviously improved；which in the high-dose JPHS Granules group and the Dicetel group were improved more significantly，but the difference between these two groups had no statistical significance.Compared with the model group，the serum SP level in the high-dose，middle-dose JPHS granules groups and the Dicetel group was obviously decreased，the difference showed the statistical significance（P＜0.05）.Compared with the model group，serum ET level in the highdose，middle-dose JPHS Granules groups and the Dicetel group was obviously increased，the difference showing statistical significance（P＜0.05），in which，the difference between the high-dose and the middle-dose JPHS Granules groups had statistical significance（P＜0.05），which indicating that the certain dose-dependence relation existed between them.ConclusionJPHS Granules can obviously improve the gastrointestinal function of IBS-D model rats，its effect mechanism may be related with decreasing the serum SP level and increasing the serum ET level.

irritable bowel syndrome；diarrhea；substance P；endothelin；invigorating spleen for eliminating dampness；chinese herbal medicine

10.3969／j.issn.1671-8348.2014.10.019

A

1671-8348（2014）10-1206-02

2010年河北省科技支撑计划资助项目（10276105D-45）；2013年河北省科技支撑资助项目（13277797D）。

赵立波（1973－），高级讲师，本科，主要从事中医药治疗消化系统疾病的研究。△

，Tel：（0314）2291206；E-mail：guohongjie62＠163.com。

book=1210,ebook=451

2013-10-10

2013-12-07）

·论 著·