HPLC法测定肾炎片中芦丁的含量

刘琴 陈美玲 高晓艳 凌娅

HPLC法测定肾炎片中芦丁的含量

刘琴 陈美玲 高晓艳 凌娅

目的建立肾炎片中芦丁的含量测定方法。方法采用水浴回流提取, 高效液相色谱法(HPLC)测定法, 用C18柱, 以乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液(16:6:78)为流动相, 检测波长：360 nm。结果用50%乙醇水浴回流30 min的方法提取肾炎片中芦丁, HPLC法测定芦丁含量, 精密度RSD为1.1%, 重复性RSD为1.2%, 加样回收率为99.6%。结论采用回流提取HPLC法测定肾炎片中芦丁方法可行。

肾炎片；芦丁；高效液相色谱法

肾炎片处方由一枝黄花、车前草、马鞭草、白前、白茅根、葫芦壳六种药材组成, 具有清热解毒、 利水消肿的功效。用于急慢性肾炎和泌尿道感染等症。现行质量标准为部颁标准《中药成方制剂》第6册WS3-B-1152-92-2005, 无含量测定项。为更好控制产品质量, 对本品中芦丁进行含量测定方法的研究。参考目前同类制剂测定芦丁含量的方法［1,2］, 本文采用HPLC对肾炎片中芦丁含量进行研究。

1 仪器与试药

1.1仪器 高效液相色谱仪(Agilent 1100), UV2401 PC型紫外-可见分光光度计, C18色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm Agilent)。

1.2试药 肾炎片来源于江苏康缘药业股份有限公司, 芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所；乙腈、甲醇为色谱纯, 水为自制超纯水, 冰醋酸、95%乙醇、无水甲醇、无水乙醇为分析纯。

2 方法学考察与结果

2.1色谱条件 色谱柱为Phenomenex luna C18(250 mm× 4.6 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-甲醇-0.4%醋酸溶液(16:6:78)［3］；检测波长360 nm；柱温30℃。

2.2对照品溶液的制备 精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品2.931 mg, 置100 ml容量瓶中, 加甲醇溶解, 并稀释至刻度, 摇匀, 即得, 浓度为29.31 μg/ml。

2.3供试品溶液的制备［3］精密称取3 g, 置250 ml平底烧瓶中, 精密加入50%乙醇50 ml, 水浴回流30 min提取, 放冷,再称定重量, 用50%乙醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过, 取续滤液, 即得。

3 方法学验证

3.1准确度 取已知含量的样品(芦丁含量：0.48 mg/g)9份,每份1.5 g, 精密称定, 置烧瓶中, 第1～3份分别加入对照品1.15 mg, 第4～6份分别加入对照品1.44 mg, 第7～9份分别加入对照品1.73 mg, 制备供试品溶液, 依法测定, 计算芦丁的平均回收率为99.6%, RSD为1.5%, 该方法准确度良好。

3.2重复性 取样品, 按供试品溶液制备方法制备, 平行制备6份, 测定其含量结果分别为0.168, 0.172, 0.168, 0.172, 0.168, 0.170, 计算6个测定结果的相对标准偏差RSD为1.2%,试验结果表明, 该方法重复性良好。

3.3精密度 取对照品溶液重复进样6次, 计算其峰面积RSD为0.4%, 结果表明精密度良好。

3.4专属性验证 取按处方及制备工艺制备不含一枝黄花的阴性供试品, 按供试品溶液制备方法制成阴性供试品溶液。取对照品溶液、阴性供试品溶液与供试品溶液同时测定, 结果表明, 本方法专属性良好, 阴性无干扰。见图1。

3.5线性关系考察 精密称取芦丁对照品10.15 mg, 置100 ml量瓶中, 用甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀。精密吸取上述溶液1、2、5、6、7、10 ml, 分别置20 ml容量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀。在已确定的色谱条件下, 分别吸取上述7份对照品溶液进样10 ul, 测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标, 芦丁浓度为横坐标绘制标准曲线, 计算得回归方程：Y=9.8605X-0.4489, r=1。表明芦丁在5.075～101.5 μg范围内线性关系良好。见图1。

3.6稳定性考察 取供试品溶液, 室温放置, 依上述方法分别在0、2、4、8、12、24 h测定6次。结果芦丁峰面积的RSD为0.4%, 表明供试品溶液在24 h内基本稳定。见图1。

4 讨论

4.1检测过程中通过查阅参考文献及对照品溶液的全波长扫描效果, 对检测波长进行选择, 以溶剂为空白在200～400 nm范围内绘制吸收光谱图。实验表明, 芦丁在360 nm具最大吸收, 当采用360 nm为检测波长时, 芦丁检测灵敏度高,杂质峰较少, 基线较平稳, 且杂质均不干扰测定, 故选择360 nm为其检测波长。

4.2本试验采用水浴回流法提取, HPLC测定肾炎片中芦丁的含量, 方法简便、快捷、准确, 适合该制剂的含量测定。

［1］ 赵海云, 康君慧.HPLC法测定肾复康胶囊中芦丁的含量.陕西中医学院学报, 2008, 31(3):59-60.

［2］ 孙秋, 高莹莹, 常波.痔速宁片中芦丁的含量.中国医药指南, 2011, 9(34):304-305.

［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京：化学工业出版社,2010:凡例.

2014-07-30］

222047 江苏康缘药业股份有限公司

凌娅